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首页> 美国卫生研究院文献>Elsevier Sponsored Documents >A monoclonal antibody raised against a thermo-stabilised β1-adrenoceptor interacts with extracellular loop 2 and acts as a negative allosteric modulator of a sub-set of β1-adrenoceptors expressed in stable cell lines
【2h】

A monoclonal antibody raised against a thermo-stabilised β1-adrenoceptor interacts with extracellular loop 2 and acts as a negative allosteric modulator of a sub-set of β1-adrenoceptors expressed in stable cell lines

机译：产生针对热稳定的β1-肾上腺素能受体的单克隆抗体与细胞外环2相互作用并充当稳定细胞系中表达的β1-肾上腺素能受体亚组的负变构调节剂。

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class="kwd-title">Chemical compounds studied in this article: Alprenolol (Pubchem CID: 2119), CGP 12177 (Pubchem CID: 2687), CGP 20712A (Pubchem CID: 2685), Cimaterol (Pubchem CID: 2755), Furimazine (Pubchem CID: 219083), Hoechst 33342 (Pubchem CID: 1464), IBMX (Pubchem CID: 3758), ICI 118551 (Pubchem CID: 5484725), Isoprenaline (Pubchem CID: 5807), Propranolol (Pubchem CID: 4946) class="kwd-title">Abbreviations: ATCM, allosteric ternary complex model; CHO, Chinese hamster ovary; CRE, cAMP response element; ECL, extracellular loop; HEK, human embryonic kidney; mAb, monoclonal antibody; SPAP, secreted placental alkaline phosphatase; StaR, stabilised receptor class="kwd-title">Keywords: GPCR, Allosterism, Monoclonal antibody, Extracellular loop 2 class="head no_bottom_margin" id="ab010title">AbstractRecent interest has focused on antibodies that can discriminate between different receptor conformations. Here we have characterised the effect of a monoclonal antibody (mAb3), raised against a purified thermo-stabilised turkey β1-adrenoceptor (β1AR-m23 StaR), on β1-ARs expressed in CHO-K1 or HEK 293 cells. Immunohistochemical and radioligand-binding studies demonstrated that mAb3 was able to bind to ECL2 of the tβ1-AR, but not its human homologue. Specific binding of mAb3 to tβ1-AR was inhibited by a peptide based on the turkey, but not the human, ECL2 sequence. Studies with [3H]-CGP 12177 demonstrated that mAb3 prevented the binding of orthosteric ligands to a subset (circa 40%) of turkey β1-receptors expressed in both CHO K1 and HEK 293 cells. MAb3 significantly reduced the maximum specific binding capacity of [3H]-CGP-12177 without influencing its binding affinity. Substitution of ECL2 of tβ1-AR with its human equivalent, or mutation of residues D186S, P187D, Q188E prevented the inhibition of [3H]-CGP 12177 binding by mAb3. MAb3 also elicited a negative allosteric effect on agonist-stimulated cAMP responses. The identity of the subset of turkey β1-adrenoceptors influenced by mAb3 remains to be established but mAb3 should become an important tool to investigate the nature of β1-AR conformational states and oligomeric complexes.
机译：<！-fig ft0-> <！-fig @ position =“ anchor” mode =文章f4-> <！-fig mode =“ anchred” f5-> <！-fig / graphic | fig / alternatives / graphic mode =“ anchored” m1-> class =“ kwd-title”>本文研究的化合物： Alprenolol（Pubchem CID：2119），CGP 12177（Pubchem CID：2687） ，CGP 20712A（Pubchem CID：2685），西马特罗（Pubchem CID：2755），呋喃嗪（Pubchem CID：219083），Hoechst 33342（Pubchem CID：1464），IBMX（Pubchem CID：3758），ICI 118551（Pubchem CID：5484725） ），异丙肾上腺素（Pubchem CID：5807），普萘洛尔（Pubchem CID：4946） class =“ kwd-title”>缩写： ATCM，变构三元复合物模型； CHO，中国仓鼠卵巢； CRE，cAMP反应元件； ECL，细胞外环； HEK，人类胚胎肾脏； mAb，单克隆抗体； SPAP，胎盘分泌的碱性磷酸酶； StaR，稳定受体 class =“ kwd-title”>关键字： GPCR，变构作用，单克隆抗体，细胞外环2 class =“ head no_bottom_margin” id =“ ab010title”>摘要最新兴趣集中在可以区分不同受体构象的抗体上。在这里，我们表征了针对纯化的热稳定火鸡β1-肾上腺素受体（β1AR-m23StaR）产生的单克隆抗体（mAb3）对在CHO-K1或HEK 293细胞中表达的β1-AR的作用。免疫组织化学和放射性配体结合研究表明，mAb3能够结合tβ1-AR的ECL2，但不能结合其人类同源物。 mAb3与tβ1-AR的特异性结合被基于火鸡的肽抑制，而不是基于人ECL2序列。对[ 3 H] -CGP 12177的研究表明，mAb3阻止了正构配体与在CHO K1和HEK 293细胞中表达的一部分火鸡β1受体（约40％）结合。 MAb3显着降低了[ 3 H] -CGP-12177的最大比结合能力，而没有影响其结合亲和力。 tβ1-AR的ECL2被其人类等同物取代，或残基D186S，P187D，Q188E的突变阻止了mAb3对[ 3 H] -CGP 12177结合的抑制。 MAb3还对激动剂刺激的cAMP反应产生负面的变构作用。受mAb3影响的火鸡β1-肾上腺素受体子集的身份仍有待确定，但mAb3应成为研究β1-AR构象态和寡聚复合物性质的重要工具。

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