喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的检测方法

技术领域

本发明涉属于药品质量控制技术领域，具体地说涉及一种喘可治注射 液中淫羊藿苷及朝藿定C含量检测方法。

背景技术

喘可治注射液，主要成分为淫羊藿和巴戟天，具有温阳补肾，平喘止 咳，有抗过敏、增强体液免疫与细胞免疫的功能，主治哮证属肾虚挟痰证， 症见喘促日久，反复发作，面色苍白，腰酸肢软，畏寒，汗多；发时喘促 气短，动则加重，喉有痰鸣，咳嗽，痰白清稀不畅；以及支气管炎、哮喘 急性发作期间见上述症侯者，为淡黄色澄明液体。

喘可治注射液早在1999年6月就批准生产，由于当时研究、仪器设 备水平较落后，以及其主要成分-淫羊藿药材的成份较为复杂，仅当时公开 报道的成份就有数十种，因此导致对于喘可治注射液淫羊藿峰群的研究并 不彻底，使得在当时的报道中通常将淫羊藿苷作为淫羊藿药材提取物中的 主要有效成分。《中国药典》中Vol I2005.267部分记载了以淫羊藿苷作 为淫羊藿的特征性成分并规定了其含量测定的方法，因此现有技术中一直 以淫羊藿苷峰群(该淫羊藿苷峰群中包括淫羊藿苷、朝藿定C)代表淫羊藿 苷作为检测喘可治注射液的含量测定及质量鉴定的标准。

但是，随着色谱技术的发展以及国内研究人员对淫羊藿药材的深入研 究发现，在用于制备喘可治注射液的淫羊藿中药材--箭叶淫羊藿中，淫羊 藿苷并不是其含量最高的成份，朝藿定C的含量要远高于其他成份。由此 测得喘可治注射液中的朝藿定C的含量要远高于淫羊藿苷，并且诸多相关 文献资料及多批样品的测定结果均证明了这一结论。这即导致现执行标准 中仅以淫羊藿苷来计算含量限度的标准显得并不合理，喘可治注射液应以 朝藿定C和淫羊藿苷之和来计算。更重要的是，按现执行标准【含量测定】 项下对“淫羊藿苷”的检测方法进行测定，并不能将朝藿定C和淫羊藿苷 的主峰进行区分，导致测定含量实际是两者的重叠峰之和，无法准确评价 喘可治注射液的有效成分含量情况，使得对其质量的控制存在标准不一的 问题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有标准中对喘可治注射液的 检测方法无法准确评定其质量的问题，进而提供一种可准确测定喘可治注 射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量的检测方法，进而全面、准确的控制喘可 治注射液的质量。

为解决上述技术问题，本发明的提供了一种喘可治注射液中淫羊藿苷 及朝藿定C的含量检测方法，包括如下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量， 加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备 液；精密吸取所述对照品储备液各1ml，并分别加入由体积比为50-60：50-40 的甲醇-1-2％乙酸混合液稀释，并定容至10ml，即得；

供试品溶液的制备：精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分别加入由体 积比为50-60：50-40的甲醇-1-2％乙酸混合液稀释定容至10mL，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1-2％的乙酸为流动相B 按照如下程序进行梯度洗脱：0-1min，流动相A：流动相B为27％：73％ →30％：70％；1-4min，流动相A：流动相B为30％：70％→20％：80％；4-6min， 流动相A：流动相B为20％：80％→27％：73％；6-20min，流动相A：流动 相B为27％：73％→27％：73％；20-30min，流动相A：流动相B为27％： 73％→80％：20％；控制流动相流速为0.8-1.2ml/min；控制柱温25-35℃；检 测波长为268-270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定并计算。

所述的含量检测方法，包括如下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量， 加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备 液；精密吸取所述对照品储备液各1ml，并分别加入由体积比为55：45的 甲醇-1.5％乙酸混合液稀释，并定容至10ml，即得；

