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首页> 外文期刊>The FEBS journal >Crystal structure of a domain-swapped photoactivatable sfGFP variant provides evidence for GFP folding pathway
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Crystal structure of a domain-swapped photoactivatable sfGFP variant provides evidence for GFP folding pathway

机译：域交换的晶体结构的晶域 - 交换的光活性SFGFP变体提供了GFP折叠通路的证据

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Photoactivatable fluorescent proteins (PA-FPs) are a powerful non-invasive tool in high-resolution live-cell imaging. They can be converted from an inactive to an active form by light, enabling the spatial and temporal trafficking of proteins and cell dynamics. PA-FPs have been previously generated by mutating selected residues in the chromophore or in its close proximity. A new strategy to generate PA-FPs is the genetic incorporation of unnatural amino acids (UAAs) containing photocaged groups using unique suppressor tRNA/aminoacyl-tRNA synthetase pairs. We set out to develop a photoactivatable GFP variant suitable for time-resolved structural studies. Here, we report the crystal structure of superfolder GFP (sfGFP) containing the UAA ortho-nitrobenzyl-tyrosine (ONBY) at position 66 and its spectroscopic characterization. Surprisingly, the crystal structure (to 2.7 angstrom resolution) reveals a dimeric domain-swapped arrangement of sfGFP66ONBY with residues 1-142 of one molecule associating with residues 148-234 from another molecule. This unusual domain-swapped structure supports a previously postulated GFP folding pathway that proceeds via an equilibrium intermediate.
机译：可光活化的荧光蛋白（PA-FPS）是高分辨率活细胞成像中强大的非侵入性工具。它们可以通过光从非活动转换为活动形式，从而实现蛋白质和细胞动态的空间和时间贩运。先前已经通过突变了发色团中的所选残留物或密切的接近来产生PA-FP。生成PA-FPS的新策略是使用独特的抑制器TRNA /氨基酰基-TRNA合成酶对含有光吞族基团的非天然氨基酸（UAAs）的遗传掺入。我们首先开发适合时间解决结构研究的光激活GFP变体。这里，我们在位置66处报道含有UAA邻硝基苄基 - 酪氨酸（Onby）的超细粘合剂GFP（SFGFP）的晶体结构及其光谱性表征。令人惊讶的是，晶体结构（至2.7埃分辨率）揭示了SFGFP66MY的二聚体畴交换布置，其中一个分子的残基1-142与来自另一分子的残基148-234相关联。这种不寻常的域交换结构支持先前假设的GFP折叠通路，通过平衡中间体进行。

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