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Hapten Mediated Display and Pairing of Recombinant Antibodies Accelerates Assay Assembly for Biothreat Countermeasures

机译：半抗原介导的展示和重组抗体的配对加快了生物威胁对策的检测组装

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A bottle-neck in recombinant antibody sandwich immunoassay development is pairing, demanding protein purification and modification to distinguish captor from tracer. We developed a simple pairing scheme using microliter amounts of E. coli osmotic shockates bearing site-specific biotinylated antibodies and demonstrated proof of principle with a single domain antibody (sdAb) that is both captor and tracer for polyvalent Marburgvirus nucleoprotein. The system could also host pairs of different sdAb specific for the 7 botulinum neurotoxin (BoNT) serotypes, enabling recognition of the cognate serotype. Inducible supE co-expression enabled sdAb populations to be propagated as either phage for more panning from repertoires or expressed as soluble sdAb for screening within a single host strain. When combined with streptavidin-g3p fusions, a novel transdisplay system was formulated to retrofit a semi-synthetic sdAb library which was mined for an anti-Ebolavirus sdAb which was immediately immunoassay ready, thereby speeding up the recombinant antibody discovery and utilization processes.
机译：重组抗体夹心免疫分析开发的瓶颈正在配对，需要蛋白质纯化和修饰以区分捕获蛋白和示踪剂。我们开发了一个简单的配对方案，使用的是微升量的带有特定位点生物素化抗体的大肠杆菌渗透性休克，并用单域抗体（sdAb）证明了原理，该抗体既是多价马尔堡病毒核蛋白的捕获剂又是示踪剂。该系统还可容纳对7种肉毒杆菌神经毒素（BoNT）血清型具有特异性的不同sdAb对，从而能够识别同源血清型。诱导型supE共表达使sdAb群体能够以噬菌体的形式进行繁殖，以便从库中进行更多淘选，或表达为可溶性sdAb以便在单个宿主菌株中进行筛选。当与抗生蛋白链菌素-g3p融合体结合使用时，配制了新型反式展示系统以改造半合成的sdAb文库，该文库用于抗埃博拉病毒sdAb的提取，可立即进行免疫测定，从而加快了重组抗体的发现和利用过程。

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