木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香糖苷半合成的方法

技术领域

本发明涉及由橙皮苷半合成木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香苷，橙皮素-7-O-葡萄糖苷半合成木犀草苷，和橙皮素半合成木犀草素的方法，其领域属于化学和医药。

背景技术

橙皮苷及木犀草素资源对比：橙皮苷广泛存在于芸香科植物中，如橘皮等，柑橘也是世界最大的水果，我国有丰富的柑桔资源，在国内对柑桔的利用仅局限在对柑桔果实的利用，对果皮还没引起足够的重视，柑橘皮渣作为加工的副产品占30%~50%。仅有少部分被回收作为陈皮和提取橙皮苷使用，但大部分被丢弃，造成极大的浪费和环境污染。2010版中国药典规定青皮含橙皮苷不得低于5.0％，陈皮含橙皮苷含量不得低于3.5%，橙皮苷来源丰富，提取工艺简单，价格低廉，每公斤90％橙皮苷约为180元。以橙皮苷作为原料，可以半合成地奥明、香叶木素、木犀草素、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、甲基橙皮苷。其中木犀草素及其糖苷类是3 , 4 , 5, 7- 四羟基黄酮类化合物及其糖苷衍生物，主要存在于菊花、金银花、络石藤、羊乳、透骨草等植物中，具有很高的抗炎、抗氧化、抗肿瘤等生物活性。然木犀草素在天然界中含量较低，价格昂贵，98%木犀草素每公斤为2000元。

橙皮苷半合成木犀草素现有方法：可通过橙皮苷半合成制备木犀草素，现有文献或专利报道的方法通常有三种：(1)橙皮苷水解橙皮素，橙皮素脱氢生成香叶木素，香叶木素脱甲基制备木犀草素，其反应式见（I）（[1] 李玉山.一种橙皮苷制备木犀草素的新技术[P]. 2013，CN，201310004892.8）；(2) 橙皮苷脱氢生产地奥司明，地奥司明水解生成香叶木素，香叶木素脱甲基制备木犀草素，3步总收率为35%，其反应见（II）（[2] 刑有权，孙志忠，韩文辉，韩晓玲.木犀草素及葡萄糖苷的半合成[J].中国医药工业杂志,1994, 25（11）：484-487）；(3) 橙皮苷水解橙皮素，橙皮素脱甲基生成圣草酚，圣草酚脱氢生成木犀草素，三步总收率为45.9%，其反应见（III）（[3] 孙志忠，郝文辉，段树红，等.木犀草素的半合成. 中国现代应用药学杂志，1999，16（1）：30-31）。

橙皮苷半合成木犀草素缺陷：上述橙皮苷半合成木犀草素的三种方法，均为三步，每一步均用到较多有机试剂，有些试剂未加回收，一方面增加了成本，另一方面污染环境；每一步产品均需要纯化、干燥等处理，一方面生产周期长，另一方面处理过程中导致样品有一定损失，降低了产品的收率，分离较为麻烦。如以香叶木素脱甲基为例说明：微溶于冰醋酸中，用冰醋酸－HBr脱甲基，同样存在冰醋酸－HBr难以回收。故其脱甲基方法常用吡啶－三氯化铝，但由于吡啶和三氯化铝形成盐，难以形成均相溶剂，故其用量大，由于吡啶能和三氯化铝及酚形成盐，回收率有限，对环境污染较大。

