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首页> 外文期刊>Biochemistry >Overexpression in Escherichia coli and Purification of Human Fibroblast Growth Factor(FGF-2)
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Overexpression in Escherichia coli and Purification of Human Fibroblast Growth Factor(FGF-2)

机译：大肠杆菌中的过表达和人成纤维细胞生长因子（FGF-2）的纯化

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Basic fibroblast growth factor(FGF-2)is a member of a large family of structurally related proteins that affect the growth,differentiation,migration,and survival of many cell types.The human FGF-2 gene(encoding residues 1-155)was synthesized by PCR from 20 oligonucleotides and cloned into plasmid pET-32a.A high expression level(1 g/liter)of a fused protein thioredoxin/FGF-2 was achieved in Escherichia coli strain BL21(DE3).The fusion protein was purified from the soluble fraction of cytoplasmic proteins on a Ni-NTA agarose column.After cleavage of the thioredoxin/FGF-2 fusion with recombinant human enteropeptidase light chain,the target protein FGF-2 was purified on a heparin-Sepharose column.The yield of FGF-2 without N-and C-terminal tags and with high activity was 100 mg per liter of cell culture.Mutations C78S and C96S in the amino acid sequence of the protein decreased FGF-2 dimer formation without affecting its solubility and biological activity.
机译：碱性成纤维细胞生长因子（FGF-2）是影响许多细胞类型生长，分化，迁移和存活的许多结构相关蛋白家族的成员。人类FGF-2基因（编码残基1-155）通过PCR从20个寡核苷酸中合成并克隆到质粒pET-32a中，在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中获得了高表达水平（1 g / l）的融合蛋白硫氧还蛋白/ FGF-2表达。将其溶解于Ni-NTA琼脂糖柱上的可溶级分中。用重组人肠肽酶轻链裂解硫氧还蛋白/ FGF-2融合物后，在肝素-琼脂糖柱上纯化目标蛋白FGF-2。 -2没有N-和C-末端标签且具有高活性的是每升细胞培养物100 mg。在蛋白质的氨基酸序列中突变C78S和C96S减少了FGF-2二聚体的形成，而不影响其溶解度和生物学活性。

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