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首页> 外文期刊>Biochemistry >Characterization of heparin oligosaccharides binding specifically to antithrombin III using mass spectrometry
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Characterization of heparin oligosaccharides binding specifically to antithrombin III using mass spectrometry

机译：使用质谱表征与抗凝血酶III特异性结合的肝素寡糖

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Heparan sulfate (HS) is a sulfated glycosaminoglycan attached to a core protein on the cell surface. Protein binding to cell surface HS is a key regulatory event for many cellular processes such as blood coagulation, cell proliferation, and migration. The concept whereby protein binding to HS is not random but requires a limited number of sulfation patterns is becoming clear. Here we describe a hydrophobic trapping assay for screening a library of heparin hexasaccharides for binders to antithrombin III (ATIII). The hexasaccharide compositions are defined with their building block content in the following format: (Delta HexA:HexA:GlcN:SO3:Ac). Of five initial compositions present in the library, (1:2:3:6:1), (1:2:3:7:1), (1:2:3:7:0), (1:2:3:8:0), and (1:2:3:9:0), only two are shown to bind ATIII, namely, (1:2:3:8:0) and (1:2:3:9:0). The use of amide hydrophilic interaction (HILIC) liquid chromatography-mass spectrometry permitted reproducible quantitative analysis of the composition of the initial library as well as that of the binding fraction. The specificity of the hexasaccharides binding ATIII was confirmed by assaying their ability to enhance ATIII-mediated inhibition of Factor Xa in vitro.
机译：硫酸乙酰肝素（HS）是一种附着在细胞表面核心蛋白上的硫酸化糖胺聚糖。蛋白质与细胞表面HS的结合是许多细胞过程（例如凝血，细胞增殖和迁移）的关键调控事件。蛋白质与HS的结合不是随机的，而是需要有限数量的硫酸化模式的概念正在变得清晰。在这里，我们描述了一种疏水性捕获测定法，用于筛选肝素六糖文库中的抗凝血酶III（ATIII）结合剂。六糖组合物的结构单元含量定义为以下格式：（十六进制Delta：HexA：HexA：GlcN：SO3：Ac）。库中存在的五个初始成分中，（1：2：3：6：1），（1：2：3：7：1），（1：2：3：7：0），（1：2： 3：8：0）和（1：2：3：9：0），只有两个绑定ATIII，即（1：2：3：8：0）和（1：2：3：9 ：0）。酰胺亲水相互作用（HILIC）液相色谱-质谱法的使用允许对初始文库的组成以及结合级分的组成进行可重复的定量分析。通过测定六糖结合ATIII增强ATIII介导的因子Xa抑制的能力，证实了六糖结合ATIII的特异性。

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