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首页> 外文期刊>Bulletin of the Chemical Society of Japan >A High-Throughput Screening Assay of Endocrine-Disrupting Chemicals Using a Receptor-Modified Au-Electrode
【24h】

A High-Throughput Screening Assay of Endocrine-Disrupting Chemicals Using a Receptor-Modified Au-Electrode

机译：使用受体修饰的金电极对干扰内分泌的化学物质进行高通量筛选分析

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There is a great deal of concern that wildlife and human health have been adversely affected by anthropogenic chemicals that can disrupt normal endocrine homeostasis.In order to identify the binding ability of chemicals to human estrogen receptors (hER),we have constructed a biosensor which carries the hER ligand-binding domain on the surface.The receptor was expressed as an in-frame fusion with ten consecutive histidine residues using a bacterial system,and then the recombinant protein was immobilized on an Au-electrode via Ni(II)-mediated chemisorption using the histidine tag and thiol-modified nitrilotriacetic acid.This receptor-modified electrode was used to define the binding capacity of several xenoestrogens and anti-estrogen to the hER.The biosensor showed a linear response to the chemicals in a concentration-dependent manner.The order of the detection limits was:17beta-estradiol (10~(-10) M)>diethylstilbestrol (DES;10~(-8) M),ICI 182780 (10~(-8) M),dibutyl phthalate (10~(-8) M),bisphenol A (10~(-8) M)>p-nonylphenol (10~(-6) M),testosterone (10~(-6) M).Compared to the traditional binding assay,our method has the advantage of being more feasible,due to the high-throughput screening assay for evaluating the binding ability of chemicals to the receptors.
机译：令人担忧的是，野生生物和人类健康受到可能破坏正常内分泌稳态的人为化学物质的不利影响。为了鉴定化学物质与人类雌激素受体（hER）的结合能力，我们构建了一种生物传感器使用细菌系统将该受体表达为与十个连续组氨酸残基的框内融合，然后通过Ni（II）介导的化学吸附将重组蛋白固定在Au电极上。使用组氨酸标签和硫醇修饰的次氮基三乙酸。该受体修饰的电极用于定义几种异种雌激素和抗雌激素与hER的结合能力。该生物传感器对化学品的线性响应呈浓度依赖性。检测限的顺序为：17β-雌二醇（10〜（-10）M）>己烯雌酚（DES; 10〜（-8）M），ICI 182780（10〜（-8）M），邻苯二甲酸二丁酯（10 〜（-8）M） ，双酚A（10〜（-8）M）>对壬基酚（10〜（-6）M），睾丸激素（10〜（-6）M）。与传统的结合测定相比，我们的方法具有以下优势由于用于评估化学物质与受体结合能力的高通量筛选测定法，因此更可行。

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