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一种非连接依赖性的快速克隆方法

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本发明涉及一种对供体DNA片段进行快速克隆的方法。该方法首先通过在扩增引物5’端引入附加序列使得供体DNA两末端与受体DNA两末端分别有至少12bp的同源序列；接着将受体DNA线性化，最后供体DNA与线性化的受体DNA在核酸外切酶和单链结合蛋白的催化下在体外高效形成重组中间体，该中间体直接转化感受态细胞即可完成供体DNA至受体DNA的克隆过程。本发明所述方法不需要对供体DNA进行酶切处理，即可实现单个供体DNA片段的快速定向克隆，也可实现多个供体DNA片段的一步拼接克隆，还可以用作DNA定点突变。该方法能够为遗传学、分子生物学、生物化学等研究以及高通量克隆提供一个快速高效的操作平台。

著录项

公开/公告号CN103160495A

专利类型发明专利
公开/公告日2013-06-19

原文格式PDF
申请/专利权人张力军;徐晓昱;
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申请/专利号CN201110418450.9
发明设计人张力军;徐晓昱;
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申请日2011-12-15
分类号C12N15/10(20060101);
代理机构
代理人
地址 210019 江苏省南京市建邺区奥体大街130号奥体名座F栋608
入库时间 2024-02-19 18:38:18

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2018-04-17

发明专利申请公布后的视为撤回 IPC(主分类):C12N15/10 申请公布日:20130619 申请日:20111215

发明专利申请公布后的视为撤回
2017-05-31

文件的公告送达 IPC(主分类):C12N15/10 收件人:张力军文件名称:第一次审查意见通知书申请日:20111215

文件的公告送达
2015-05-13

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/10 申请日:20111215

实质审查的生效
2013-06-19

公开

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