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首页> 外文期刊>Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America >Probing a protein-protein interaction by in vitro evolution
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Probing a protein-protein interaction by in vitro evolution

机译：通过体外进化探究蛋白质与蛋白质的相互作用

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In this study, we used in vitro protein evolution with ribosome and phage display to optimize the affinity of a human IL-13-neutralizing antibody, a therapeutic candidate for the treatment of asthma, > 150-fold to 81 pM by using affinity-driven stringency selections. Simultaneously, the antibody potency to inhibit IL-13-dependent proliferation in a cell-based functional assay increased 345-fold to an IC50 of 229 pM. The panoply of different optimized sequences resulting from complementarity-determining region-targeted mutagenesis and error-prone PCIR using ribosome display was contrasted with that of complementarity-cletermining region-targeted mutagenesis alone using phage display. The data highlight the advantage of the ribosome-clisplay approach in identifying beneficial mutations across the entire sequence space. A comparison of mutation hotspots from in vitro protein evolution to knockout mutations from alanine scanning demonstrated that in vitro evolution selects the most appropriate positions for improvements in potency without mutating any of the key residues within the functional paratope.
机译：在这项研究中，我们使用具有核糖体和噬菌体展示的体外蛋白质进化来优化人IL-13中和抗体的亲和力，该抗体是通过使用亲和力驱动的> 150倍至81 pM的哮喘治疗候选物严格选择。同时，在基于细胞的功能测定中，抑制IL-13依赖性增殖的抗体效力提高了345倍，达到IC 229 pM。使用核糖体展示，由互补决定区定向诱变和易错PCIR产生的不同优化序列的全景图与仅使用噬菌体展示的互补决定区域定位诱变的全景图形成对比。数据突出了核糖体-clisplay方法在识别整个序列空间中有益突变方面的优势。将体外蛋白质进化的突变热点与丙氨酸扫描的敲除突变进行比较，结果表明，体外进化选择了最合适的位置来提高效价，而不会突变功能互补位内的任何关键残基。

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