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【24h】

Gene disruption in Schizosaccharomyces pombe using a temperature-sensitiveUra4p

机译：使用温度敏感的Ura4p破坏粟酒裂殖酵母中的基因

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We have generated a temperature-sensitive form of the Ura4p protein from the fission yeast Schizosaccharomyces pombe. A single T-to-C mutation at nucleotide 782 (relative to the initiator ATG codon of ura4) changes the leucine residue at position 261 in Ura4p to a proline. The mutant Ura4p(ts) supports growth at 30 degrees C but is unable to allow growth at 37 degrees C in the absence of uracil when a single copy of the gene is integrated into the host chromosome. Using the ura4(ts) cassette for gene replacements simplifies the identification of transformants in which the disruption construct has undergone homologous integration into the host chromosome, as these individuals contain a single copy of the ura4(ts) gene and fail to grow when replicated to 37 degrees C in the absence of uracil. Copyright (C) 1999 John Wiley & Sons, Ltd.
机译：我们已经从裂殖酵母粟酒裂殖酵母中生成了Ura4p蛋白的温度敏感性形式。核苷酸782（相对于ura4的起始ATG密码子）处的单个T-C突变将Ura4p中261位的亮氨酸残基变为脯氨酸。当基因的单个拷贝整合到宿主染色体中时，突变体Ura4p（ts）支持在30摄氏度下生长，但在不存在尿嘧啶的情况下无法在37摄氏度下生长。使用ura4（ts）盒进行基因替换可简化对转化体的鉴定，在这些转化体中，破坏构建体已同源整合到宿主染色体中，因为这些个体包含ura4（ts）基因的单个拷贝，并且在复制到在没有尿嘧啶的情况下为37摄氏度。版权所有（C）1999 John Wiley＆Sons，Ltd.

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