木犀草苷半合成方法及缺陷：木犀草苷是木犀草素-7-O-葡萄糖苷，其在植物中含量少，如2010版中国药典金银花规定含木犀草苷(C₂₁H₂₀O₁₁)不低于0.05％、菊花中含木犀草苷不得少于0.080％，而山银花绿原酸含量高于金银花，但不含木犀草苷，因微量木犀草苷原故，价格是金银花的1/2-1/3，但其应用范围远不及金银花，究其原因是山银花不含木犀草苷，致使人们更推崇金银花。木犀草素苷，则由木犀草素和2,3,4,6-四-O-乙酰-a-D-溴吡喃葡萄糖反应生成。以橙皮苷合成木犀草苷，橙皮苷制备木犀草素经3步总收率为35%，木犀草素制备木犀草苷，2步总收率为16.8%。以橙皮苷计，5步合计总收率为5.88%（[2] 刑有权，孙志忠，韩文辉，韩晓玲.木犀草素及葡萄糖苷的半合成[J].中国医药工业杂志,1994, 25（11）：484-487。很明显，现有橙皮苷半合成木犀草苷，步骤多，产率过低，并且2,3,4,6-四-O-乙酰-a-D-溴吡喃葡萄糖价格较贵，导致工业化成本较高。

糖苷类化合物脱甲基及缺陷：在葛根素的全合成中，其脱甲基使用了昂贵的三甲基碘硅烷及较为昂贵的试剂乙腈为溶剂（[4]张培成.黄酮化学[M].化学工业出版社，2009，357），进行脱甲基，导致产品成本高昂，与天然植物葛根中提取，不具备合成优势。葛根素

为碳苷，在脱甲基过程中，不会发生水解，其稳定性远远高于氧苷。然而氧苷遇酸易水解、遇热易脱水，其稳定性远差于酚甲醚，用现有的脱甲基方法对氧苷甲醚脱甲基，得到的产物是先脱糖、后脱甲基，最后脱糖和脱甲基得到苷元，由于在高温下，糖环甚至可能脱水，与黄酮母核进行反应，其产物较为复杂，难以得到先脱甲基而保留糖的苷。故氧苷优先脱酚甲基而保留糖环尚未见报道。因此，橙皮苷、地奥明、橙皮素-7-O-葡萄糖苷选择性脱去分子中甲基，完全是一种新的挑战，如果这一种方法能够实现，由橙皮苷、地奥明、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮素半合成木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香苷的步骤大为减少，成本大为降低，具有工业应用价值。

氧自由基危害及黄酮保护作用。细胞膜具有它松散的化学结构，极富有弹性和柔韧性，它的电子很容易丢失。因此，细胞膜一旦受自由基攻击，其电子被夺走，其功能就丧失，引发各种炎症，进一步恶化，产生各种各样的疾病，如心血管系统疾病、肿瘤等。一些内源性的酶，如超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化酶，和维生素C、维生素E、胡箩卜素等化合物，具有清除自由基的能力。除了上述物质，要降低自由基的危害，还需要寻找和发掘外源性的自由基清除剂，利用这些物质优先于自由基结合，阻断外界的自由基对人体的攻击，使人体免受伤害。大量研究证明黄酮具有抗氧化、抗癌、抗艾滋病、抗菌、抗过敏、抗炎等多种生理活性及药理作用,且无毒副作用,对人类的肿瘤、衰老、心血管疾病的防治具有重要意义。黄酮类化合物分子含有多个酚羟基，易于被肠道菌群或肝脏酶系统所代谢，代谢产物亦有相应的酚羟基。黄酮及代谢产物所含酚羟基的自由基清除作用，可能是其诸多作用的基础。

邻二酚抗氧化及药理作用显著：A、B两个苯环通过三碳相连构成黄酮类化合物，当A环具有5-OH、7-OH二羟基，其中7-OH常常形成糖苷键，5-OH与4C=O形成分子内氢键，则故A环抗氧化性较弱。当B环含有邻二酚羟基，其抗氧化性强，药理作用也相对好，如芦丁、木犀草素及糖苷、圣草酚糖苷。再如中药其它具有邻二酚羟基的化合物，也具有较好的药理活性，如原儿茶醛、丹参素、绿原酸等化合物。上述说明邻二酚对黄酮等化合物的作用具有重要的影响，可能系其具有较强的抗氧化性所致。黄酮类化合物抗氧化活性研究，抗氧化活性强弱常用H₂O₂清除率表述，圣草酚-7-芸香糖苷、木犀草素-7-芸香糖苷具有较强的抗H₂O₂活性，橙皮苷的抗H₂O₂活性较弱，柚皮苷、地奥司明、野漆树苷几乎无抗H₂O₂活性（[5] Zbigniew Sroka*, Izabela Fecka, and Wojciech Cisowski. Antiradical and Anti-H₂O₂ Properties of Polyphenolic Compoundsfrom an Aqueous Peppermint Extract. Z. Naturforsch,2005,60(826):832.）。