供试品溶液的制备：精密吸取所述喘可治注射液1ml，并分别加入由体 积比为55:45的甲醇-1.5％乙酸混合液稀释定容至10mL，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5％的乙酸为流动相B 进行梯度洗脱，控制流动相流速为1ml/min；控制柱温30℃；检测波长为 270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定并计算。

所述的含量检测方法，在所述对照品溶液、供试品溶液制备步骤中， 还包括将定容后的溶液采用0.45μm微孔滤膜滤过的步骤。

所述的含量检测方法，在所述对照品溶液制备步骤中，还包括将所述 朝藿定C、淫羊藿苷对照品经五氧化二磷减压干燥12-16h的步骤。

所述的含量检测方法，所述喘可治注射液的原料药组成为：巴戟天5-50 重量份，淫羊藿30-120重量份。

所述的含量检测方法，所述喘可治注射液的制备方法为：按照选定重 量份数取巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱药材中拣选上好 的药材，而后用水多次清洗，除去沙土、泥垢，将淫羊藿切成1cm左右小 段、60℃以下干燥；巴戟天60℃以下干燥后，粉碎成20目粗粉；然后用此 净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍量水分别提取1.5、 1、1小时，提取液浓缩成50℃下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达 60％，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和 一种30％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤 烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80℃以下真空干燥，得巴戟天提取物；淫 羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓 缩成50℃下相对密度至1.2时，加入乙醇使含醇量达70％，回收乙醇，浓 缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种35％大极性溶剂 洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析 出结晶，在80℃以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用水配制成溶液， 滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115℃30分钟灭菌、用色水 捡漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备好：用纯水粗洗、 注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。

本发明提供了一种所述的含量检测方法在喘可治注射液质量检测及控 制领域的应用。

本发明提供了一种所述的含量检测方法在淫羊藿药材质量检测及控制 领域的应用。

本发明所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法，以 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1-2％乙 酸为流动相B，流速为0.8-1.2ml/min进行梯度洗脱检测喘可治注射液中淫 羊藿苷及朝藿定C含量，本方法使用同一流动相系统，即可一次性完成喘 可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C的含量测定，能够快速、简便的获知该 产品的质量情况，解决了现有技术中喘可治注射液所使用的现执行标准【含 量测定】项下“淫羊藿苷”的检测方法以及含量限度不合理导致喘可治注 射液的淫羊藿苷的含量测定不合格的问题，并且本发明实验例中对该含量 测定方法进行了完善的方法学验证，试验结果证明，本发明的方法可用来 测定喘可治注射液的含量，其测定得到喘可治注射液朝藿定C的含量远远 大于淫羊藿苷的含量，该测定结果与现有技术中相关文献资料报道的结果 基本一致，本发明的方法可以替代喘可治注射液的执行标准【含量测定】 项下“淫羊藿苷”的检测方法。

实验例

本发明通过下述实验例证明本发明所述方案的技术效果。

1.试验材料与方法

1.1试验仪器及试剂：

仪器：HP1050Series高效液相色谱仪，Agilent LC/MS Systems工作站， HP79855AAutosampler自动进样器；

试剂：乙腈、甲醇、乙酸、磷酸，均为色谱纯；

喘可治注射液样品：广州万正药业有限公司生产，批号为20090904、 20091101、20091102、20100102、20100103、20100104、20100302、20100303、 20100304；

淫羊藿苷对照品、朝藿定C对照品：购于中国食品药品检定研究院；

淫羊藿提取物：按照实施例1方法制得，批号为20090501、20090801、 20091101。

1.2试验方法：

对照品溶液的制备：分别精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的朝藿 定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg 的溶液，作为对照品储备液，精密吸取所述对照品储备液各1ml，分别置于 10ml量瓶中，随后各加入体积比为55:45的甲醇-体积浓度1.5％乙酸的混合 液稀释定容至刻度，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

阴性对照品溶液：不含淫羊藿提取物，其它与喘可治注射液相同，由 广州万正药业有限公司提供；

供试品溶液的制备：精密吸取喘可治注射液1ml，置10ml量瓶中，加 入体积比为55:45的甲醇-体积浓度1.5％乙酸的混合液稀释定容至刻度，摇 匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得；

