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A fluorescence-based high-throughput screening method for determining the activity of diguanylate cyclases and c-di-GMP phosphodiesterases

机译：一种基于荧光的高通量筛选方法，用于测定Diguantyl酸酯环酶和C-Di-GMP磷酸二酯酶的活性

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摘要

The dinucleotide 3 ',5 '-cyclic diguanylic acid (c-di-GMP) is a critical second messenger found in bacteria. High cellular levels of c-di-GMP are associated with a sessile, biofilm lifestyle in many bacteria, which is associated with more than 70% of clinically resistant infections. Cellular c-di-GMP concentrations are regulated by diguanylate cyclases (DGCs) and phosphodiesterases (PDEs), which are responsible for the production and degradation, respectively, of c-di-GMP. Therefore, DGCs and PDEs might be attractive drug targets for controlling biofilm formation. In this study, a simple and universal high-throughput method based on a c-di-GMP-specific fluorescent probe for the determination of DGC and PDE activity was described. By using the proposed method, the c-di-GMP content in samples was rapidly quantified by measuring the fluorescence intensity in a 96-well plate by using a microplate reader. In addition, the probe molecule A18 directly interacted with the substrate c-di-GMP, and the method was not limited by the structure of enzymes.
机译：二核苷酸3'，5' - 环二胍（C-Di-GMP）是细菌中发现的关键第二个信使。 C-Di-GMP的高细胞水平与许多细菌中的术式术，生物膜生活方式有关，其与超过70％的临床抗性感染有关。细胞C-Di-GMP浓度由Diguantylyly环酶（DGC）和磷酸二酯酶（PDE）调节，其分别负责C-Di-GMP的生产和降解。因此，DGC和PDE可能是用于控制生物膜形成的吸引力的药物靶标。在该研究中，描述了一种基于C-Di-GMP特异性荧光探针的简单且通用的高通量方法，用于测定DGC和PDE活性。通过使用所提出的方法，通过使用微孔板读取器测量96孔板中的荧光强度，可以快速定量样品中的C-Di-GMP含量。此外，探针分子A18直接与底物C-Di-GMP相互作用，并且该方法不受酶结构的限制。

著录项

  • 来源
    《RSC Advances》 |2020年第33期|共8页
  • 作者

    Wang Zi-Qiang; Xuan Teng-Fei; Liu Jun; Chen Wei-Min; Lin Jing;

  • 作者单位

    Jinan Univ Coll Pharm Guangzhou 510632 Peoples R China;

    Jinan Univ Coll Pharm Guangzhou 510632 Peoples R China;

    Jinan Univ Coll Pharm Guangzhou 510632 Peoples R China;

    Jinan Univ Coll Pharm Guangzhou 510632 Peoples R China;

    Jinan Univ Coll Pharm Guangzhou 510632 Peoples R China;

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  • 正文语种 eng
  • 中图分类 化学;
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