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【24h】

分割型ルシフェラ一ゼ法を用いたVDRリガンドの高感度検出系の開発と生体ィメー ジングへの応用を目指して

机译：用分裂荧光素1 - 方法方法的VDR配体高灵敏度检测系统的研制与应用对生物

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"分割型ルシフェラーゼ法"という言葉に馴染みのな レ、人が大半だと思うので，前半部分で分割型ルシフエラーゼ法について解説し，後半部分でビタミンD受容 体（VDR)リガンドの検出法について紹介する.分割型 ルシフェラーゼ法とは，タンパク質とリガンド間の相互 作用(protein-ligand interaction ； PLl)やタンパク質とタ ンパク質間の相互作用（protein-protein interaction ； PPl) をルシフユラーゼ発光の増減で検出、評価する方法と して2000年代半ばから発展してきた技術である.この 方法は，ルシフェラーゼタンパク質の発現量を発光量 で評価する一般的なルシフェラーゼレポーターアツセ ィとは原理が全く異なることを理解していただきたレゝ.さて，ルシフェラーゼは，発光基質であるルシフェリン 存在下において発光する酵素であるが，N末端領域 (LucN)およびC末端領域（LucC)に分割すると，酵素 としての機能を失うため，ルシフェリン存在下でも発 光しなくなる.し力、し，図に示したように，リガンドの 結合によって構造変化が生じるタンパク質のリガンド 結合領域（LBD),あるいはタンパク質間相互作用する ことが知られるタンパク質AおよびBにLucNあるい はLucCをそれぞれ繫ぎ合わせた融合タンパク質を発現 させると，リガンド結合後のLBDの構造変化やタンパ ク質A-B間相互作用が起こる際に，解離していたLucN およびLucCが近づいて発光能が復活する.これが分割 型ルシフェラーゼ法の発光原理であり，我々は前者を 分子内構造変化検出型，後者を相互作用検出型バイォ センサーと呼hでいる.分割型ルシフェラーゼ法は， 定量性に優れ，安全で高感度かつ短時間に検出できる 点が長所であることから，近年，PLIやPPIを調節する 化合物のハイスループットスクリーニングゃ生体ィメー ジングへの応用も多数報告されている.
机译：我认为“Dived Luciferase方法”这个词熟悉“Luciferase方法”这个词，所以我们将在上半年解释分裂的leucif灭鼠方法，并在第二个中引入维生素D受体（VDR）配体的检测方法半部分分裂荧光素酶方法是蛋白质 - 配体相互作用; PLL，蛋白质 - 蛋白质相互作用; PPL。该方法是从2000年代中期开发的技术。该方法了解通用荧光素酶报告者ATSUSE评估表达水平具有发光量的荧光素酶蛋白与原理完全不同的事实完全不同。莱特。嗯，荧光素酶是在荧光素存在下发光的酶，这是发光底物，但是当分成N末端时区域（Lucn）和C末端区域（LUCC），荧光素丢失作为酶的功能。即使在存在下，它也不会发光。如图所示，蛋白质的配体结合区域（LBD）导致结构通过配体或蛋白质A和蛋白A和蛋白A和蛋白A和蛋白A和蛋白质A和蛋白质A和蛋白质A和蛋白质A和蛋白质A的改变，并且当配体结合和相互作用后LBD的结构变化时，表达了熔融蛋白。蛋白质AB之间发生，接近LUCN和LUCC。恢复发光能力。这是分裂荧光素酶方法的发光原理，并且我们是相互分子内的结构变化检测类型和后者称为相互作用检测型煮沸传感器。分配的荧光素酶方法是量化了，因为它具有高质量，高灵敏度和短时间，因此近年来报道了调节PLI和PPI的化合物的高通量筛选。

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  • 来源
    《ビタミン》 |2020年第4期|共1页
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  • 正文语种 jpn
  • 中图分类 维生素;
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