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Isolation of Pure Mitochondria from Rat Kidneys and Western Blot of Mitochondrial Respiratory Chain Complexes

机译：大鼠肾脏纯线粒体的分离和线粒体呼吸链复合物的蛋白质印迹

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Cardiac, neuronal and renal tubular epithelial cells are the most metabolically active cells in the body. Their fate depends largely on their mitochondria as the primary energy generating system which participates in the control of apoptosis, cell cycle and metabolism. Thus, mitochondrial dysfunction is a hallmark of many chronic diseases including diabetic nephropathy. A drop in mitochondrial bioenergetics efficiency is often associated with altered expression of respiratory chain complexes. Moreover, recent studies demonstrate that cellular proteins can shuttle to mitochondria and modify their function directly. Here we illustrate two mitochondria isolation protocols; one is recommended if the purity of the mitochondrial fraction is a priority such as if the mitochondrial localization of a protein has to be validated, the other if a high yield of intact functional mitochondria is required for functional studies and quantitative Western blotting. Next, we provide a detailed protocol for Western blotting of isolated mitochondria and renal cortex either to prove the purity of isolated fractions or to quantify complexes of the mitochondrial respiratory chain. We used this approach to identify classically cell membrane bound angiotensin II receptors in mitochondria and to study the effect of these receptors on mitochondrial function in early stages of diabetic nephropathy.
机译：心脏，神经元和肾小管上皮细胞是体内最代谢的活性细胞。他们的命运很大程度上取决于他们的线粒体，作为参与细胞凋亡，细胞周期和代谢的控制的主要能量产生系统。因此，线粒体功能障碍是许多慢性疾病的标志，包括糖尿病肾病。线粒体生物能量学效率下降通常与呼吸链复合物的表达改变有关。此外，最近的研究表明，细胞蛋白可以穿梭于线粒体并直接改变它们的功能。在这里，我们说明了两个线粒体隔离协议;如果线粒体级分的纯度是优先级，则建议使用蛋白质的线粒体定位，如果需要高产的完整功能线粒体，则是功能性研究和定量Western印迹所需的。接下来，我们为蛋白质印迹提供了一种详细的分离线粒体和肾皮质的详细方案，可以证明分离级分的纯度或量化线粒体呼吸链的复合物。我们利用这种方法来鉴定线粒体中经典细胞膜结合的血管紧张素II受体，并研究这些受体对糖尿病肾病早期线粒体功能的影响。

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