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【2h】

Development and validation of a high-throughput stereoselectiveLC-MS/MS assay for bupropion hydroxybupropion erythrohydrobupropion andthreohydrobupropion in human plasma

机译：高通量立体选择剂的开发和验证LC-MS / MS法测定安非他酮羟基安非他酮赤氢安非他酮和人血浆中的苏氢安非他酮

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A stereoselective analytical method was developed and validated for the quantification of bupropion, and principle metabolites hydroxybupropion, erythrohydrobupropion and threohydrobupropion in human plasma. Separation of individual enantiomers (R)-bupropion, (S)-bupropion, (R,R)-hydroxybupropion, (S,S-hydroxybupropion), (1S,2S)-threohydrobupropion, (1R,2R)-threohydrobupropion, (1R,2S)-erythrohydrobupropion, and (1S,2R)-erythrohydrobupropion was achieved utilizing an α1-acid glycoprotein column within a 12-minute run time. Chromatograph separation was significantly influenced by mobile phase pH and variability between columns. Analytes were quantified by positive ion electrospray tandem mass spectrometry following plasma protein precipitation with 20% trichloroacetic acid. Identification of erythrohydrobupropion enantiomer peaks and threohydrobupropion enantiomer peaks was achieved by sodium borohydride reduction of enantiopure (R)- and(S)-bupropion. Initial assay validation and sensitivitydetermination was on AB Sciex 3200, 4000 QTRAP, and 6500 mass spectrometers.Accuracy and precision were within 15% for each analyte. The assay wasfully validated over analyte-specific concentrations using an AB Sciex 3200 massspectrometer. Intra- and inter-assay precision and accuracy were within12% for each analyte. The limits of quantification for bupropion(R and S), hydroxybupropion(R,R and S,S), threohydrobupropion(1S,2S and 1R,2R), anderythrohydrobupropion (1R,2S and 1S,2R) were0.5, 2, 1, and 1 ng/mL, respectively. All analytes were stable following freezethaw cycles at −80°C and while stored at 4°C in theinstrument autosampler. This method was applicable to clinical pharmacokineticinvestigations of bupropion in patients. This is the first chromatographicmethod to resolve erythrohydrobupropion and threohydrobupropion enantiomers, andthe first stereoselective LC-MS/MS assay to quantify bupropion, and principlemetabolites hydroxybupropion, erythrohydrobupropion, and threohydrobupropion inhuman plasma.
机译：开发了一种立体选择性分析方法，并用于定量人体血浆中的安非他酮以及主要代谢物羟基安非他酮，赤氢安非他酮和苏氢安非他酮的定量分析。分离单个对映体（R）-安非他酮，（S）-安非他酮，（R，R）-羟基安非他酮，（S，S-羟基安非他酮），（1S，2S）-苏氢安非他酮，（1R，2R）-苏氢安非他酮，（1R在12分钟的运行时间内使用α1酸性糖蛋白柱获得了（2S）-赤氢安非他酮和（1S，2R）-赤氢安非他酮。流动相pH和色谱柱之间的变异性显着影响色谱分离。在血浆蛋白用20％三氯乙酸沉淀后，通过正离子电喷雾串联质谱法对分析物进行定量。通过硼氢化钠还原对映体（R）-和-的氢加氢安非他酮对映异构体峰和苏-氢安非他酮对映体峰的鉴定（S）安非他酮。初始测定验证和灵敏度使用AB Sciex 3200、4000 QTRAP和6500质谱仪进行测定。每种分析物的准确性和精密度均在15％以内。该测定是使用AB Sciex 3200质谱对经过分析物特定的浓度进行了全面验证光谱仪。批内和批间精度和准确性均在每种分析物为12％。安非他酮的定量限（R和S），羟基安非他酮（R，R和S，S），苏氢安非他酮（1S，2S和1R，2R）和红氢安非他酮（ 1R，2S 和 1S，2R ）是分别为0.5、2、1和1 ng / mL。冷冻后所有分析物均稳定在-80°C时解冻循环，而在4°C下储存在仪器自动进样器。该方法适用于临床药代动力学安非他酮的研究这是第一个色谱拆分赤氢安非他酮和苏氢安非他酮对映体的方法，以及首个用于定量安非他酮的立体选择性LC-MS / MS分析方法和原理代谢产物羟基安非他酮，赤氢安非他酮和苏氢安非他酮人血浆。

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