抗生素滥用危害，呼唤中药代替品：自从1928年弗莱明发现青霉素以来，抗生素挽救了无数人的生命。目前抗生素在医疗及养殖业上的使用越来越广泛，在很多地区甚至处于滥用的状况。但抗生素在消炎杀菌的同时，对机体的免疫系统也会产生广泛的影响，例如头痛、恶心、呕吐、便秘等。因此寻找安全、低毒副作用，有效的替代药物的工作是必要的。医学界许多专家正在寻找中药替代西药抗菌素。金银花是我国名贵中药，具有清热解毒、疏散风热的功效，其提取物广泛应用药品如双黄连制剂、银翘解毒片、金银花露。同时，饮料和日化行业需求也在激增,已开发出的产品有：金银花饮料（加多宝、王老吉），金银花啤酒、金银花牙膏等。山银花也具有清热解毒、疏散风热的功效，在2000年版及以前药典，与金银花为同一种药物，到2005版药典，因微量木犀草苷原故，始分为两种药物。然绿原酸含量高于金银花，亩产量也是金银花的2-3倍，价格是金银花的1/2-1/3，但其应用范围远不及金银花，究其原因是山银花不含木犀草苷，致使人们更推崇金银花。如果山银花提取物加入木犀草苷，使其绿原酸和木犀草苷与金银花有效成分一致，在抗菌等功效相差不大，则完全可利用山银花勾兑木犀草苷代替金银花。由于山银花产量较金银花产量高得多，则可以节约大量耕地。

糖类及多酚羟基对黄酮类有增溶作用：黄酮类化合物由于分子中含有两个苯环，由于苯环的平面性，分子与分子之间易于重叠排列，致使难溶于水，如橙皮苷、柚皮苷、芦丁、黄芩苷等。当A环具有多羟基化合物，而B环没有羟基，分子之间更易进行自相重排，形成结晶，其在水中溶解度很小。如黄芩苷仅在A环含邻二酚羟基，B环没有，不溶于水、难溶于甲醇、乙醇、丙酮等溶剂，而灯盏花素除了A环有邻二酚羟基、B环也有1个羟基，溶于甲醇，乙醇、热水。野漆树苷难溶于水，而木犀草素-7-O-新橙皮糖苷，可溶于水，二者区别在于前者比后者在B环上少一个3’-OH，说明增加酚羟基，提高极性，利于增加其水溶性。木犀草素极微溶于水，木犀草素-7-O-葡萄糖苷微溶于水，木犀草素-7-O-芸香糖苷，可溶于水，易溶于热水，说明增加糖基，有利于提高水溶性。

 综上所述，利用来源丰富，制备工艺简单，价格低廉橙皮苷及其衍生物，如橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮素半合成木犀草素芸香苷、木犀草苷、木犀草素，利用后三者具有优异抗菌、抗肿瘤、抗氧化作用，低毒副作用，用于医药、食品、化妆品领域，造福人类，已经迫切重要。

发明内容

本发明目的：提供由橙皮苷、橙皮素、橙皮素-7-O-葡萄糖苷半合成木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香糖苷，具有步骤少，成本低，产率高，绿色环保的工业化制备方法。

