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Pyrosequencing (TM) technology at elevated temperature

机译：高温下的焦磷酸测序（TM）技术

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To date, the Pyrosequencing(TM) technology has been performed at 28degreesC due to the low thermostability of the firefly luciferase. In this study, firefly luciferase was stabilized in the presence of glycine betaine, allowing DNA sequencing at 37degreesC. By increasing the temperature to 37degreesC, false signals due to primer-dimers and loop-structures were decreased significantly. In addition, a combination of (i) replacing the natural dGTP with 7'deaza-dGTP in the polymerase chain reaction (PCR), (ii) 1.6 m glycine betaine, and (iii) an increase of the temperature to 37degreesC enabled us to sequence a DNA template with the initial sequence 3'-ATGGCCCGGGGGGGAGCTCCA . . . 5'. Furthermore, we describe a method to analyze if a primer forms a primer-dimer with extendable 3'-ends. [References: 15]
机译：迄今为止，由于萤火虫荧光素酶的低热稳定性，Pyrosequencing TM技术已经在28℃下进行。在这项研究中，萤火虫荧光素酶在甘氨酸甜菜碱的存在下保持稳定，可在37℃下进行DNA测序。通过将温度升至37℃，由于引物二聚体和环结构引起的错误信号显着减少。此外，（i）在聚合酶链反应（PCR）中将天然dGTP替换为7'deaza-dGTP，（ii）1.6 m甘氨酸甜菜碱，以及（iii）将温度升高至37°C，使我们能够用初始序列3'-ATGGCCCGGGGGGGAGAGCTCCA对DNA模板进行测序。 。 。 5'。此外，我们描述了一种分析引物是否形成具有可延伸3'端的引物二聚体的方法。 [参考：15]

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