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【24h】

Tn5 Transposase with an Altered Specificity for Transposon Ends

机译：Tn5转座酶的转座子特异性改变。

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Tn5 is a composite bacterial transposon that encodes a protein, transposase (Tnp), required for movement of the transposon. The initial step in the transposition pathway involves specific binding of Tnp to 19-bp end recognition sequences. Tn5 contains two different specific end sequences, termed outside end (OE) and inside end (IE). In Escherichia coli, IE is methylated by Dam methylase (IEME). This methylation greatly inhibits recognition by Tnp and greatly reduces the ability of transposase to facilitate movement of IE defined transposons. Through use of a combinatorial random mutagenesis technique (DNA shuffling), we have isolated an IEME-specific hyperactive form of Tnp, Tnp sC7v.2.0, that is able to promote high levels of transposition of IEME defined transposons in vivo and in vitro while functioning at wild-type levels with OE transposons. This protein contains a critical glutamate-to-valine mutation at amino acid 58 that is responsible for this change in end specificity.
机译：Tn 5 是一种复合细菌转座子，编码转座子运动所需的蛋白质转座酶（Tnp）。转座途径的第一步涉及Tnp与19 bp末端识别序列的特异性结合。 Tn 5 包含两个不同的特定末端序列，分别称为外端（OE）和内端（IE）。在大肠杆菌中， IE被Dam甲基化酶（IE ME ）甲基化。这种甲基化极大地抑制了Tnp的识别，并大大降低了转座酶促进IE定义的转座子运动的能力。通过使用组合随机诱变技术（DNA改组），我们分离了IE ME 特异的Tnp过度活跃形式，即Tnp sC7v.2.0，它能够促进IE ME的高水平转座。 sup> ME 在体内和体外定义了转座子，同时与OE转座子在野生型水平上起作用。该蛋白在氨基酸58处包含一个关键的谷氨酸到缬氨酸突变，这是这种末端特异性变化的原因。

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