• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 外文期刊>Biotechnology Progress >Microfabricated Arrays of Cylindrical Wells Facilitate Single-Molecule Enzymology of α-Chymotrypsin
【24h】

Microfabricated Arrays of Cylindrical Wells Facilitate Single-Molecule Enzymology of α-Chymotrypsin

机译：圆柱孔的微阵列有助于α-胰凝乳蛋白酶的单分子酶学。

获取原文
获取原文并翻译 | 示例
           
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

Single-molecule enzymology allows scientists to examine the distributions of kinetic rates among members of a population. We describe a simple method for the analysis of single-molecule enzymatic kinetics and provide comparisons to ensemble-averaged kinetics. To isolate our model enzyme,α-chymotrypsin,into single molecules,we use an array of cylindrical poly(dimethylsiloxane) wells 2 μm in diameter and 1.35 μm in height. Inside the wells,a protease assay with a profluorescent substrate detects α-chymotrypsin activity. We hold the concentration of α-chymotrypsin at 0.39 nM in a given well with an enzyme-to-substrate ratio of 1:6,666 molecules. Fluorescence emitted by the substrate is proportional to enzyme activity and detectable by a charge-coupled device. This method allows for the simultaneous real-time characterization of hundreds of individual enzymes. We analyze single-molecule kinetics by recording and observing their intensity trajectories over time. By testing our method with our current instruments,we confirm that our methodology is useful for the analysis of single enzymes for extracting static inhomogeneity.
机译：单分子酶学使科学家能够检查人口中动力学速率的分布。我们描述了一种用于分析单分子酶动力学的简单方法，并提供了对集合平均动力学的比较。为了将模型酶α-胰凝乳蛋白酶分离为单个分子，我们使用了一系列直径为2μm，高度为1.35μm的圆柱形聚（二甲基硅氧烷）孔。在孔内，具有前荧光底物的蛋白酶检测可检测α-胰凝乳蛋白酶活性。我们将给定孔中的α-胰凝乳蛋白酶的浓度保持在0.39 nM，酶与底物的比例为1：6,666分子。底物发出的荧光与酶活性成正比，可由电荷耦合器件检测。这种方法可以同时实时表征数百种酶。我们通过记录和观察其随时间变化的强度轨迹来分析​​单分子动力学。通过使用当前的仪器测试我们的方法，我们确认我们的方法可用于分析提取静态不均一性的单一酶。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号