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5％乙酸为流动相 B，流速为1.0ml/min进行梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长为270nm；理 论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000；

所述梯度洗脱程序具体为：0-1min，流动相A：流动相B为27％：73％ →30％：70％；1-4min，流动相A：流动相B为30％：70％→20％：80％；4-6min， 流动相A：流动相B为20％：80％→27％：73％；6-20min，流动相A：流动 相B为27％：73％→27％：73％；20-30min，流动相A：流动相B为27％： 73％→80％：20％；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定，计算，即得；

所述喘可治注射液为每1ml含朝藿定C C₃₉H₅₀O₁₉和淫羊藿苷 C₃₃H₄₀O₁₅，按淫羊藿苷C₃₃H₄₀O₁₅计，总和不得少于0.48mg，1mg C₃₉H₅₀O₁₉相当于0.8224mg C₃₃H₄₀O₁₅。

2方法学验证：

2.1阴性干扰试验：

精密吸取阴性对照品溶液，按1.2项的试验方法中制备的朝藿定C对 照品储备液、按1.2的试验方法中制备淫羊藿苷对照品储备液各1ml，置10ml 量瓶中，加甲醇：体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合液稀释至刻度，摇匀， 分别精密量取20μl，按1.2的试验方法中的色谱条件与系统适用性试验测 定，考察阴性对照液是否对主成分峰存在检测干扰。试验结果见下表1，色 谱图见附图1。

表1阴性干扰试验结果

结论：朝藿定C出峰时间约在14～15分钟，淫羊藿苷出峰时间约在 17～18分钟，阴性对照品溶液除溶剂峰外没有出现任何峰，表明阴性对照 品溶液对主成分峰的检测没有干扰。

2.2线性关系考察：

分别精密称取朝霍定C对照品和淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每 1ml含0.4mg和0.2mg的对照品储备液，各精密吸取朝藿定C对照品储备 液和淫羊藿苷对照品储备液，并加入体积比为55:45的甲醇-体积浓度1.5％ 乙酸的混合液稀释配制成如下列表2中的一系列实际浓度的对照溶液，每 一个浓度的对照液各精密量取20μl，注入液相色谱仪，按1.2项的试验方 法中的色谱条件与系统适用性试验，记录色谱图，以浓度(μg/ml)对峰面 积进行线性回归。试验结果见下表2，色谱图见附图2、图3，朝藿定C浓 度-峰面积线性曲线图见图4，淫羊藿苷浓度-峰面积线性曲线图见图5。

表2线性关系考察结果

结论：在朝藿定C检测浓度为5.0μg/ml～320.0μg/ml范围内，淫羊 藿苷检测浓度为0.495μg/ml～31.68μg/ml范围内，浓度(μg/ml)与峰 面积呈良好线性关系。

2.3重复性试验：

精密吸取按照1.2的试验方法中制备的朝藿定C对照品溶液和淫羊藿苷 对照品溶液各20μl，注入液相色谱仪，按照1.2的试验方法中的色谱条件 与系统适用性试验，连续进样6次，以测得的峰面积计算精密度。试验结 果见下表3。

表3重复性试验结果

结论：试验结果表明，重复测定6次，相对标准偏差小，方法重复性 良好。

2.4最低检测限和定量限试验：

对照品贮备液制备：分别精密称取朝霍定C对照品和淫羊藿苷对照品， 加甲醇制成每1ml含0.8mg和0.02mg的对照品贮备液。

检测限：取对照品贮备液，逐步稀释，直至S/N＝3，记录色谱图和溶液 浓度。

定量限：取对照品贮备液，逐步稀释，直至S/N＝10，记录色谱图和溶 液浓度。

试验结果见下表4。

表4最低检测限和定量限试验结果

结论：朝霍定C的最低检测限为0.046μg/ml，最低定量限为0.206μ g/ml；淫羊藿苷最低检测限为0.049μg/ml，最低定量限为0.172μg/ml。

