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首页> 外文期刊>The European Journal of Neuroscience >A protocol for concurrent high-quality immunohistochemical and biochemical analyses in adult mouse central nervous system
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A protocol for concurrent high-quality immunohistochemical and biochemical analyses in adult mouse central nervous system

机译：成年小鼠中枢神经系统同时高质量免疫组织化学和生化分析的协议

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Biochemical analysis of central nervous system proteins and nucleic acids requires fresh-tissue homogenates, whereas immunohistochemistry usually is performed in sections prepared from perfusion-fixed tissue. Post-mortem immersion-fixation is possible, but largely impairs morphological preservation and protein antigenicity. Here, we present a simple, fast and versatile protocol allowing concurrent biochemical and immunohistochemical analysis, including pre-embedding immunoelectron microscopy, using tissue from the same animal. The protocol includes a brief transcardiac perfusion with ice-cold, oxygenated and glucose-supplemented artificial cerebrospinal fluid to maintain brain tissue alive, prior to isolation of regions of interest, followed by homogenisation for biochemistry or immersion-fixation for immunohistochemistry. We provide several examples demonstrating that this protocol allows optimal biochemical and morphological analysis, characterised with optimal sensitivity and preservation of tissue structure, along with a reduction of artefacts typically seen in perfusion-fixed tissue. This protocol should find widespread applications for combining analytical methods in tissue from the same animal, thereby reducing the number of mice required for a given experiment.
机译：中枢神经系统蛋白质和核酸的生化分析需要鲜组织匀浆，而免疫组织化学通常在由灌注固定组织制备的部分中进行。验尸后浸渍固定是可能的，但在很大程度上危及形态保存和蛋白质抗原性。在这里，我们介绍了一种简单，快速而通用的协议，允许使用来自同一动物的组织的组织预先嵌入免疫电化学和免疫组织化学分析。该方案包括简短的简式灌注，具有冰冷，含氧和葡萄糖补充的人工脑脊液，以在分离感兴趣区域之前保持脑组织，然后进行生物化学或免疫组织化学的浸渍固定。我们提供了几个例子，证明了该方案允许最佳的生化和形态学分析，其特征在于具有最佳灵敏度和组织结构的保存，以及通常在灌注固定组织中看到的人工制品的减少。该方案应寻找广泛的应用，用于将分析方法组合在同一动物中的​​组织中，从而减少给定实验所需的小鼠数量。

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