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【24h】

In vivo CRISPR editing with no detectable genome - wide off-target mutations

机译：没有可检测的基因组的体内CRISPR编辑-广泛的脱靶突变

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CRISPR-Cas genome-editing nucleases hold substantial promise for developing human therapeutic applications(1)(-6) but identifying unwanted off-target mutations is important for clinical translation. A well-validated method that can reliably identify off-targets in vivo has not been described to date, which means it is currently unclear whether and how frequently these mutations occur. Here we describe 'verification of in vivo off-targets' (VIVO), a highly sensitive strategy that can robustly identify the genome-wide off-target effects of CRISPR-Cas nucleases in vivo. We use VIVO and a guide RNA deliberately designed to be promiscuous to show that CRISPR-Cas nucleases can induce substantial off-target mutations in mouse livers in vivo. More importantly, we also use VIVO to show that appropriately designed guide RNAs can direct efficient in vivo editing in mouse livers with no detectable off-target mutations. VIVO provides a general strategy for defining and quantifying the off-target effects of gene-editing nucleases in whole organisms, thereby providing a blueprint to foster the development of therapeutic strategies that use in vivo gene editing.
机译：CRISPR-Cas基因组编辑核酸酶在开发人类治疗应用方面具有广阔前景（1）（-6），但鉴定出不需要的脱靶突变对于临床翻译非常重要。迄今为止，尚未描述一种经过充分验证的方法，可以可靠地在体内识别脱靶，这意味着目前尚不清楚这些突变是否发生以及发生的频率。在这里，我们描述了“体内脱靶验证”（VIVO），这是一种高度敏感的策略，可以可靠地识别体内CRISPR-Cas核酸酶的全基因组脱靶效应。我们使用VIVO和特意设计为混杂的指导RNA，以显示CRISPR-Cas核酸酶可在体内诱导小鼠肝脏实质性脱靶突变。更重要的是，我们还使用VIVO来证明适当设计的指导RNA可以指导小鼠肝脏中有效的体内编辑，而没有可检测到的脱靶突变。 VIVO提供了一种总体策略，用于定义和量化整个生物体内基因编辑核酸酶的脱靶效应，从而提供了一个蓝图，以促进使用体内基因编辑的治疗策略的发展。

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