禽流感血凝素抗原保护剂及提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法

技术领域

本发明涉及兽用生药制品，具体涉及一种禽流感血凝素抗原保护剂及提高 胚液中禽流感血凝素稳定性的方法。

背景技术

禽流感是一种由A型流感病毒引起的传染性疾病综合征，被国际兽疫局定 为A类传染病。按病原性的致病力，禽流感可分为高致病性、低致病性和非致 病性三大类。非致病性禽流感不会引起明显症状，仅使染病的禽鸟体内产生病 毒抗体。低致病性禽流感可使禽类出现轻度呼吸道症状，食量减少、产蛋量下 降，出现零星死亡。高致病性禽流感最为严重，发病率和死亡率高。根据抗原 的不同，我国商品化的禽流感疫苗分为H5亚型禽流感疫苗、H9亚型禽流感疫 苗和H5-H9亚型二价禽流感疫苗三大类。

禽流感血凝素HA是禽流感病毒的主要抗原基因，也刺激禽类产生免疫保 护的重要抗原。目前禽流感疫苗均是灭活疫苗，禽流感灭活疫苗免疫禽类之后， 在临床上评价免疫效果的重要方法就是测定抗血凝素HA特异性抗体的滴度。 其方法是使用禽流感标准抗原中和血清中抗血凝素HA特异性抗体之后，测定 剩余血凝素对鸡红细胞的凝集作用。因此，血凝素HA不论是对于禽流感疫苗 还是对禽流感标准抗原都具有十分重要的作用。维持禽流感病毒血凝素HA的 稳定性具有重要意义。目前禽流感疫苗的半成品即含禽流感病毒的胚液在 2℃-8℃保存时间不超过1个月，而禽流感病毒抗原保存在-20℃。国内活疫苗的 保护剂主要成分为脱脂牛奶、蔗糖、明胶等，保护剂组方简单、配制简便，抗 原对温度敏感，如果在2℃-8℃条件下，保存期只有4个月-6个月，多数疫苗需 要在-15℃以下保存。另外我国也有不少关于活疫苗的耐热保护剂的研究报道， 而针对提高禽流感病毒血凝素HA稳定性的研究还未见任何报道。

发明内容

为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种禽流感血凝素抗原保 护剂，用于保护胚液中的禽流感病毒血凝素，极大的提高了胚液中禽流感病毒 血凝素的稳定性，延长其保存期限。

本发明的另一目的在于提供一种提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法， 添加本发明的禽流感病毒血凝素保护剂，达到延长胚液中的禽流感病毒血凝素 的保存期限。

为实现上述目的本发明所采用的技术方案如下：

一种禽流感血凝素抗原保护剂，其是由以重量百分比计的以下组分配制而 成：

甘氨酸0.5-1%        异亮氨酸0.5-3%        丝氨酸0-7%

丙氨酸0.5-1%        苯丙氨酸1-5%          酪氨酸0-6%

缬氨酸1-2%          脯氨酸1-6%            半胱氨酸0.5-8%

亮氨酸0-3%          色氨酸0.5-4%          蛋氨酸0.5-5%

天冬酰胺0.5-4%      谷氨酰胺0.5-5%        苏氨酸0-3%

天冬氨酸0.5-6%      谷氨酸0-0.5%          赖氨酸0.5-2%

精氨酸1-10%         组氨酸0-5%            亚精胺1-20%

精胺0-10%；         葡萄糖0.5-20%         果糖5-40%

蔗糖                乳糖2-30%             白蛋白5-30%

甘油1-30%          明胶0-20%           葡聚糖0-2%；

各组分的重量百分比之和为100%。

一种提高胚液中禽流感血凝素稳定性的方法，其包括以下步骤：

1）按照权利要求1的配方配制禽流感血凝素抗原保护剂；

2）在灭活的含有禽流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混 合均匀；

3）将步骤2）处理后的混合液中加入0.1-0.3ml甲醛溶液，并混合均匀；

4）在步骤3）处理后的混合液中加入粉末型PBS缓冲对使PBS缓冲盐浓度 达到0.8-1.2mM/L，混匀；

5）将步骤4）处理后的混合液置于35-40℃的培养箱中保存即可。

本发明优选的方案中，步骤2）按照100ml禽流感胚液中加入8-12g禽流感 血凝素抗原保护剂混合均匀。较佳的方案中，按照100ml禽流感胚液中加入10g 禽流感血凝素抗原保护剂混合。

本发明一个优选的方案中，步骤4）中控制混合液的pH值为7.0-7.4。因为 禽流感血液凝集素在pH较低时降解速度比较快，因此当维持pH值在上述范围 之内有利于其保存。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：本发明的提禽流感血凝素抗原保 护剂高胚液中禽流感病毒稳定性，通过本发明所述的方法处理之后，使得胚液 中禽流感病毒在37℃时间延长至少35天以上。

下面结合具体的实施方式对本发明作进一步详细说明。

具体实施方式

以下是本发明优选的实施例。

实施例1

按照表1中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有 H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽 流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合 液中加入0.2ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲 对使PBS缓冲盐浓度达到1mM/L，混匀，最后将混合液置于37℃的培养箱中保 存即可。

表1

实施例2

按照表2中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有 H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽 流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合 液中加入0.1ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲 对使PBS缓冲盐浓度达到0.8mM/L，混匀，最后将混合液置于35℃的培养箱中 保存即可。

表2

实施例3

按照表3中的配比配制禽流感血凝素抗原保护剂，并按照以下方法对含有 H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液进行处理：在灭活的含有H5（Re-5）亚型禽 流感血凝素胚液中加入禽流感血凝素抗原保护剂，并混合均匀；处理后的混合 液中加入0.3ml甲醛溶液，并混合均匀；然后在混合液中加入粉末型PBS缓冲 对使PBS缓冲盐浓度达到1.2mM/L，混匀，最后将混合液置于40℃的培养箱中 保存即可。

表3

对比实施例1

在100毫升灭活的含有H5（Re-5）亚型禽流感血凝素胚液中加入10毫升纯 水，并且加入粉末型PBS缓冲对使其盐浓度达到1mM/L，同时加入0.2毫升甲 醛溶液，混匀，并且放入37℃培养箱培养，作为对照组。检测本发明实施例1-3 和对照组的禽流感病毒滴度（即HA价）；比较结果见表4。

表4

上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的 范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换 均属于本发明所要求保护的范围。