从窄叶鲜卑花降脂减肥有效部位得到的单萜苷化合物及其应用

技术领域

本发明涉及化合物分离纯化领域，具体地涉及从窄叶鲜卑花降脂减肥有效部位 得到的单萜苷化合物及其应用。

背景技术

窄叶鲜卑花（Sibiraea angustata(Rehd.)Hand.-Mazz）为蔷薇科鲜卑花属植物，为 藏族民间常用药物，其叶和嫩枝入药，又名柳茶，具有清胃热、助消化、调节脂代 谢的功效。文献报道柳茶有效部位提取物可“预防肥胖症和治疗高胆固醇血症（降低 血液中的甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）和脂蛋白（a）浓度，改 善血液粘稠度）”（发明专利“一种预防肥胖症和降低高血脂的柳茶有效部位提取物 及其制备方法和用途”CN10173244A）。柳茶有效部位提取物（发明专利“一种柳茶有 效部位提取物及其制备方法和用途”CN102641352A）可用于减脂减肥的药物或保健 品。本发明人在前期工作基础上，从窄叶鲜卑花有效部位中提取得到两种具有降脂 减肥作用的单萜苷化合物，并采用核磁共振和高分辨质谱技术对其化学结构进行了 鉴定。

发明内容

本发明的目的是提供从窄叶鲜卑花（柳茶）降脂减肥有效部位得到的单萜苷化 合物。

本发明的再一目的是提供单萜苷化合物药学上可接受的盐。

本发明的再一目的是提供上述单萜苷化合物用于预防和治疗肥胖症以及由肥胖 引起的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症等疾病的 药物以及与上述疾病有关的医药和保健品用途。

根据本发明的从窄叶鲜卑花（柳茶）降脂减肥有效部位得到的单萜苷化合物， 通过以下步骤分离获得：

（1）取干燥粉碎的窄叶鲜卑花叶和嫩枝，用热水(可以用甲醇（10-90%）水溶 液、乙醇（10-90%）溶液、丙酮（10-80%）溶液)回流提取，减压浓缩除去溶剂得 1.1kg半流体状浸膏；

（2）半流体状浸膏加水（1L）分散后，依次用石油醚（3×1L）、二氯甲烷（3×1 L）、乙酸乙酯（3×1L）进行萃取，浓缩萃取液，得石油醚浸膏、二氯甲烷浸膏、乙 酸乙酯浸膏；

（3）对乙酸乙酯浸膏经硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得A-D四 部分浸膏，对D浸膏（石油醚-乙酸乙酯（体积比1：1）洗脱部分）再次经硅胶柱层 析，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇混合溶剂梯度洗脱，分别得化合物（1）粗品和化合 物（2）粗品。化合物（1）和（2）粗品再分别经反复Sephadex LH-20凝胶柱色谱和 硅胶柱纯化，得纯品化合物（1）和（2）。化合物（1）和（2）的结构经¹H NMR、¹³CNMR 及HMBC、HSQC、HR-MS进行结构鉴定和数据归属。

根据本发明的单萜苷化合物，其为1-O-β-D-(6”-O-甲基阿魏酰基)-吡喃葡萄糖基- 香叶醇-10，5-内酯（1）及3，7-二甲基-3(Z)-八烯-5-酮1-氧-β-D-葡萄糖苷（2，化 合物的结构式如式（1）和式（2）：

本发明提供了上述单萜苷化合物药学上可接受的盐，可以是与下列胺基或金属离 子形成的加成盐：NH₄⁺、Na⁺、K⁺、Mg²⁺、Li⁺、Ca²⁺、Sr²⁺、Ca²⁺、Zn²⁺等。

本发明还提供了上述单萜苷化合物，例如1-氧-β-D-(6”-O-甲基阿魏酰基)-吡喃葡 萄糖基-香叶醇-10，5-内酯（1）及3，7-二甲基-3(Z)-八烯-5-酮1-氧-β-D-葡萄糖苷（2）， 及其药用盐用于预防和治疗肥胖症以及由肥胖引起的高血脂、高血压、糖尿病、脂 肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症等疾病的药物以及与上述疾病有关的医药和保 健品用途。

