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Plasmid production and purification: An integrated experiment-based biochemistry and biotechnology laboratory course

机译：质粒生产和纯化：综合实验基础生物化学和生物技术实验室课程

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This laboratory experiment describes the production and purification of plasmid DNA for undergraduate biochemistry and biotechnology courses. This experiment performed in a one-week period includes the protocols for plasmid pVAX1-LacZ production in Escherichia coli DH5 alpha cells and subsequent purification of supercoiled pVAX1-LacZ. Firstly, the students use a growth medium that favors the replication of the plasmid resulting in a higher plasmid production during exponential growth. Afterwards, alkaline lysis is done to disrupt the bacterial cells and recover pVAX1-LacZ plasmid. Lastly, they perform the purification of pVAX1-LacZ supercoiled isoform by L-histidine chromatography, followed by agarose gel electrophoresis to characterize the separation of supercoiled isoform from contaminants. The proposed experiment provides an opportunity for students to acquire these skills that are routinely used in biochemistry and biotechnology laboratories. (c) 2019 International Union of Biochemistry and Molecular Biology, 2019.
机译：该实验室实验描述了本科生生物化学和生物技术课程的质粒DNA的生产和纯化。在一周的时间内进行的该实验包括在大肠杆菌DH5α细胞中的质粒pVAX1-LACZ产生的方案，并随后纯化超硅酸锆PVAX1-LACZ。首先，学生使用增长培养基，这些生长培养基促进了质粒的复制，导致在指数增长期间产生更高的质粒产生。然后，进行碱性裂解以破坏细菌细胞并回收PVAX1-LACZ质粒。最后，它们通过L-组氨酸色谱法进行PVAX1-LACZ超滤体同种型的纯化，然后进行琼脂糖凝胶电泳，以表征来自污染物的超硅酸同种型的分离。拟议的实验为学生提供了机会获得这些技能，这些技能通常用于生物化学和生物技术实验室。 （c）2019年2019年国际生物化学联盟和2019年的分子生物学联盟。

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