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【2h】

EasyClone 2.0: expanded toolkit of integrative vectors for stable gene expression in industrial Saccharomyces cerevisiae strains

机译：EasyClone 2.0：用于在工业酿酒酵母菌株中稳定基因表达的整合载体的扩展工具包

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Saccharomyces cerevisiae is one of the key cell factories for production of chemicals and active pharmaceuticals. For large-scale fermentations, particularly in biorefinery applications, it is desirable to use stress-tolerant industrial strains. However, such strains are less amenable for metabolic engineering than the standard laboratory strains. To enable easy delivery and overexpression of genes in a wide range of industrial S. cerevisiae strains, we constructed a set of integrative vectors with long homology arms and dominant selection markers. The vectors integrate into previously validated chromosomal locations via double cross-over and result in homogenous stable expression of the integrated genes, as shown for several unrelated industrial strains. Cre-mediated marker rescue is possible for removing markers positioned on different chromosomes. To demonstrate the applicability of the presented vector set for metabolic engineering of industrial yeast, we constructed xylose-utilizing strains overexpressing xylose isomerase, xylose transporter and five genes of the pentose phosphate pathway.Electronic supplementary materialThe online version of this article (doi:10.1007/s10295-015-1684-8) contains supplementary material, which is available to authorized users.
机译：酿酒酵母是生产化学药品和活性药物的关键细胞工厂之一。对于大规模发酵，特别是在生物精炼应用中，期望使用耐胁迫的工业菌株。但是，这种菌株比标准实验室菌株更不适合代谢工程。为了使各种工业酿酒酵母菌株中的基因易于传递和过表达，我们构建了一组具有长同源臂和优势选择标记的整合载体。载体通过双交换整合入先前验证的染色体位置，并导致整合基因的均匀稳定表达，如几种无关的工业菌株所示。 Cre介导的标志物拯救可能用于去除位于不同染色体上的标志物。为了证明所提出的载体对工业酵母代谢工程的适用性，我们构建了过表达木糖异构酶，木糖转运蛋白和五个戊糖磷酸途径基因的利用木糖的菌株。电子补充材料本文的在线版本（doi：10.1007 / s10295-015-1684-8）包含补充材料，授权用户可以使用。

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