解决办法：将橙皮素、橙皮苷、橙皮素-7-O－葡萄糖苷脱氢和脱甲基两步反应合并到一步法中反应。

本发明技术特征：

吡啶类、三价铝离子化合物、低沸点的醇、橙皮素、碘混合，在室温-110℃反应脱氢，形成均一液，PC/TLC/HPLC跟踪起始产物脱氢完全。然后在80℃-180℃密闭蒸馏2-80h，PC/TLC/HPLC跟踪检查脱甲基产物（当一次密闭蒸馏脱甲基不完全时，可将蒸馏液倒入反应器中，经加热搅拌溶解，再进行密闭蒸馏，可提高脱甲基产物的收率），将蒸馏产物加醇加热溶解，加入磷酸，析出木犀草素；

吡啶类、三价铝离子化合物、低沸点的醇、橙皮素-7-O－葡萄糖苷、碘混合，在室温-110℃反应脱氢，形成均一液，PC/TLC/HPLC跟踪起始产物脱氢完全。然后在80℃-180℃密闭蒸馏2-80h，PC/TLC/HPLC跟踪检查脱甲基产物，将蒸馏产物加醇加热溶解，加入磷酸，析出木犀草苷和香叶木素－7-O－葡萄糖苷，经层析分离可得木犀草苷和香叶木素－7-O－葡萄糖苷；

吡啶类、三价铝离子化合物、低沸点的醇、橙皮苷、碘混合，在室温--110℃反应脱氢，形成均一液，PC/TLC/HPLC跟踪起始产物脱氢完全。然后在80℃-180℃密闭蒸馏2-80h，PC/TLC/HPLC跟踪检查脱甲基产物，将蒸馏产物加醇加热溶解，加入磷酸，析出沉淀（地奥明），滤过，得木犀草素－7－芸香苷的酸水液：通过大孔吸附树脂吸附，水洗脱除杂，乙醇洗脱，回收乙醇，可得木犀草素-7-芸香糖苷；木犀草素－7－芸香苷的酸水液通过酸水解，可得木犀草素及木犀草苷混合物，经硅胶柱层析分离可得木犀草苷及木犀草素单体；木犀草素－7－芸香苷的酸水液在醇中完全水解，可得木犀草素。

本发明原理：

橙皮素或其糖苷衍生物脱氢、脱甲制备木犀草素或其糖苷类，其机理相同，分子中的4－C＝O,5－OH与Al³⁺络合，易溶于吡啶类和醇液中，通过加热脱氢，脱氢产物亦与Al³⁺络合，仍以溶液形式存在，通过密闭蒸馏醇液和多余的吡啶类，以甲醇和吡啶为例说明：一方面利用反应过程产生的HI和HI与吡啶类盐，其中I离子可极化性强，易于进攻OCH₃中的C+离子；另一方面，Al³⁺与邻二氧络合，有利于OCH₃脱去甲基，两个方面的协同作用，脱甲基较为容易，选择性较高。脱氢脱甲基两个反应可在同一容器中，不经分离，直接完成。

 在本发明所说的吡啶类，主要指吡啶、2－甲基吡啶、3－甲基吡啶、4－甲基吡啶、4－甲基吡啶、5－甲基吡啶、6－甲基吡啶、2,6－二甲基吡啶、3,5－二甲基吡啶、2,4,6－三甲基吡啶。

在本发明所说的三价铝离子化合物，主要指三氯化铝、三溴化铝、三碘化铝，甲醇铝、乙醇铝、丙醇铝等，优先选择无水三氯化铝，其中卤化铝：橙皮苷（或橙皮素或橙皮素-7-O-葡萄糖苷）的摩尔比在3：1－1：3，优先为1：1。

在本发明所说的低沸点醇，指甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇，其中优选甲醇，其甲醇用量以体积计，不超过吡啶类用量体积。

在本发明所说的橙皮苷（CAS：520-26-3）、橙皮素（CAS：520-33-2）、橙皮素-7-O-葡萄糖苷（CAS:31712-49-9，结构如（A））作为脱氢脱甲起始反应物，其中橙皮苷（或橙皮素或橙皮素-7-O-葡萄糖苷）：吡啶类的摩尔比在1：5-1：10，优选为1：6-1：7。

