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【24h】

MDCK cell line with inducible allele B NS1 expression propagates delNS1 influenza virus to high titres

机译：具有诱导型等位基因B NS1表达的MDCK细胞系将delNS1流感病毒传播至高滴度

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Influenza A viruses lacking the gene encoding the non-structural NS1 protein (delNS1) have potential use as live attenuated vaccines. However, due to the lack of NS1, virus replication in cell culture is considerably reduced, prohibiting commercial vaccine production. We therefore established two stable MDCK cell lines that show inducible expression of the allele B NS1 protein. Upon induction, both cell lines expressed NS1 to about 1000-fold lower levels than influenza virus-infected cells. Nevertheless, expression of NS1 increased delNS1 virus titres to levels comparable to those obtained with an isogenic virus strain containing an intact NS1 gene. Recombinant NS1 expression increased the infectious virus titres 244 to 544-fold and inhibited virus induced apoptosis. However, NS1 expression resulted in only slightly, statistically not significant, reduced levels of interferon-beta production. Thus, the low amount of recombinant NS1 is sufficient to restore delNS1 virus replication in MDCK cells, but it remains unclear whether this occurs in an interferon dependent manner. In contrast to previous findings, recombinant NS1 expression did not induce apoptosis, nor did it affect cell growth. These cell lines thus show potential to improve the yield of delNS1 virus for vaccine production
机译：缺乏编码非结构性NS1蛋白（delNS1）的基因的甲型流感病毒有潜力用作减毒活疫苗。但是，由于缺少NS1，细胞培养物中的病毒复制大大减少，从而禁止了商业疫苗的生产。因此，我们建立了两个稳定的MDCK细胞系，它们显示等位基因B NS1蛋白的诱导表达。诱导后，两种细胞系均表达NS1的水平比感染流感病毒的细胞低1000倍。然而，NS1的表达使delNS1病毒的滴度增加到与含有完整NS1基因的等基因病毒株获得的水平相当的水平。重组NS1表达使感染性病毒滴度244增加至544倍，并抑制了病毒诱导的凋亡。但是，NS1表达仅导致干扰素-β产生的水平略有降低（统计上不显着）。因此，少量的重组NS1足以恢复MDCK细胞中delNS1病毒的复制，但仍不清楚这是否以干扰素依赖性方式发生。与以前的发现相反，重组NS1表达既不诱导细胞凋亡，也不影响细胞生长。因此，这些细胞系显示出提高delNS1病毒产量以生产疫苗的潜力

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