一种两系杂交水稻盐两优888种子纯度检测方法

技术领域

本发明属于种子质量检测技术领域，涉及杂交水稻种子纯度检测的方法，更具体 地说是一种两系杂交水稻盐两优888种子纯度检测方法。

背景技术

水稻是我国第一大粮食作物，我国是世界上最大的杂交水稻种子生产国和消费国， 生产高纯度的水稻杂交种都是充分发挥杂种优势增产潜力的基础。近期，两系杂交水稻 的研究和推广为我国水稻生产做出了积极贡献，由于两系杂交水稻的母本为光温敏核不 育系，光温敏核不育系在其进入生殖生长的前期容易受光照、温度等环境条件的影响， 当环境温度低于23.5-24.0℃时，光温敏核不育系的育性开始转换，由不育转换为可育， 表现为自交结实从而影响杂交水稻种子的纯度。

杂交水稻种子纯度的快速鉴定，一直是种子质量检测部门、科研单位、种子生产 单位等共同关心的问题。目前，杂交水稻种子纯度的鉴定主要有异地种植鉴定法、同工 酶鉴定法和分子鉴定法等几种方法。异地种植鉴定法是较常用的方法，但由于杂交水稻 种子异地种植鉴定常常安排在海南进行，一般需要一个水稻生长周期，即每年11月份 送样到海南种植、在次年的4-5月份才能知道鉴定结果，鉴定结果往往都滞后于种子的 销售，这也造成每年都有因种子纯度问题而引起种子质量纠纷事件。近期，同工酶鉴定 法和分子鉴定法统等室内鉴定技术已相对成熟，应用亦较为普遍。室内鉴定法较异地种 植鉴定法所需的鉴定时间短、相对成本亦要少许多。

水稻品种间耐盐性差异很大。国内外水稻耐盐性鉴定的方法较多，主要有种子萌 发鉴定、苗期鉴定，田间筛选鉴定，培养室生化鉴定等方法。

发明内容

盐城明天种业科技有限公司在筛选耐盐水稻品种的几年实践中发现，江苏沿海地 区农业科学研究所育成的两系杂交水稻盐两优888的母本两系光温敏核不育系盐582S 在幼苗生长期的耐盐能力达0.5%左右水平，明显高于一般水稻品种，包括两系杂交水 稻盐两优888。因此，利用这一原理，将盐两优888种子在0.5%盐(Nacl)浓度胁迫条件 下进行幼苗期生长鉴定试验，可以根据幼苗对盐份胁迫的表现，就可以鉴定出盐两优888 制种田间中其母本盐582S自交结实的种子，从而可以准确、快捷、实用鉴定盐两优888 种子的纯度。

本发明的目的在于提供一种对两系杂交水稻盐两优888种子的纯度进行准确、快 捷、实用检测的方法。

本发明的技术方案是：

一种两系杂交水稻盐两优888种子纯度检测方法，其具体步骤是：

（1）常规浸种催芽：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的盐两优888种 子1500粒以上(对照盐582S种子500粒以上)，按照常规做法进行消毒、浸种、催芽， 催芽要适度，掌握种子破胸、露白即可。

（2）沙培基质准备：先将大小均匀一致消毒后的细沙装在培养皿(箱)中，高度 1.5-2.0cm；往培养皿(箱)中加入配制好的浓度为0.5%盐(Nacl)溶液至细沙湿润、适合种 子萌发即可，4次重复(含对照1个重复)，每个重复要求播种500粒以上。

（3）盐(Nacl)胁迫培育幼苗：将破胸露白的受检种子均匀播种在培养皿(箱)内的沙 培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿(箱)放置在人 工气候箱中，温度保持28-30℃，湿度保持70-75%；3-5d后培养皿(箱)中保持0.5%盐(Nacl) 浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐(Nacl)溶液，以减少盐浓度的变化。

（4）幼苗生长观察记载：出苗后至3-4叶期（播种后15d左右），连续观察记载幼 苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量（表 现不耐盐即为盐两优888杂种F₁），而在盐(Nacl)胁迫条件下与对照相同、生长正常（表 现耐盐即为盐582S自交结实种子）的秧苗数量。

