肌酸组合物的摄取方法及在该摄取方法中使用的肌酸组合物以及使用所述肌酸组合物制成的含肌酸的药剂及食品

技术领域

本发明涉及肌酸组合物的摄取方法及在该摄取方法中使用的肌 酸组合物，进而涉及使用在该摄取方法中使用的肌酸组合物制成的含 肌酸的药剂及食品。

背景技术

肌酸(1-甲基胍基醋酸)或肌酸类似物(以下，将它们总称为“肌 酸组合物”。)没有被IOC(国际奥委会)列入禁止使用的药物，在 1992年的巴塞罗那奥运会上，主要以经口摄取正式被使用，服用了 的体育选手取得了好成绩，因而作为有效提高运动表现的氨基酸组合 物为人所知。此外，近年，也作为以治疗ALS(肌萎缩性侧索硬化症) 等疑难杂症为目的的稀少药品而实施临床试验。

进而，1998年，筑波大学的呼吸内科小组发表了使用实验用豚 鼠的基于肌酸组合物的哮喘抑制试验的有效性(参照非专利文献1)。 翌年，1999年，除了对罹患哮喘的豚鼠的实验以外，该小组在日本 的呼吸道过敏性研究会上，通过对7例step2以上的哮喘患者使用肌 酸，确认了对人体的哮喘抑制的有效性(参照非专利文献2)。此外， 2003年Nomura等发表的英国药理学杂志，2003年，139卷，715-720 页(非专利文献3)中，发现肌酸具有抗炎症作用，确认了对哮喘有 效。非专利文献1至3中记载的哮喘抑制实验中，使用了本申请人等 开发的含肌酸的饮料(例如，专利第3595373号公报。以该公报作为 专利文献1。)。并且，美国专利第6093746号说明书(专利文献2) 中也公开了含肌酸的哮喘抑制剂。

这里，肌酸组合物的制品剂型有粉末、片剂、胶囊、悬浊液及水 溶液等，其中，在肌酸组合物的销售市场中使用最多的是肌酸粉末， 将该粉末直接摄取，或实施将该组合物溶解于水或果汁中摄取的方 法。在这样的摄取方法普及化的过程中，巴西的圣保罗大学的小组发 表了通过摄取肌酸，使实验用小鼠的哮喘恶化的报告(参照非专利文 献4)。

使用称为肌酸的同一物质，作为论文正式发表有非专利文献1至 3以及专利文献2中记载的抑制哮喘，另一方面，也发表有非专利文 献4中记载的使哮喘恶化。

原本，肌酸为肉类、鱼类中含有的物质，在大量摄取肉、鱼的情 况下，能够摄取克单位的肌酸。但是，并没有因饮食生活摄取的肌酸， 使哮喘恶化这样的报告，因此难以认为肌酸本身是诱发哮喘或恶化的 原因。

并且，市售的肌酸主要是化学合成品，在直至制得肌酸的合成过 程中，除肌酸以外，虽然微量但含有肌酸酐、钠盐、氰化合物(双氢 三嗪、双氰胺等)等杂质。这里，推测为这些杂质可能是引起诱发哮 喘或使其恶化的原因。并且，还担心会不会是所述氰化合物进一步与 生物体内的胃酸等酸性物质反应而产生氰化氢气体，但在摄取肌酸时 的注意中，关于该点从肌酸组合物的销售商那里完全没有指出或暗 示。

不过，在制造如专利文献1中记载那样的含肌酸的饮料的情况 下，在最终工序中，实施100℃以上的高温杀菌。另一方面，在通常 情况下，如上所述，肌酸粉末直接经口摄取，与常温(10～35℃左右) 或冷温(10℃以下)的水、果汁等一起摄取，或使该肌酸粉末溶解在 常温(10～35℃左右)或冷温(10℃以下)的水、果汁等中摄取。如 上所述，若考虑到在使用专利文献1中记载的肌酸饮料的情况下，表 现出非专利文献1至3中记载那样的哮喘抑制效果，相反，在非专利 文献4的报告中用常温的水等摄取肌酸，推测为根据与肌酸一起摄取 或使肌酸溶解时的水或果汁等的温度，可能与有无产生氰化氢气体有 关。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：专利第3595373号公报

专利文献2：美国专利第6093746号说明书

非专利文献

非专利文献1：Y.Uchida等，美国呼吸与重症医学杂志(American  Journal of Respiratory and Critical Care Medicine)，157卷(Vol.37)，3 号(Number3)，A827页，1998年。

非专利文献2：野村等，“关于豚鼠哮喘模型中的肌酸有效性的 研究”，第35届呼吸道过敏性研究会预稿集，29页，1999年3月6 日。

非专利文献3：Nomura,A等，英国药理学杂志(Br.J.Pharmacol.)， 2003年，139卷，715-720页。

非专利文献4：RodlfoP.Vieira等，美国呼吸系统细胞和分子生物 学杂志(American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology)， 37卷(Vol.37)，660-667页，2007年。