在本发明所说的碘、其用量与橙皮素（或橙皮苷、或橙皮素-7-O-葡萄糖苷）摩尔比优选1：1。

在本发明所说的密闭蒸馏，指蒸馏温度在80℃-180℃，优选90℃-150℃，密闭指在蒸馏过程中，外界空气不能进入反应器中，但反应器中空气可排出，醇及吡啶类蒸汽可被冷凝排出。

本发明所说的木犀草素（CAS：491-70-3）、木犀草苷（CAS：5373-11-5）、木犀草素-7-O-芸香糖苷（CAS：20633-84-5，结构如（B））。

本发明中将脱氢脱甲合并到一步，其中由于是溶液型，故脱氢生成香叶木素及衍生物的产率为100％，不经分离，直接脱甲，由香叶木素-7-O-芸香糖苷（地奥明）脱甲基制备木犀草素-7-O-芸香糖苷，产率在60％-75％，木犀草素-7-O-芸香糖苷水溶性较高，在富集纯化过程中有一定损耗，收率会有所下降；香叶木素-7-O-葡萄糖苷脱甲基产率在50％-65％之间，其水溶性较小，可沉淀析出，收率高；香叶木素经二次蒸馏脱甲基制备木犀草素，产率在95％以上，木犀草素不溶于水，很容易纯化处理。

由于橙皮素及其糖苷衍生物与铝络合，其脱氢脱甲基产物均易溶于吡啶的醇液中，故吡啶用量特别少，该方法与现有专利及文献报道的橙皮苷半合成木犀草素，具有重大改进。橙皮苷或橙皮素-7-O-葡萄糖苷脱氢脱甲基制备木犀草素糖苷，为突破性的发明。木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香苷半合成的路线，具有反应条件温和、易于操作；试剂用量少，成本低廉；步骤少，脱氢脱甲基产率较高，易于工业化生产。其中，木犀草素-7-O-芸香糖苷的生产优先推荐橙皮苷一步法中脱氢脱甲基；木犀草苷的生产优先推荐橙皮素-7-O-葡萄糖苷一步法中脱氢脱甲基；木犀草素优推荐一步法中脱氢之后，多次密闭蒸馏脱甲基。

本发明曾用地奥明直接脱甲基，但地奥明在醇和吡啶中，与AlCl₃络合溶解速度很慢，形成均匀溶液难度较高，脱甲基效果不好；同样，橙皮苷与在醇和吡啶中，与AlCl₃络合其脱甲基产率很低，经密闭长时间蒸馏，主要为脱糖产物。木犀草素-7-O-芸香糖苷极性较大，其在吡啶的酸水液中，难以被大孔吸附树脂D101型、AB-8、聚酰胺等吸附。经过多次筛选，T-02、T-01、HPD-D、DM130、HPD400、HPD500对木犀草素芸香糖苷有一定的吸附能力。橙皮苷制备橙皮素，若采用专利号为201310692053.X的方法，橙皮素制备成本极其低廉。橙皮苷制备橙皮素-7-O-葡萄糖苷，若采用专利号为201310692053.X或201410051283. 2的方法，橙皮素-7-O-葡萄糖苷制备成本低廉。

在进行密闭蒸馏时，蒸馏温度过高，则会导致糖苷脱水。同时，吡啶类或醇类速度过快，溶液变固体速度加快，脱甲基能力会随时间延长，脱甲基能力逐渐下降，效果亦不好。当在低温下蒸馏醇类或吡啶类，然后再高温，则会出现膨胀现象（底部固体逐渐膨胀，体积膨胀原体积数倍乃至数十倍，有可能溢出瓶外）。密闭蒸馏时间过长，分子中若有糖，导致脱糖产物增加。

