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Multispectral Live-Cell Imaging

机译：多光谱活细胞成像

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Fluorescent proteins and vital dyes are invaluable tools for studying dynamicprocesses within living cells. However, the ability to distinguish more than afew different fluorescent reporters in a single sample is limited by the spectraloverlap of available fluorophores. Here, we present a protocol for imaging livecells labeled with six fluorophores simultaneously. A confocal microscope witha spectral detector is used to acquire images, and linear unmixing algorithmsare applied to identify the fluorophores present in each pixel of the image.We describe the application of this method to visualize the dynamics of sixdifferent organelles, and to quantify the contacts between organelles. However,this method can be used to image any molecule amenable to tagging with afluorescent probe. Thus, multispectral live-cell imaging is a powerful tool forsystems-level analysis of cellular organization and dynamics.
机译：荧光蛋白和重要染料是用于研究活细胞内的动态生物的宝贵工具。 然而，在单个样品中区分更多类似的不同荧光报告者的能力受到可用荧光团的光谱纵板的限制。 在这里，我们介绍了一种用于同时用六种荧光团标记的诱捕肝脏的协议。 具有频谱检测器的共聚焦显微镜用于获取图像，并且应用于识别图像的每个像素中存在的荧光团的线性解混算法。我们描述了这种方法的应用来可视化六分析细胞器的动态，并量化触点 细胞器。 然而，该方法可用于将任何分子图像均匀地与Af荧光探针标记。 因此，多光谱实况细胞成像是蜂窝组织和动态的强大工具。

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