2.5测定溶液稳定性试验：

精密吸取20100304批样品1ml，置于10ml量瓶中，加体积比为甲醇： 体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合液稀释至刻度，摇匀，滤过，在室温下放 置10小时，分别在0、2、4、6、8、10小时精密量取20μl，按1.2的试 验方法中的色谱条件与系统适用性试验，测定峰面积，计算RSD值。试验 结果见下表5。

表5测定溶液稳定性试验结果

结论：喘可治注射液含量测定的溶液在10小时内峰面积无显著变化， 溶液稳定性良好。

2.6重现性试验：

精密吸取20100304批样品1ml，置于10ml量瓶中，加体积比为甲醇： 体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合液稀释至刻度，摇匀，滤过，共配制6份 样品，分别精密量取20μl，按1.2的试验方法中的色谱条件与系统适用性 试验，测定峰面积，计算RSD值。试验结果见下表6。

表6重现性试验结果

结论：试验结果表明，本方法相对标准偏差小，重现性良好。

2.6加样回收率试验：

精密吸取20100304批样品1ml，共9份，分别置10ml量瓶中，分别按 80％、100％、120％三个不同浓度的量加入朝藿定C对照品溶液和淫羊藿苷对 照品溶液，每个浓度3份样品，加体积比为甲醇：体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合液稀释定容至刻度，滤过，分别精密量取20μl，按1.2的试验方法 中的色谱条件与系统适用性试验，每份样品测定1次，计算加样回收率。 试验结果见下表7。

表7加样回收率试验结果

结论：试验结果表明，该方法相对标准偏差小，平均回收率符合规定， 说明用于含量测定准确度高。

2.7样品含量测定

分别吸取9批喘可治注射液样品及3批淫羊藿苷提取物(按照实施例1 方法制备)，按1.2的试验方法测定，记录色谱图，结果下表8，其中样品 编号为20100302的注射液的色谱图见图6，编号为20090801的淫羊藿提取 物色谱图见图7。

表8样品含量测定结果

结论：9批喘可治注射液样品及3批淫羊藿提取物样品中朝藿定C和淫 羊藿苷的总含量均大于0.48mg，如以淫羊藿苷计总含量也均大于0.48mg， 结果与按现执行标准测定结果基本一致，但朝藿定C的含量远远大于淫羊 藿苷的含量，该测定结果与相关文献资料报道的结果基本一致，因此喘可 治注射液以及中药材淫羊藿的含量测定应以朝藿定C和淫羊藿苷之和来计 算。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实 施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中，

图1是本发明阴性干扰试验的色谱图；

图2是本发明对照品的检测色谱图；

图3是本发明对照品的检测色谱图；

图4是本发明实验例中朝藿定C浓度-峰面积线性曲线图；

图5是本发明实验例中淫羊藿苷浓度-峰面积线性曲线图；

图6是本发明喘可治注射液的检测色谱图；

图7是本发明淫羊藿提取物的检测色谱图。

具体实施方式

实施例1淫羊藿提取物的制备

本实施例所述的淫羊藿提取物的制备方法，包括如下步骤：

将淫羊藿切成1cm左右小段，置于提取罐中依次加入15倍、10倍、 10倍的水分别煎煮1.5、1、1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩成相对 密度至1.2时(50℃)加入乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，回收乙 醇，浓缩至相对密度1.1时，上聚酰胺柱，先用水洗涤，弃去水液，再用 35％的乙醇洗脱，洗脱液回收乙醇，过滤，滤液在80℃以下减压干燥得淫 羊藿提取物。

取淫羊藿提取物5.0g，以聚酰胺6.0g拌样，上中压反相柱(Chromatorex  ODS DM1020T，20-45um，40×400mm)，以40-90％甲醇梯度洗脱，收 集70-80％洗脱部分，减压浓缩得流分A(0.92g)。流分A以1.20g硅胶拌 样，干法正相硅胶柱(100-200目，青岛海洋化工厂生产，30g)，氯仿-甲 醇系统(65：35-50：50)梯度洗脱，每流分收集4m l，共收集40流分，合 并10-35流分经减压浓缩得流分B(244mg)。流分B以甲醇溶解，上葡聚 糖凝胶Sephadex LH-20柱(2.5×180cm)，甲醇洗脱，待黄色色带离柱子下 端20cm时开始收集，每流分收集3m l，共收集30流分，10-14流分经合 并浓缩后得朝藿定C(174mg)，20-26流分经合并浓缩后得淫羊藿苷 (19mg)。

