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Production, purification and characterization of a 50-kDa extracellular metalloprotease from Serratia marcescens

机译：粘质沙雷氏菌50 kDa细胞外金属蛋白酶的生产，纯化和鉴定

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The extracellular metalloprotease (SMP 6.1) produced by a soil isolate of Serratia marcescens NRRL B-23112 was purified and characterized. SMP 6.1 was purified from the culture supernatant by ammonium sulfate precipitation, acetone fractional precipitation, and preparative isoelectric focusing. SMP 6.1 has a molecular mass of approximately 50,900 Da by sodium dodecyl sulfate/polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The following substrates were hydrolyzed: casein, bovine serum albumin, and hide powder. SMP 6.1 has the characteristics of a metalloprotease, a pH optimum of 10.0, and a temperature optimum of 42 degrees C. The isoelectric point of the protease is 6.1. Restoration of proteolytic activity by in-gel renaturation after SDS-PAGE indicates a single polypeptide chain. SMP 6.1 is inhibited by EDTA (9 micrograms/ml) and not inhibited by antipain dihydrochloride (120 micrograms/ml), aprotinin (4 micrograms/ml), bestatin (80 micrograms/ml), chymostatin (50 micrograms/ml), E-64 (20 micrograms/ml), leupeptin (4 micrograms/ml), Pefabloc SC (2000 micrograms/ml), pepstatin (4 micrograms/ml), phosphoramidon (660 micrograms/ml), or phenylmethylsulfonyl fluoride (400 micrograms/ml). SMP 6.1 retains full activity in the presence of SDS (1% w/v), Tween-20 (1% w/v), Triton X-100 (1% w/v), ethanol (5% v/v), and 2-mercaptoethanol (0.5% v/v). The extracellular metalloprotease SMP 6.1 differs from the serratiopeptidase (Sigma) produced by S. marcescens ATCC 27117 in the following characteristics: isoelectric point, peptide mapping and nematolytic properties.
机译：纯化并鉴定了粘质沙雷氏菌NRRL B-23112的土壤分离物产生的细胞外金属蛋白酶（SMP 6.1）。通过硫酸铵沉淀，丙酮分级沉淀和制备性等电聚焦从培养上清液中纯化SMP 6.1。通过十二烷基硫酸钠/聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），SMP 6.1的分子量约为50,900 Da。水解以下底物：酪蛋白，牛血清白蛋白和生皮粉。 SMP 6.1具有金属蛋白酶的特性，最适pH为10.0，最适温度为42摄氏度。该蛋白酶的等电点为6.1。在SDS-PAGE后通过凝胶内复性恢复蛋白水解活性表明单条多肽链。 SMP 6.1受到EDTA（9微克/毫升）的抑制，而不受抗痛药二盐酸盐（120微克/毫升），抑肽酶（4微克/毫升），Bestatin（80微克/毫升），chymostatin（50微克/毫升），E的抑制-64（20微克/毫升），亮肽素（4微克/毫升），Pefabloc SC（2000微克/毫升），胃抑素（4微克/毫升），磷酰胺（660微克/毫升）或苯甲基磺酰氟（400微克/毫升） ）。 SMP 6.1在SDS（1％w / v），Tween-20（1％w / v），Triton X-100（1％w / v），乙醇（5％v / v），和2-巯基乙醇（0.5％v / v）。细胞外金属蛋白酶SMP 6.1与marcescens ATCC 27117产生的serratiopeptidase（Sigma）的区别在于以下特征：等电点，肽图分析和溶酶特性。

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