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首页> 外文期刊>Antimicrobial agents and chemotherapy. >Discrimination of SHV beta-lactamase genes by restriction site insertion-PCR.
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Discrimination of SHV beta-lactamase genes by restriction site insertion-PCR.

机译：通过限制酶切位点插入PCR鉴别SHVβ-内酰胺酶基因。

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Restriction site insertion-PCR (RSI-PCR) is a simple, rapid technique for detection of point mutations. This technique exploits primers with one to three base mismatches near the 3' end to modulate a restriction site. We have developed this technique to identify described mutations of the bla(SHV) genes for differentiation of SHV variants that cannot be distinguished easily by other techniques. To validate this method, eight standard strains were used, each producing a different SHV beta-lactamase: SHV-1, SHV-2, SHV-3, SHV-4, SHV-5, SHV-6, SHV-8, and SHV-18. Mismatch primers were designed to detect mutations affecting amino acids at positions 8 (SspI), 179 (HinfI), 205 (PstI), 238 (Gly-->Ala) (BsrI), and 240 (NruI) of bla(SHV) genes. All amplimers of the bla(SHV) genes used in this study yielded the predicted restriction endonuclease digestion products. In addition, this study also makes theoretical identification of bla(SHV-6), bla(SHV-8), and 12 novel bla(SHV) variants using the PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) technique possible. By using a combination of PCR-RFLP and RSI-PCR techniques, up to 27 SHV variants can now be distinguished rapidly and reliably. These simple techniques are readily applied to epidemiological studies of the SHV beta-lactamases and may be extended to the characterisation of other resistance determinants.
机译：限制性位点插入PCR（RSI-PCR）是一种检测点突变的简单，快速的技术。该技术利用在3'末端附近具有1-3个碱基错配的引物来调节限制性位点。我们已经开发出这种技术来鉴定bla（SHV）基因的描述突变，以区分其他技术无法轻易区分的SHV变体。为了验证该方法，使用了八个标准菌株，每个菌株均产生不同的SHVβ-内酰胺酶：SHV-1，SHV-2，SHV-3，SHV-4，SHV-5，SHV-6，SHV-8和SHV -18。设计错配引物来检测影响bla（SHV）基因第8位（SspI），179（HinfI），205（PstI），238（Gly-> Ala）（BsrI）和240（NruI）氨基酸的突变。本研究中使用的bla（SHV）基因的所有扩增子均产生了预期的限制性核酸内切酶消化产物。此外，这项研究还使得使用PCR限制性片段长度多态性（RFLP）技术对bla（SHV-6），bla（SHV-8）和12个新颖bla（SHV）变体进行理论鉴定成为可能。通过结合使用PCR-RFLP和RSI-PCR技术，现在可以快速，可靠地区分出多达27种SHV变体。这些简单的技术很容易应用于SHVβ-内酰胺酶的流行病学研究，并可扩展到其他抗性决定簇的表征。

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