本发明的特点是，从窄叶鲜卑花提纯的单萜苷化合物，例如化合物（1）及化合 物（2），具有抑制前脂肪细胞3T3-L1增殖分化作用，提供了可用于肥胖症以及肥胖 引起的的高血脂、高血压、糖尿病、脂肪肝、冠心病、睡眠呼吸暂停综合症等疾病 的药物以及与上述疾病有关的医药和保健品用途。

附图说明

图1显示化合物（1）对3T3-L1前脂肪细胞有一定的生长抑制作用。

图2显示化合物（2）对3T3-L1前脂肪细胞有一定的生长抑制作用。

图3显示化合物（1）对前脂肪细胞3T3-L1的分化抑制。

图4显示化合物（2）对前脂肪细胞3T3-L1的分化抑制。

具体实施方式

通过下面实施例对本发明进一步详细描述，但这些实施例并不意味着对本发明任 何限制。

实施例1

取干燥粉碎的窄叶鲜卑花叶和嫩枝10kg，用热水回流提取，减压浓缩除去溶剂 得1.1kg半流体状浸膏。

半流体状浸膏加水（1L）分散后，依次用石油醚（3×1L）、二氯甲烷（3×1L）、 乙酸乙酯（3×1L）进行萃取，浓缩萃取液，得石油醚浸膏、二氯甲烷浸膏、乙酸乙 酯浸膏（410g）。

对乙酸乙酯浸膏（200g）经硅胶柱色谱，采用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，得A （石油醚-乙酸乙酯（体积比约20-10：1）洗脱部分，85g）、B（石油醚-乙酸乙酯（体 积比约5：1）洗脱部分，45g）、C（石油醚-乙酸乙酯（体积比约3：1）洗脱部分， 35g）、D（石油醚-乙酸乙酯（体积比约1：1）洗脱部分，25g）四部分浸膏。对D 浸膏再次经硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯-甲醇（2：1：0-0：1：1，体积比） 洗脱，分别得化合物（1）粗品（35mg）和化合物（2）粗品（25mg）。化合物（1） 粗品经反复Sephadex LH-20凝胶柱色谱（用甲醇（10%-70%）水溶液梯度洗脱）和 硅胶柱（洗脱用石油醚-乙酸乙酯-甲醇（2:1:0.1，体积比））纯化，得纯品化合物（1） （23mg）。化合物（2）粗品经反复Sephadex LH-20凝胶柱色谱（用甲醇（50%）水 溶液洗脱）和硅胶柱（洗脱用石油醚-乙酸乙酯-甲醇（3:1:0.1，体积比））纯化，得 纯品化合物（2）（15mg）。

化合物（1），浅黄色胶状物，易溶于甲醇，可溶于丙酮、水中。¹H和¹³C NMR 数据参见表1。HR-FABMS m/z535.2174[M+H]⁺(Calcd[M+H]⁺535.2139for  C₂₇H₃₅O₁₁⁺)，可以用分子式C₂₇H₃₄O₁₁表示，命名为1-氧-β-D-(6”-O-甲基阿魏酰基)-吡 喃葡萄糖基-香叶醇-10，5-内酯。

化合物（2），无色针状晶体，易溶于氯仿、甲醇及乙醇，可溶于水中。[α]_D²⁰-20.4 (c0.56，MeOH)；¹H和¹³C NMR数据参见表2；HR-FABMS m/z333.1917[M+H]⁺(Calcd 333.1913for C₁₆H₂₉O₇⁺)。可以用分子式C₁₆H₂₈O₇表示，命名为3，7-二甲基-3(Z)-八 烯-5-酮1-氧-β-D-葡萄糖苷。

