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一种简单异尖线虫Ani s4抗原基因的克隆和表达方法

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本发明属于生物技术领域，特别涉及一种简单异尖线虫Ani s4抗原基因的克隆和表达方法。本发明以简单异尖线虫第三期幼虫总RNA为模板，用RT-PCR的方法扩增得到500bp大小的特异片段，将扩增产物克隆至pMD18-T转化感受态菌DH5-α,经酶切鉴定获得阳性重组质粒，然后将重组质粒和表达载体pET-32a分别以BamHI和HindШ双酶切后构建重组表达载体pET-32a-Ani-s4，并将其转化入大肠杆菌BL21中，提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后，用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot检测显示，融合蛋白的分子量约为25kDa，Ani s4基因在大肠杆菌中成功表达。同时所构建的表达蛋白具有的His-tag为其后的纯化工作提供了极大的便利。该ES抗原蛋白的成功表达，为后续的简单异尖线虫免疫学检测方法的研究奠定了基础。

著录项

公开/公告号CN103993004A

专利类型发明专利
公开/公告日2014-08-20

原文格式PDF
申请/专利权人舟山出入境检验检疫局综合技术服务中心;
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申请/专利号CN201410027151.6
发明设计人李孝军;王素华;张明哲;杜爱芳;陈璐敏;周圆;洪青林;唐行忠;
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申请日2014-01-21
分类号C12N15/10(20060101);C12N15/70(20060101);C07K14/44(20060101);
代理机构33109 杭州杭诚专利事务所有限公司;
代理人尉伟敏
地址 316000 浙江省舟山市定海昌国路222号
入库时间 2023-12-17 00:15:55

法律信息

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态
2017-08-04

发明专利申请公布后的驳回 IPC(主分类):C12N15/10 申请公布日:20140820 申请日:20140121

发明专利申请公布后的驳回
2014-09-17

实质审查的生效 IPC(主分类):C12N15/10 申请日:20140121

实质审查的生效
2014-08-20

公开

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