实施例2

本实施例所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法， 包括如下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取经五氧化二磷减压干燥16h朝藿定 C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg 的溶液，作为对照品储备液，精密吸取所述对照品储备液各1ml，分别置于 10ml量瓶中，随后各加入体积比为甲醇：体积浓度2％乙酸＝60：40的混合 液稀释定容至10ml，摇匀，过滤，即得。

供试品溶液的制备：精密吸取喘可治注射液1ml，置10ml量瓶中，加 入体积比为甲醇：体积浓度2％乙酸＝60：40的混合液稀释定容至10ml，摇 匀，过滤，即得。

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度2％乙酸为流动相B， 控制流动相流速为1.2ml/min进行梯度洗脱；控制柱温：25℃；检测波长为 268nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000。

所述梯度洗脱程序具体为：0-1min，流动相A：流动相B为27％：73％ →30％：70％；1-4min，流动相A：流动相B为30％：70％→20％：80％；4-6min， 流动相A：流动相B为20％：80％→27％：73％；6-20min，流动相A：流动 相B为27％：73％→27％：73％；20-30min，流动相A：流动相B为27％： 73％→80％：20％。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定并计算，即得。

所述喘可治注射液为每1ml含朝藿定C C₃₉H₅₀O₁₉和淫羊藿苷 C₃₃H₄₀O₁₅，按淫羊藿苷C₃₃H₄₀O₁₅计，总和不得少于0.48mg，1mg C₃₉H₅₀O₁₉相当于0.8224mg C₃₃H₄₀O₁₅。

实施例3

本实施例所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法， 包括如下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取朝藿定C、淫羊藿苷对照品适量， 加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg的溶液，作为对照品储备 液，精密吸取所述对照品储备液各1ml，分别置于10ml量瓶中，随后各加 入体积比为甲醇：体积浓度1％乙酸＝50：50的混合液稀释定容至10ml，摇 匀，过滤，即得。

供试品溶液的制备：精密吸取喘可治注射液1ml，置10ml量瓶中，加 入体积比为甲醇：体积浓度1％乙酸＝50：50的混合液稀释定容至10ml，摇 匀，过滤，即得。

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1％乙酸为流动相B， 控制流动相流速为0.8ml/min进行梯度洗脱；控制柱温：35℃；检测波长为 269nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000。

所述梯度洗脱程序具体为：0-1min，流动相A：流动相B为27％：73％ →30％：70％；1-4min，流动相A：流动相B为30％：70％→20％：80％；4-6min， 流动相A：流动相B为20％：80％→27％：73％；6-20min，流动相A：流动 相B为27％：73％→27％：73％；20-30min，流动相A：流动相B为27％： 73％→80％：20％。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定并计算，即得。

所述喘可治注射液为每1ml含朝藿定C C₃₉H₅₀O₁₉和淫羊藿苷 C₃₃H₄₀O₁₅，按淫羊藿苷C₃₃H₄₀O₁₅计，总和不得少于0.48mg，1mg C₃₉H₅₀O₁₉相当于0.8224mg C₃₃H₄₀O₁₅。

实施例4

本实施例所述的喘可治注射液中淫羊藿苷及朝藿定C含量测定方法， 包括如下步骤：

对照品溶液的制备：分别精密称取经五氧化二磷减压干燥12h的朝藿 定C、淫羊藿苷对照品适量，加入甲醇溶解分别制成每1ml含0.8mg、0.02mg 的溶液，作为对照品储备液，精密吸取所述对照品储备液各1ml，分别置于 10ml量瓶中，随后各加入体积比为甲醇：体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合 液稀释定容至10ml，摇匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