以下结合实施例，进一步说明本发明

本发明公开了橙皮素、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮苷一步法脱氢脱甲基的方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，对吡啶类、醇的种类进行筛选，对密闭蒸馏脱甲基温度、醇的用量进行优化。特别需要指出橙皮素及其糖苷类脱氢脱甲基制备木犀草素及其糖苷类的方法中，是通过与铝离子络合一步法完成，都将被视为本发明，相关人员明显不能在脱离本发明的内容、精神和范围对本文所述的方法、原理进行适当改动或变更与组合，来实现和应用本发明技术；由于涉及的醇类、吡啶类、三价铝离子化合物较多，用于制备木犀草素及其糖苷，不能一一列举。但为了进一步理解本发明，以橙皮苷脱氢脱甲基制备木犀草素-7-O-芸香糖苷、再经水解制备木犀草苷和木犀草素、橙皮素-7-O-葡萄糖苷脱氢脱甲基制备木犀草苷、橙皮素脱氢脱甲基制备木犀草素，醇类以甲醇为例，吡啶类以吡啶、三价铝离子化合物以无水AlCl₃为例进行说明，其中试剂AR表示分析纯。

实施例1  橙皮苷制备木犀草素-7-O-芸香糖苷

迅速称取无水三氯化铝（AR）3.5g于250ml碘量瓶中，迅速加入吡啶（AR）15ml，摇匀，加入甲醇（AR）8ml，2min后，加入92％橙皮苷16.5g ，搅拌2min，加入碘（AR）6.8g，加入甲醇（AR）7ml，搅拌2min，碘量瓶上端接冷凝管或空气冷凝管，于80℃密闭反应（防止吸收空气中水分），每隔1h搅拌1次，2h后形成均匀溶液，继续密闭反应6h（完成脱氢）。在空气浴中，114℃密闭蒸馏15h（脱甲基反应，瓶内由溶液型变为固体，热时较软，冷却时很坚硬），放置80℃，加入10ml乙醇及10ml丙三醇，并80℃保温2h，固体转变为溶液，加入保险粉1.0g，搅拌5min后，倒入200ml 5％磷酸水液中，快速搅拌，并在50℃水浴中密闭放置1h，滤过（不溶物为地奥明，烘干后约为4.8g）得酸水液，通过350g大孔吸附树脂，水洗涤除去吡啶、HI、磷酸、丙三醇、乙醇、AlCl₃，以乙醇洗脱，回收乙醇得木犀草素-7-O-芸香糖苷10.8g，经HPLC测定纯度为90.8％（以98％木犀草苷作为内标物）。¹³CNMR (DMSO-d6, 100 MHz): d 182.08 (s, C-4), 164.74 (s, C-2), 163.01 (s,C-7), 161.37 (s, C-5), 157.08 (s, C-9), 150.12 (s, C-4′), 145.92 (s, C-3′),121.47 (s, C-1′), 119.40 (d, C-6′), 116.32 (d, C-5′), 113.73 (d, C-2′),105.53 (s, C-10), 103.28 (d, C-3), 100.65 (d, Gly-1), 99.99(d,C-6), 94.95 (d, C-8), 76.42 (t, Gly -5), 75.67, (s, Gly -3), 73.25(d, Gly -2), 69.70(d, Gly -4), 66.15 (t, Gly -6). 99.66（Rha-1），70.28（Rha-2），70.88（Rha-3），72.20（Rha-4），68.50（Rha-5）17.99.50（Rha-6）；TOF MS ES+ m/z617.1464 [M+Na]⁺ , m/z449.1066 [M-146+H]⁺ , m/z287.0550 [M-146-162+H]⁺。TOF MS ES- m/z 593.1527 [M-H]^- , m/z285.0414 [M-146-162-H]^-，(calc. for. C₂₇H₃₀O₁₅)（结构鉴定用样品系90.8％的木犀草素-7-O-芸香糖苷经硅胶柱分离）。

