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Multispectral live-cell imaging

机译：多光谱活细胞成像

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Fluorescent proteins and vital dyes are invaluable tools for studying dynamic processes within living cells. However, the ability to distinguish more than a few different fluorescent reporters in a single sample is limited by the spectral overlap of available fluorophores. Here, we present a protocol for imaging live cells labeled with six fluorophores simultaneously. A confocal microscope with a spectral detector is used to acquire images, and linear unmixing algorithms are applied to identify the fluorophores present in each pixel of the image. We describe the application of this method to visualize the dynamics of six different organelles, and to quantify the contacts between organelles. However, this method can be used to image any molecule amenable to tagging with a fluorescent probe. Thus, multispectral live-cell imaging is a powerful tool for systems-level analysis of cellular organization and dynamics.
机译：荧光蛋白和重要染料是研究活细胞内动态过程的宝贵工具。但是，在一个样品中区分多个不同的荧光报告分子的能力受到可用荧光团光谱重叠的限制。在这里，我们提出了一种协议，用于同时用六个荧光团标记的活细胞成像。使用带有光谱检测器的共聚焦显微镜来获取图像，并应用线性解混算法来识别图像中每个像素中存在的荧光团。我们描述了此方法的应用，以可视化六个不同细胞器的动力学，并量化细胞器之间的接触。然而，该方法可用于使任何适合用荧光探针标记的分子成像。因此，多光谱活细胞成像是用于细胞组织和动力学的系统级分析的强大工具。

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