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外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DNA的方法

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本发明公开了外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成ＤＮＡ的方法。步骤如下：首先将目标片段选取模版，然后在ＰＣＲ试管中配置反应体系；混合摇匀，高速离心；烤箱中孵育３分钟，温度为７０－７５摄氏度；冰上冷却１分钟；微量离心机简短离心；放入三倍体积的缓冲液以及核糖核酸酶抑制剂、逆转录酶分别2倍体积；再次孵育，时间1-1.5小时；直接取至冰上，冷却3-5分钟后高速离心，于零下50-80温度下保存即可，再次孵育之前需要加入无水乙醇1-1.5倍体积。本发明的有益效果是：操作简单，成本较低，纯度较高，再现性强，数据精确。

著录项

公开/公告号CN103614366A

专利类型发明专利
公开/公告日2014-03-05

原文格式PDF
申请/专利权人辛竹;
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申请/专利号CN201310537861.9
发明设计人辛竹;
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申请日2013-11-05
分类号C12N15/10;
代理机构
代理人
地址 116000 辽宁省大连市西岗区中山路222号血液净化中心
入库时间 2024-02-19 21:57:24

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2017-06-23

发明专利申请公布后的视为撤回 IPC(主分类):C12N15/10 申请公布日:20140305 申请日:20131105

发明专利申请公布后的视为撤回
2014-03-05

公开

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1. 外周血单核细胞基因中mRNA逆转录成DNA的方法 [P] . 中国专利： CN103614366A . 2014-03-05
2. 外周血单核细胞基因组DNA的提取方法 [P] . 中国专利： CN103614364A . 2014-03-05
3. Control primer annealing to improve the specificity of annealing in nucleic acid amplification kit.Methods for amplifying a nucleic acid sequence of a DNA or a mixture of nucleic acids.And for selectively amplifying a nucleic acid sequence of a target DNA or a mixture of nucleic acids, and a sequence of the target nucleic acid from a mRNA.Method for detecting the complementarity of DNA to mRNA differentially expressed in two or more samples of nucleic acid, methods for amplifying a fragment of the cDNA and DNA quickly target.And to amplify a population of cDNAs of filament double full-length complementary to mRNAs cDNAs, and filament double fortified with 5 'complementary to mRNAs,Method to amplify rather than a sequence of nucleotu00ecdeo target at the same time, methods for producing a digital printing gDNA DNA, and RNA in a sample of mRNA.Method for identifying segments of homology is conserved in a family of multigene from a sample of mRNA, a method for the mutagenesis in a target [P] . BR0214741A . 2004-11-23

机译：控制引物退火，以提高核酸扩增试剂盒中退火的特异性。扩增DNA或核酸混合物的核酸序列的方法以及选择性扩增靶DNA或核酸混合物的核酸序列的方法用于检测DNA与两个或多个核酸样品中差异表达的mRNA的互补性的方法，扩增cDNA和DNA片段的方法可快速靶向。全长与mRNA cDNA互补的双细丝cDNA的cDNA群体，以及与mRNA互补的5'增强双细丝的cDNA，同时扩增而不是核苷酸靶序列的方法，产生数字印刷gDNA DNA的方法mRNA样品中的RNA和RNA.mRNA样品的多基因家族中用于鉴定同源片段的方法是保守的，这是一种在靶标中诱变的方法
4. Control primer annealing to improve the specificity of annealing in nucleic acid amplification, kit, methods for amplifying nucleic acid sequences of DNA and sequence of target nucleic acid or a mixture of nucleic acids, to detect the complementari Dade of DNA to mRNA differentially expressed in two or more samples of nucleic acid.To amplify a fragment of the cDNA target quickly, to amplify a population of cDNAs of filament double full-length complementary to mRNAs cDNAs, and filament double fortified with 5 'complementary to mRNAs to amplify rather than a sequence of nucleotide al VO at the same time, to produce a digital printing gDNA DNA, and RNA in a sample of mRNA.To identify segments of homology is conserved in a multigene family from a sample of mRNA, to identify a variation of nucleotide in a target nucleic acid, for mutagenesis in a target nucleic acid, and use of the initiator [P] . BRPI0214741B1 . 2015-05-12

机译：控制引物退火以改善核酸扩增中退火的特异性，试剂盒，扩增DNA核酸序列和靶核酸序列或核酸混合物的方法，检测DNA与mRNA互补表达的互补性（两种）或更多核酸样品。要快速扩增cDNA靶标的片段，以扩增与mRNA cDNA互补的长丝两倍全长的cDNA群体，并用与mRNA互补的5'双重修饰的长丝进行扩增而不是序列同时鉴定一个核苷酸的VO片段，以产生一个数字印刷的gDNA DNA和一个mRNA样品中的RNA。从一个mRNA样品中鉴定一个多基因家族中的同源片段是保守的，以鉴定一个核苷酸中一个核苷酸的变异。靶核酸，用于在靶核酸中诱变，以及引发剂的用途
5. Modified gene encoding a rna, protein, polypeptide or peptide, vector, methods for controlling the production of a protein, polypeptide or peptide from a gene, to modify a gene, to remove a 5'-cap structure and / or a 3'-pulley tail of a pre-mRNA or mRNA transcribed from a gene, for controlled production of a protein, polypeptide or peptide within a cell, of evolution and in vitro selection for the production of a ligand-bound RNA sequence of evolution and in vitro selection for the production of a ligand-dependent self-cleavable RNA sequence, synthetic DNA molecule, combination of ligand and modified gene, dna, and ligand-dependent self-cleaving synthetic RNA molecule [P] . BR0014632A . 2002-06-18

机译：编码RNA，蛋白质，多肽或肽的修饰基因，载体，控制基因中蛋白质，多肽或肽的产生，修饰基因，去除5'-帽结构和/或3'-的方法从基因转录的前mRNA或mRNA的滑轮尾，用于控制细胞内蛋白质，多肽或肽的产生，进化和体外选择，以产生配体结合的RNA进化和体外选择序列用于生产依赖配体的自切割RNA序列，合成DNA分子，配体和修饰基因的组合，dna和依赖配体的自切割合成RNA分子