...
  • 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 外文期刊>Vaccine >Preparation of pharmaceutical-grade plasmid DNA using methacrylate monolithic columns.
【24h】

Preparation of pharmaceutical-grade plasmid DNA using methacrylate monolithic columns.

机译：使用甲基丙烯酸甲酯整体柱制备药物级质粒DNA。

获取原文
获取原文并翻译 | 示例
           
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

Plasmid DNA (pDNA) used in vaccination and gene therapy has to be highly pure and homogenous, which point out necessity to develop efficient, reproducible and scalable downstream process. Convective Interaction Media (CIM) monolithic chromatographic supports being designed for purification of large molecules and nanoparticles seem to be a matrix of choice for pDNA purification. In present work we describe a pDNA purification process designed on two different CIM monolithic columns, based on anion-exchange (AEX) chromatography and hydrophobic interaction chromatography (HIC) chemistry. HIC monolith enabled separation of supercoiled (sc) pDNA from open circular (oc) pDNA, genomic DNA (gDNA) and endotoxins regardless to flow rates in the range at least up to 380 cm/h. Dynamic binding capacity of new HIC monolith is up to 4 mg of pDNA per milliliter of support. Combination of both chromatographic steps using optimized CaCl2 precipitation enabled production of pure pDNA, satisfying all regulatory requirements. Process was found to be reproducible, scalable, and exhibits high productivity. In addition, in-line monitoring of pDNA purification process is shown, using CIM DEAE disk monolithic columns.
机译：疫苗接种和基因治疗中使用的质粒DNA（pDNA）必须是高度纯净且均质的，这表明有必要开发高效，可再现和可扩展的下游工艺。对流相互作用介质（CIM）整体色谱载体设计用于纯化大分子和纳米颗粒，似乎是pDNA纯化的选择基质。在当前的工作中，我们描述了一种基于阴离子交换（AEX）色谱和疏水相互作用色谱（HIC）化学方法在两个不同的CIM整体柱上设计的pDNA纯化方法。 HIC整料能够将超螺旋（sc）pDNA与开环（oc）pDNA，基因组DNA（gDNA）和内毒素分离，而不论流速至少在380 cm / h以下。新的HIC整料的动态结合能力为每毫升支持物高达4 mg pDNA。使用优化的CaCl 2 沉淀法进行的两个色谱步骤相结合，可以生产纯pDNA，满足所有法规要求。发现该过程是可再现的，可扩展的，并且展现出高生产率。此外，还显示了使用CIM DEAE磁盘整体柱对pDNA纯化过程进行的在线监测。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号