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首页> 外文期刊>International journal of immunogenetics >Mitochondrial mutation detection using enhanced multiplex denaturing high-performance liquid chromatography.
【24h】

Mitochondrial mutation detection using enhanced multiplex denaturing high-performance liquid chromatography.

机译：使用增强的多重变性高效液相色谱法检测线粒体突变。

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In this study, we investigated the presence of mutations within the mitochondrial genome in 40 Caucasian subjects using an enhanced multiplex denaturing high-performance liquid chromatography (DHPLC) approach. The enhanced DHPLC approach has increased sensitivity and throughput, and reduced analysis time per individual sample compared to conventional methods. This technique involved amplifying the mitochondrial genome in 18 fragments ranging in size from 300 to 2000 bp using a novel proofreading polymerase (Optimase, Transgenomic Inc., Omaha, NE) with a low misincorporation rate. Fourteen of these fragments underwent subsequent restriction digestion using a combination of five restriction enzymes to enable multiplex DHPLC analysis; the remaining four underwent conventional DHPLC. Using this complete mitochondrial genome-screening approach, we confirmed a number of previously reported mutations and additionally identified a large number of novel mutations using an enhanced DHPLC technique.
机译：在这项研究中，我们使用增强的多重变性高效液相色谱（DHPLC）方法研究了40名白种人受试者中线粒体基因组中突变的存在。与传统方法相比，增强的DHPLC方法具有更高的灵敏度和通量，并减少了每个样品的分析时间。该技术涉及使用新的校对聚合酶（Optimase，Transgenomic Inc.，Omaha，NE）以低错误掺入率将线粒体基因组扩增成300到2000 bp大小的18个片段。其中的十四个片段随后使用五种限制酶进行了限制酶切消化，以进行多重DHPLC分析。其余四个进行常规DHPLC。使用这种完整的线粒体基因组筛选方法，我们确认了许多先前报道的突变，并使用增强的DHPLC技术鉴定了许多新的突变。

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