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首页> 外文期刊>American Journal of Physiology >FRET-based voltage probes for confocal imaging: membrane potential oscillations throughout pancreatic islets.
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FRET-based voltage probes for confocal imaging: membrane potential oscillations throughout pancreatic islets.

机译：用于共焦成像的基于FRET的电压探针：整个胰岛的膜电位振荡。

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Insulin secretion is dependent on coordinated pancreatic islet physiology. In the present study, we found a way to overcome the limitations of cellular electrophysiology to optically determine cell membrane potential (V(m)) throughout an islet by using a fast voltage optical dye pair. Using laser scanning confocal microscopy (LSCM), we observed fluorescence (Forster) resonance energy transfer (FRET) with the fluorescent donor N-(6-chloro-7-hydroxycoumarin-3-carbonyl)-dimyristoylphosphatidyl-ethanola mine and the acceptor bis-(1,3-diethylthiobarbiturate) trimethine oxonol in the plasma membrane of essentially every cell within an islet. The FRET signal was approximately linear from V(m) -70 to +50 mV with a 2.5-fold change in amplitude. We evaluated the responses of islet cells to glucose and tetraethylammonium. Essentially, every responding cell in a mouse islet displayed similar time-dependent changes in V(m). When V(m) was measured simultaneously with intracellular Ca2+, all active cells showed tightcoupling of V(m) to islet cell Ca2+ changes. Our findings indicate that FRET-based, voltage-sensitive dyes used in conjunction with LSCM imaging could be extremely useful in studies of excitation-secretion coupling in intact islets of Langerhans.
机译：胰岛素分泌取决于胰岛的协调生理。在本研究中，我们找到了一种方法来克服细胞电生理学的局限性，以通过使用快速电压光学染料对光学确定整个胰岛中的细胞膜电位（V（m））。使用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM），我们用荧光供体N-（6-氯-7-羟基香豆素-3-羰基）-二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺和受体bis-进行了荧光（Forster）共振能量转移（FRET）。胰岛内基本上每个细胞的质膜中的（1,3-二乙基硫代巴比妥酸酯）三甲嘌呤恶多酚。 FRET信号在V（m）-70至+50 mV之间呈线性关系，幅度变化为2.5倍。我们评估了胰岛细胞对葡萄糖和四乙铵的反应。本质上，小鼠胰岛中的每个响应细胞在V（m）中都显示出类似的时间依赖性变化。当同时测量V（m）和细胞内Ca2 +时，所有活动细胞均显示V（m）与胰岛细胞Ca2 +变化紧密耦合。我们的发现表明，与LSCM成像结合使用的基于FRET的压敏染料在朗格汉斯完整胰岛中的激发-分泌偶联研究中可能非常有用。

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