（5）计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为盐两优888种子 的实际纯度。受检样品纯度计算公式是：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总 株数×100。

本发明利用根据经多年研究发现江苏沿海地区农业科学研究所育成的两系杂交水 稻盐两优888的母本光温敏核不育系盐582S幼苗期的耐盐性显著高于一般水稻品种的 原理，在0.5%盐(Nacl)浓度胁迫条件下，将盐两优888种子和盐582S种子(对照)在实验 室培育幼苗，出苗后至3-4叶期（播种后15d左右），观察记载幼苗生长情况，连续出 现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的、说明不耐盐即为盐两优888杂种 F₁；而在盐(Nacl)胁迫条件下生长正常的、说明耐盐即为上季盐两优888制种田间其母 本盐582S自交结实种子，从而可以计算出盐两优888种子的纯度。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明进行详细说明。

一种两系杂交水稻盐两优888种子纯度检测方法，其具体步骤是：

（1）浸种催芽：选择籽粒饱满、整齐一致、无破损、无霉病的盐两优888种子1500 粒以上(对照盐582S种子500粒以上)，将种子用0.1%HgCl消毒10min，然后用蒸馏水 冲洗4-5次，再浸种、催芽，催芽要适度，掌握种子破胸、露白即可。

（2）沙培基质准备：先将大小均匀一致消毒后的细沙装在培养皿(箱)中，高度 1.5-2.0cm；往培养皿(箱)中加入配制好的浓度为0.5%盐(Nacl)溶液至细沙湿润、适合种 子萌发即可，4次重复(含对照1个重复)，每个重复要求播种500粒以上。每个重复要 根据培养皿(箱)的大小可以设置多个培养皿(箱)。所述浓度为0.5%盐(Nacl)溶液是由 5gNacl溶解于1000ml的蒸馏水配制而成。

（3）盐(Nacl)胁迫培育幼苗：将破胸露白的受检种子均匀播种在培养皿(箱)内的沙 培基质上，然后用消毒过的细沙进行覆盖，不露种即可；将播种后培养皿(箱)放置在人 工气候箱中，温度保持28-30℃，湿度保持70-75%；3-5d后培养皿(箱)中保持0.5%盐(Nacl) 浓度的薄水层，同时每12h更换一次0.5%盐(Nacl)溶液，以减少盐浓度的变化。

（4）幼苗生长观察记载：出苗后至3-4叶期（播种后15d左右），连续观察记载幼 苗生长情况，统计连续出现叶尖发生卷曲、叶片出现萎蔫、生长减缓症状的幼苗数量（表 现不耐盐即为盐两优888杂种F₁），而在盐(Nacl)胁迫条件下与对照相同、生长正常（表 现耐盐即为盐582S自交结实种子）的秧苗数量。

（5）计算受检样品纯度：受检样品纯度为3次重复平均值，即为盐两优888种子 的实际纯度。受检样品纯度计算公式是：

受检样品纯度(%)=(供检样品幼苗总株数-非本品种幼苗株数)∕供检样品幼苗总 株数×100。

几年来，盐两优888种子纯度检验结果与田间种植鉴定纯度结果对照比较，二者 的结果高度一致(见表1、2、3)。

表1：2010年利用耐盐性检测盐两优888种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表。

表2：2011年利用耐盐性检测盐两优888种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表。

表3：2012年利用耐盐性检测盐两优888种子纯度与田间种植鉴定纯度对照表。

2010年、2011年、2012年利用耐盐性检测盐两优888种子纯度与田间种植鉴定纯 度结果，经t测验：各年度利用耐盐性检测盐两优888种子纯度与田间种植鉴定纯度结 果之间的差异不显著，说明两种不同方法检测的纯度结果的一致性。同时也说明利用不 同水稻品种耐盐性的差异不仅可以鉴定两系杂交水稻盐两优888的真实性和种子纯度的 检验，而且相对于田间种植鉴定方法，其纯度检测准确、快捷、实用。

应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据上述说明加以改进或变换， 而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。