表1化合物（1）的¹H NMR、¹³C NMR数据（CD₃OD，δppm,，J Hz）

表2化合物（2）的¹H NMR、¹³C NMR数据（400MHz,CD₃OD,δppm,J Hz）

实施例2

化合物（1）对前脂肪细胞3T3-L1的生长抑制

前脂肪细胞3T3-L1按5×10⁴个／mL的密度接种到6孔培养板，在含有10％小 牛血清的高糖DMEM培养基37℃、5％CO₂孵箱中培养。24h后弃去培养液，其中3 孔加入100μL含有不同质量浓度的化合物（1）的培养液（150～1500 μg/mL），以不含有样品的高糖DMEM为空白对照，温箱孵育72h。除去培养液后， 加入含有0.5mg/mL MTT的DMEM10培养基孵4h，再加入100μL的0.1g/mL  SDS(含0.1mol/L HCl)溶液过夜，以完全溶解出MTT紫色结晶产物。用酶标仪在 570nm处（以630nm为参考波长）测定光密度值。实验重复3次。以药物浓度的对 数与细胞存活率进行直线回归并求出IC₅₀（半数抑制浓度，即细胞存活率为50%时 所需药物浓度）。

从图1可知，化合物（1）对3T3-L1前脂肪细胞有一定的生长抑制作用。随着 化合物（1）浓度的升高(150～800μg/mL)，其抑制细胞生长的能力增强，细胞存活 率从约100%降至36%。当提取物质量浓度介于900～1500μg/mL时，细胞存活率基 本不变。经计算，化合物（1）对3T3-L1前脂肪细胞生长抑制的IC50为(485.2± 18.2)μg/mL。试验结果表明化合物（1）对Swiss小鼠前脂肪细胞3T3-L1有一定的 生长抑制作用。

实施例3

化合物（2）对前脂肪细胞3T3-L1的生长抑制

前脂肪细胞3T3-L1按5×10⁴个／mL的密度接种到6孔培养板，在含有10％小 牛血清的高糖DMEM培养基37℃、5％CO₂孵箱中培养。24h后弃去培养液，其中3 孔加入100μL含有不同质量浓度的化合物（2）的培养液（150～1500 μg/mL），以不含有样品的高糖DMEM为空白对照，温箱孵育72h。除去培养液后， 加入含有0.5mg/mL MTT的DMEM10培养基孵4h，再加入100μL的0.1g/mL  SDS(含0.1mol/L HCl)溶液过夜，以完全溶解出MTT紫色结晶产物。用酶标仪在 570nm处（以630nm为参考波长）测定光密度值。实验重复3次。以药物浓度的对 数与细胞存活率进行直线回归并求出IC₅₀（半数抑制浓度，即细胞存活率为50%时 所需药物浓度）。

从图2可知，化合物（2）对3T3-L1前脂肪细胞有一定的生长抑制作用。随着 化合物（2）浓度的升高(150～1000μg/mL)，其抑制细胞生长的能力增强，细胞存 活率从约100%降至35%。当提取物质量浓度介于1000～1500μg/mL时，细胞存活率 基本不变。经计算，化合物（2）对3T3-L1前脂肪细胞生长抑制的IC50为(349.5± 20.2)μg/mL。试验结果表明化合物（2）对Swiss小鼠前脂肪细胞3T3-L1有一定的 生长抑制作用。

实施例4

化合物（1）和（2）对前脂肪细胞3T3-L1的分化抑制

将3T3-L1细胞接种到24孔培养板，设对照组、药物组1（化合物1）、药物组 （化合物2）。不含样品的DMEM培养液为空白对照，化合物（1）和（2）的浓度均为 30、40、50μmol／L。在含有lO％小牛血清的高糖DMEM培养基37℃、5％CO₂孵箱中 培养，待细胞达到70％融合时开始加分化培养基，其中含有胰岛素O.25μmol／L、 甲状腺素0.2nmol／L、地塞米松O.25μmol／L、IBMX O.5nmol／L。每48小时换液 1次，至诱导分化的第12天，将细胞用油红O染色，提取油红O染液，在分光光度计 490nm波长处测及吸光度(A)值。

红O染色试验结果（图3、图4）显示，分化的第12天，与对照组比较，经药 物组（1）和组（2）处理的各组脂肪细胞3T3-L1中产生的甘油三酯（TG）均低于对 照组。说明化合物（1）和（2）均可一定程度上抑制前脂肪细胞的分化，且其抑制 作用呈现一定的剂量效应。