实施例2  橙皮苷制备木犀草素-7-O-芸香糖苷经酸水解，得木犀草苷和木犀草素

 迅速称取无水三氯化铝（AR）3.5g于250ml碘量瓶中，迅速加入吡啶（AR）15ml，摇匀，加入甲醇（AR）8ml，2min后，加入92％橙皮苷16.5g ，搅拌5min，加入碘（AR）6.8g，加入甲醇（AR）7ml，搅拌3min，碘量瓶上端接冷凝管或空气冷凝管，于80℃密闭反应（防止吸收空气中水分），每隔1h搅拌1次，2h后形成均匀溶液，继续密闭反应6h（完成脱氢）。在空气浴中，112℃密闭蒸馏17h（脱甲基反应，瓶内由溶液型变为固体，热时较软，冷却时很坚硬），放置80℃，加入20ml乙醇，并80℃保温3h，固体转变为溶液，加入保险粉1.0g，搅拌5min后，倒入100ml 5％磷酸水液中，快速搅拌，并在50℃水浴中密闭放置1h，滤过（不溶物为地奥明，烘干后约为4.7g）得酸水液，加入盐酸20ml，于80℃密闭水解3h，析出沉淀，滤过，得木犀草素和木犀草苷混合物，经硅胶柱层析分离，得木犀草苷3.0g，木犀草素3.2g。

实施例3  橙皮苷制备木犀草素-7-O-芸香糖苷经酸醇液水解，得木犀草素

迅速称取无水三氯化铝（AR）3.5g于250ml碘量瓶中，迅速加入吡啶（AR）15ml，摇匀，加入甲醇（AR）8ml，2min后，加入92％橙皮苷16.5g ，搅拌5min，加入碘（AR）6.8g，加入甲醇（AR）7ml，搅拌3min，碘量瓶上端接冷凝管或空气冷凝管，于80℃密闭反应（防止吸收空气中水分），每隔1h搅拌1次，2h后形成均匀溶液，继续密闭反应6h（完成脱氢）。在空气浴中，116℃密闭蒸馏15h（脱甲基反应，瓶内由溶液型变为固体，热时较软，冷却时很坚硬），放置80℃，加入20ml乙醇，并80℃保温3h，固体转变为溶液，加入保险粉1.0g，搅拌5min后，倒入100ml 5％磷酸水液中，快速搅拌，并在50℃水浴中密闭放置1h，滤过（不溶物为地奥明，烘干后约为5.0g）得酸水液，加入乙醇100ml，加入盐酸30ml，于80℃密闭水解5h，析出沉淀，滤过，得木犀草素5.6g。UV λmax nm in MeOH: 346, 258; +NaOMe 407, 267; +AlCl₃ 422, 320sh, 265;  +AlCl₃/HCl  390,  375, 273。

