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首页> 外文期刊>Journal of Molecular Biology >The effect of monastrol on the processive motility of a dimeric kinesin-5 head/kinesin-1 stalk chimera.
【24h】

The effect of monastrol on the processive motility of a dimeric kinesin-5 head/kinesin-1 stalk chimera.

机译：monastrol对二聚体kinesin-5头部/ kinesin-1茎嵌合体的进行性运动的影响。

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Controlled activity of several kinesin motors is required for the proper assembly of the mitotic spindle. Eg5, a homotetrameric bipolar kinesin-5 from Xenopus laevis, can cross-link and slide anti-parallel microtubules apart by a motility mechanism comprising diffusional and directional modes. How this mechanism is regulated, possibly by the tail domains of the opposing motors, is poorly understood. In order to explore the basic unregulated kinesin-5 motor activity, we generated a stably dimeric kinesin-5 construct, Eg5Kin, consisting of the motor domain and neck linker of Eg5 and the neck coiled coil of Drosophila melanogaster kinesin-1 (DmKHC). In single-molecule motility assays, we found this chimera to be highly processive. In addition, we studied the effect of the kinesin-5-specific inhibitor monastrol using single-molecule fluorescence assays. We found that monastrol reduced the length of processive runs, but strikingly did not affect velocity. Quantitative analysis of monastrol dose dependence suggests that two bound monastrol molecules are required to be bound to an Eg5Kin dimer to terminate a run.
机译：为了正确组装有丝分裂纺锤体，需要控制几种驱动蛋白运动。 Eg5是非洲爪蟾（Xenopus laevis）的同型四聚体双极驱动蛋白5，可以通过包括扩散和定向模式的运动机制使反平行微管交联并滑动分开。人们对这种机制可能是由相对的电动机的尾部区域进行调节的方式了解得很少。为了探索基本的不受驱动的kinesin-5运动活性，我们生成了稳定的二聚体kinesin-5构建体Eg5Kin，该结构由Eg5的运动域和颈部接头以及果蝇kinesin-1（DmKHC）的颈绕线圈组成。在单分子运动分析中，我们发现这种嵌合体具有高度的合成能力。另外，我们使用单分子荧光测定法研究了驱动蛋白5特异性抑制剂monastrol的作用。我们发现monastrol减少了连续运行的时间，但并不显着影响速度。 Monastrol剂量依赖性的定量分析表明，需要两个结合的Monastrol分子与Eg5Kin二聚体结合才能终止运行。

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