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A Nonredundant Human Protein Chip for Antibody Screening and Serum Profiling

机译：非冗余的人类蛋白质芯片，用于抗体筛选和血清分析

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There is burgeoning interest in protein microarrays, but a source of thousands of nonredundant, purified proteins was not previously available. Here we show a glass chip containing 2413 nonredundant purified human fusion proteins on a polymer surface, where densities up to 1600 proteins/cm~2 on a microscope slide can be realized. In addition, the polymer coating of the glass slide enables screening of protein interactions under nondenaturing conditions. Such screenings require only 200-μl sample volumes, illustrating their potential for high-throughput applications. Here we demonstrate two applications: the characterization of antibody binding, specificity, and cross-reactivity; and profiling the antibody repertoire in body fluids, such as serum from patients with autoimmune diseases. For the first application, we have incubated these protein chips with anti-RGSHis_6, anti-GAPDH, and anti-HSP90β antibodies. In an initial proof of principle study for the second application, we have screened serum from alopecia and arthritis patients. With analysis of large sample numbers, identification of disease-associated proteins to generate novel diagnostic markers may be possible.
机译：对蛋白质微阵列的兴趣正在迅速增长，但是以前没有成千上万的非冗余纯化蛋白质的来源。在这里，我们展示了一种玻璃芯片，其在聚合物表面上包含2413个非冗余纯化的人融合蛋白，在显微镜载玻片上可以实现高达1600个蛋白/ cm〜2的密度。另外，载玻片的聚合物涂层能够筛选非变性条件下的蛋白质相互作用。此类筛选仅需要200μl的样品量，说明了其在高通量应用中的潜力。在这里，我们展示了两种应用：抗体结合，特异性和交叉反应性的表征;以及分析体液中的抗体库，例如自身免疫性疾病患者的血清。对于首次应用，我们将这些蛋白质芯片与抗RGSHis_6，抗GAPDH和抗HSP90β抗体一起孵育。在第二次应用的初步原理研究中，我们从脱发症和关节炎患者中筛选了血清。通过分析大量样本，鉴定与疾病相关的蛋白质以产生新的诊断标记可能是可能的。

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