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【2h】

Arterivirus RNA-dependent RNA polymerase: Vital enzymatic activity remains elusive

机译：动脉病毒RNA依赖性RNA聚合酶：重要的酶活性仍然难以捉摸

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All RNA viruses encode an RNA-dependent RNA polymerase (RdRp), which in arteriviruses is expressed as the C-terminal domain of nonstructural protein 9 (nsp9). Previously, potent primer-dependent RdRp activity has been demonstrated for the homologous polymerase subunit (nsp12) of the distantly related coronaviruses. The only previous study focusing on the activity of nsp9 of an arterivirus (equine arteritis virus; EAV) reported weak polymerase activity on homopolymeric RNA templates. However, this activity was not retained when Mn ions were omitted from the assay or when biologically relevant templates were supplied, which prompted us to revisit the biochemical properties of this polymerase. Based on the properties of active-site mutants, we conclude that the RNA-synthesizing activities observed in and primer-dependent polymerase and terminal transferase assays cannot be attributed to recombinant EAV nsp9-RdRp. Our results illustrate the potential pitfalls of characterizing polymerases using highly sensitive biochemical assays.
机译：所有RNA病毒均编码RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp），在动脉病毒中表达为非结构蛋白9（nsp9）的C端结构域。以前，已证明远距离冠状病毒的同源聚合酶亚基（nsp12）具有强大的引物依赖性RdRp活性。此前仅有的一项研究集中在动脉病毒（马动脉炎病毒; EAV）的nsp9活性上的研究报道了均聚物RNA模板上的弱聚合酶活性。但是，当测定中省略了Mn离子或提供了生物学相关的模板时，该活性并未保留，这促使我们重新审视了该聚合酶的生化特性。基于活性位点突变体的性质，我们得出结论，在RNA中观察到的RNA合成活性以及依赖引物的聚合酶和末端转移酶测定不能归因于重组EAV nsp9-RdRp。我们的结果说明了使用高度灵敏的生化分析表征聚合酶的潜在陷阱。

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