实施例4  橙皮素-7-O-葡萄糖苷制备木犀草苷

迅速称取无水三氯化铝（AR）3.5g于250ml碘量瓶中，迅速加入吡啶（AR）15ml，摇匀，加入甲醇（AR）8ml，2min后，加入92％橙皮苷12g ，搅拌5min，加入碘（AR）6.8g，加入甲醇（AR）7ml，搅拌3min，碘量瓶上端接冷凝管或空气冷凝管，于80℃密闭反应（防止吸收空气中水分），每隔1h搅拌1次，2h后形成均匀溶液，继续密闭反应6h（完成脱氢）。在空气浴中，113℃密闭蒸馏15h（脱甲基反应，瓶内由溶液型变为固体，热时较软，冷却时很坚硬），放置80℃，加入20ml乙醇，并80℃保温3h，固体转变为溶液，加入保险粉1.0g，搅拌5min后，倒入100ml 5％磷酸水液中，快速搅拌，并在50℃水浴中密闭放置1h，滤过，得木犀草苷和香叶木素-7-O-葡萄糖苷混合物，经硅胶柱层析分离，得木犀草苷5.7g，经HPLC测定纯度为94％。¹HNMR(DMSO-d6, 400MHz):δ13.01（1H,s,5-OH）, 10.05（1H,s,4′-OH）,9.45（1H,s,3′-OH）, 7.45（1H,dd,J=8.4/2.2，H-6'),7.44(1H，d，J=2.2，H-2'),6.80(1H，d,J=8.4,H-5')，6.77（1H,dd,J=1.8，H-8), 6.77（1H,s，H-3),6.46（1H,dd,J=1.8,H-6), 5.11（1H，d，J=7.3，H-1''), 4.06（1H,d,J=9.5,H-6''), 3.88 (1H, dd, J= 3.5/1.6 Hz, H-2'''), 3.69,(1H, dd, J= 9.5/3.3 Hz, H-3'''), 3.18–3.68 (7H, m, H-2'',3'',4'',5'',6''a, 4''',5'''), 1.10 (3H, d, J= 6.2 Hz, H-6''')；¹³CNMR (DMSO-d6, 100 MHz): d 181.97 (s, C-4), 164.50 (s, C-2), 162.97 (s,C-7), 161.18 (s, C-5), 156.99(s, C-9), 149.97 (s, C-4′), 145.83 (s, C-3′),121.42 (s, C-1′), 119.23 (d, C-6′), 116.01 (d, C-5′), 113.60 (d, C-2′),105.37 (s, C-10), 103.31 (d, C-3), 99.85 (d, Gly-1), 99.57(d,C-6), 94.74 (d, C-8), 77.18 (t, Gly -5), 76.42, (s, Gly -3), 73.14(d, Gly -2), 69.53(d, Gly -4), 60.63 (t, Gly -6)；TOF MS ES+ m/z471.0909 [M+Na]⁺ , m/z449.1145 [M+H]⁺ , m/z287.0571 [M-162+H]⁺。TOF MS ES- m/z 447.0922 [M-H]^- , m/z285.0401 [M-162-H]^-，(calc. for. C₂₁H₂₀O₁₁)。

 实施例5  橙皮素制备木犀草素

迅速称取无水三氯化铝（AR）3.5g于250ml碘量瓶中，迅速加入吡啶（AR）15ml，摇匀，加入甲醇（AR）8ml，2min后，加入98％橙皮素8.5g ，搅拌5min，加入碘（AR）6.8g，加入甲醇（AR）7ml，搅拌3min，碘量瓶上端接冷凝管或空气冷凝管，于80℃密闭反应（防止吸收空气中水分），每隔1h搅拌1次，2h后形成均匀溶液，继续密闭反应6h（完成脱氢）。在空气浴中，113℃密闭蒸馏15h（脱甲基反应，瓶内由溶液型变为固体，热时较软，冷却时很坚硬），放置80℃。将蒸馏液重新倒入碘量瓶中，并80℃保温3h，固体转变为溶液，再与空气浴中，116℃密闭蒸馏15h（二次脱甲基），放置80℃，加入乙醇100ml，加热溶解，快速加入磷酸20ml，迅速搅拌，并密闭70℃保温30min滤过，用水洗涤滤饼，干燥，得木犀草素7.5g，经HPLC测定，纯度98.1％。¹H-NMR (DMSO d6, 400MHz): δ 7.41(1H, bd, J=8.4 Hz, H 6'), 7.39 (1H, bs, H2'), 6.89(1H, d, J = 8.4 Hz, H 5'), 6.61(1H, s, H₃),6.44(1H, d, J = 2 Hz, H 8), 6.19(1H, d, J = 2Hz, H 6); ¹³C- NMR (DMSO d6,100 MHz):  δ182.1(C-4), 164.5 (C-7), 164.4(C-2), 161.9 (C-5), 157.7 (C-9), 150.1 (C-4′), 146.2 (C-3′),  122.0 (C-1′), 119.4(C-6′), 116.5 (C-5′), 113.8 (C-2′), 104.2 (C-10), 103.3 (C-3),  99.3 (C-6) 94.3 (C-8);  EIMS  (40eV.):  m/z %  286 (100),  152 (10)  137 (15);  UV λmax nm in MeOH: 346, 258; +NaOMe 407, 267; +AlCl₃ 422, 320sh, 265;  +AlCl₃/HCl  390,  375, 273。