供试品溶液的制备：精密吸取喘可治注射液1ml，置10ml量瓶中，加 入体积比为甲醇：体积浓度1.5％乙酸＝55:45的混合液稀释定容至10ml，摇 匀，经0.45μm微孔滤膜滤过，即得。

色谱条件与系统适用性试验：照高效液相色谱法测定，以十八烷基硅 烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以体积浓度1.5％乙酸为流动相 B，控制流动相流速为1.0ml/min进行梯度洗脱；控制柱温：30℃；检测波 长为270nm；理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于5000。

所述梯度洗脱程序具体为：0-1min，流动相A：流动相B为27％：73％ →30％：70％；1-4min，流动相A：流动相B为30％：70％→20％：80％；4-6min， 流动相A：流动相B为20％：80％→27％：73％；6-20min，流动相A：流动 相B为27％：73％→27％：73％；20-30min，流动相A：流动相B为27％： 73％→80％：20％。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色 谱仪，测定并计算，即得。

所述喘可治注射液为每1ml含朝藿定C C₃₉H₅₀O₁₉和淫羊藿苷 C₃₃H₄₀O₁₅，按淫羊藿苷C₃₃H₄₀O₁₅计，总和不得少于0.48mg，1mg C₃₉H₅₀O₁₉相当于0.8224mg C₃₃H₄₀O₁₅。

实施例5

本实施例所述的喘可治注射液的原料药配方如下：

巴戟天50g，淫羊藿30g。

所述喘可治注射液按照以下方法制备：

按照上述重量份数取巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱 药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去尘沙、泥垢，将淫羊藿 切成1cm左右小段、60℃下干燥；巴戟天60℃下干燥后，粉碎成20目粗 粉；然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍 量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成50℃下相对密度至1.2时，加 入乙醇是含醇量达60％，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰 胺柱吸附，用水和一种30％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉 碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80度以下真空干燥，得 巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、 1小时，提取液浓缩成50℃下相对密度至1.2时，加入乙醇是含醇量达70％， 回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种 35％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干， 用溶媒溶解析出结晶，在80℃以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用 水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115℃30分 钟灭菌、用色水捡漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备 好：用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。

实施例6

本实施例所述的喘可治注射液的原料药配方如下：

巴戟天5g，淫羊藿120g。

所述喘可治注射液按照以下方法制备：

按照上述重量份数取巴戟天、淫羊藿进行前处理工序，从众多的杂乱 药材中拣选上好的药材，而后用水多次清洗，除去尘沙、泥垢，将淫羊藿 切成1cm左右小段、60℃下干燥；巴戟天60℃下干燥后，粉碎成20目粗 粉；然后用此净原料进行第二提取工序，巴戟天净原料依次用8、7、6倍 量水分别提取1.5、1、1小时，提取液浓缩成50℃下相对密度至1.2时，加 入乙醇是含醇量达60％，回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰 胺柱吸附，用水和一种30％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉 碎洗脱，浓缩过滤烘干，用溶媒溶解析出结晶，在80℃以下真空干燥，得 巴戟天提取物；淫羊藿净原料依次用15、10、10倍量水分别提取1.5、1、 1小时，提取液浓缩成50℃下相对密度至1.2时，加入乙醇是含醇量达70％， 回收乙醇，浓缩至相对密度为1.1时，分次上聚酰胺柱吸附，用水和一种 35％大极性溶剂洗脱，洗脱液混合回收烘干，再粉碎洗脱，浓缩过滤烘干， 用溶媒溶解析出结晶，在80℃以下真空干燥，得淫羊藿提取物；提取物用 水配制成溶液，滤棒粗滤、再用滤球和0.45滤膜过滤、灌封、115℃30分 钟灭菌、用色水捡漏、灯检、印字、然后包装入库；其中安瓿处理提前备 好：用纯水粗洗、注射用水精洗、最后灭菌干燥，用于灌封，即得。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方 式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可 以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予 以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保 护范围之中。