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首页> 外文期刊>Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America >Periplasmic orientation of nascent lipid A in the inner membrane of an Escherichia coli LptA mutant
【24h】

Periplasmic orientation of nascent lipid A in the inner membrane of an Escherichia coli LptA mutant

机译：大肠杆菌LptA突变体内膜中新生脂质A的周质取向

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The core-lipid A domain of Escherichia coli lipopolysaccharide (LPS) is synthesized on the inner surface of the inner membrane (IM) and flipped to its outer surface by the ABC transporter MsbA. Recent studies with deletion mutants implicate the periplasmic protein LptA, the cytosolic protein LptB, and the IM proteins LptC, LptF, and LptG in the subsequent transport of nascent LPS to the outer membrane (OM), where the LptD/LptE complex flips LPS to the outer surface. We have isolated a temperature-sensitive mutant (MB1) harboring the S22C and Q111P substitutions in LptA. MB1 stops growing after 30 min at 42℃. ~(32)Pi and [~(35)S]methionine labeling show that export of newly synthesized phospholipids and proteins is not severely impaired, but export of LPS is defective. Using the lipid A 1-phosphatase LpxE as a periplasmic IM marker and the lipid A 3-O-deacylase PagL as an OM marker, we show that core-lipid A reaches the periplasmic side of the IM at 42℃ in MB1 but not the outer surface of the OM. Electron microscopy of MB1 reveals dense periplasmic material and a smooth OM at 42℃, consistent with a role for LptA in shuttling LPS across the periplasm.
机译：大肠杆菌脂多糖（LPS）的核心脂质A结构域在内膜（IM）的内表面上合成，并通过ABC转运蛋白MsbA翻转到其外表面。最近有关缺失突变体的研究表明，周质蛋白LptA，胞质蛋白LptB和IM蛋白LptC，LptF和LptG在随后的新生LPS转运至外膜（OM）时，其中LptD / LptE复合物将LPS翻转为外表面。我们已经分离出在LptA中包含S22C和Q111P取代的温度敏感突变体（MB1）。 MB1在42℃30分钟后停止生长。 〜（32）Pi和[〜（35）S]蛋氨酸标记表明，新合成的磷脂和蛋白质的输出没有受到严重损害，但是LPS的输出是有缺陷的。使用脂质A 1-磷酸酶LpxE作为周质IM标记，使用脂质A 3-O-脱酰基酶PagL作为OM标记，我们显示MB1中核心脂质A在42℃到达IM的周质侧，但没有OM的外表面。 MB1的电子显微镜检查显示致密的周质物质和42℃的平滑OM，与LptA在穿梭LPS穿越周质中的作用一致。

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