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A simple, robust and equipment-free DNA amplification readout in less than 30 seconds

机译：在不到30秒的情况下，在不到30秒内的简单，稳健和无设备的DNA放大读数

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摘要

Molecular based diagnostic methods rely on the amplification of pathogen DNA but naked eye visualization of results is still challenging. We present here a simple and highly reliable DNA amplification readout system for naked eye detection of isothermally or PCR amplified DNA in less than 30 seconds. This system utilizes spermine to precipitate DNA amplicons and initiate bridging flocculation of a mix of charcoal and diatomaceous earth particles in suspension. In the absence of amplification, the charcoal particles remain suspended resulting in a black, non-transparent colloid solution while positive samples in which DNA amplification has occurred can be identified within seconds as the particles flocculate and settle leaving a transparent liquid phase. We have coupled this method with our rapid dipstick DNA purification method and isothermal DNA amplification to create a simple four-step diagnostic system that can be preassembled to reduce unnecessary manipulation in the field. The method's simplicity, low cost, minimal equipment and clear presence/absence readout makes it ideal for rapid diagnostic testing in the laboratory and in situations where users have limited technical training or resources including high school science classes and field-based research.
机译：基于分子诊断方法依赖于病原体DNA，但结果肉眼可视化仍然是具有挑战性的放大。我们在这里提出供肉眼检测的等温或PCR在不到30秒的扩增的DNA的简单且高度可靠的DNA扩增读出系统。该系统利用精胺沉淀到DNA扩增子和启动桥接木炭和硅藻土颗粒在悬浮液中的混合物的絮凝。在没有放大的，所述木炭颗粒保持悬浮导致黑色，不透明的胶体溶液中，同时在其中发生DNA扩增可以在几秒钟作为颗粒内被识别的阳性样品和絮凝沉降留下透明液相。我们已联接这种方法与我们的快速试纸DNA纯化方法和等温DNA扩增，以创建可以被预装配，以减少不必要的字段操纵一个简单的四步的诊断系统。该方法的简单，成本低，最少的设备和清晰的存在/不存在读使其非常适用于在实验室和在用户有限的技术培训和资源，包括高中科学课程和实地研究的情况下快速诊断测试。

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  • 来源
    《RSC Advances》 |2019年第42期|共11页
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  • 正文语种 eng
  • 中图分类 化学;
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