发明内容

本发明要解决的技术问题

鉴于以上情况，本发明的目的是提供一种肌酸组合物的摄取方法 以及在该摄取方法中使用的肌酸组合物。

此外，本发明的目的是提供一种基于在该摄取方法中使用的肌酸 组合物的含肌酸的药剂以及食品。

解决技术问题的技术手段

本发明涉及的摄取方法的上述目的为将肌酸组合物与饮料同时 经口摄取的肌酸组合物的摄取方法，通过如下方案有效实现，即相对 于加热至80～100℃的水，使所述肌酸组合物溶解1秒以上，配制肌 酸组合物水溶液，通过使所述肌酸组合物水溶液与常温或冷温的饮料 混合，从而经口摄取。

进而，本发明涉及的摄取方法，通过如下方案更有效地实现，即 所述肌酸组合物为一水肌酸、肌酸酐、肌酸磷酸盐、肌酸丙酮酸盐、 肌酸柠檬酸盐中的任意一种的晶体粉末；或者所述肌酸组合物为组合 两种以上一水肌酸、肌酸酐、肌酸磷酸盐、肌酸丙酮酸盐、肌酸柠檬 酸盐中任意的晶体粉末；或者所述饮料为水；或者所述水选自自来水、 蒸馏水、矿泉水类；或者所述饮料为果汁类。

本发明涉及的肌酸组合物为在权利要求1至6中任意一项所述的 肌酸组合物的摄取方法中使用的肌酸组合物，通过如下方案有效实 现，即通过将所述肌酸组合物的制造过程中得到的粗产物用加热至 80～100℃的水洗涤1秒以上，从而除去杂质。

进而，本发明涉及的肌酸组合物，通过如下方案更有效地实现， 即所述肌酸组合物为选自一水肌酸、肌酸酐、肌酸磷酸盐、肌酸丙酮 酸盐、肌酸柠檬酸盐组成的组中的晶体粉末；或者所述洗涤的次数为 至少1次以上。

进而，本发明为使用权利要求7至9中任意一项所述的肌酸组合 物而成的含肌酸的药剂，通过如下方案有效实现，即为粉末、颗粒状、 片剂型、或者用胶囊或肠溶剂包覆的剂型。

进而，本发明为使用权利要求7至9中任意一项所述的肌酸组合 物而成的食品，通过如下方案有效实现，即为粉末、颗粒状、片剂型、 悬浊液状、或者用胶囊或肠溶剂包覆的剂型。

发明效果

根据本摄取方法，能够不损害肌酸的有效成分，此外，不考虑产 生氰化氢气体的担忧，能够安全且简便地摄取肌酸组合物。

进而，根据本发明的肌酸组合物，没有对氰化合物系杂质的担忧。

附图说明

图1为表示本发明的肌酸组合物的摄取方法涉及的实施方式的 流程图。

图2为在本发明的摄取方法中使用的肌酸组合物涉及的流程图。

图3为表示本申请实施例中的氰化氢气体检测管的情况的图像。

具体实施方式

对本发明涉及的肌酸组合物的摄取方法(以下，称为“本申请摄 取方法”。)进行说明。

首先，在本申请摄取方法中使用的饮料可适用于水、果汁、市售 的运动饮料、牛奶或乳制品类、茶类、咖啡类、碳酸饮料、清凉饮料 水等所有饮料，但优选为水。此外，水也可选自蒸馏水、自来水、矿 泉水类等。这里所称的矿泉水类是指根据农林水产省(日本)规定的 “矿泉水组合物(瓶装饮用水)的品质显示方针”的矿泉水类或在各 外国中按照如所述方针规定的矿泉水类。顺便一提，水的硬度没有特 别限定。使用水的情况下，可以直接使用，但也可以使用添加了适度 碱标准溶液等的水，或使用通过了碱性离子净水器等的水。

接着，对在本申请摄取方法中使用的肌酸组合物进行说明。首先， 本申请所称的肌酸组合物是指肌酸晶体粉末。进而，本申请所称的肌 酸晶体粉末可考虑为肌酸酐、一水肌酸、肌酸酐及一水肌酸的混合物、 肌酸磷酸盐、肌酸丙酮酸盐、肌酸柠檬酸盐、肌酸马来酸酯、肌酸马 来酸盐、肌酸甲基酯、肌酸乙基酯、肌酸磷酸酯、肌酸硝酸酯、肌酸 硫酸酯、肌酸亮氨酸酯、葡糖酸肌酸、环肌酸等所有肌酸化合物的晶 体粉末，进而也可考虑为肌酸类似物的晶体粉末等。

并且，基于图1的流程图，对本发明涉及的肌酸组合物的摄取方 法进行说明。这里，作为肌酸组合物，设定使用一水肌酸的肌酸晶体 粉末的情况。

首先，将水加热至80～100℃(1个大气压)(步骤S1)。这里， 向水中添加碱标准溶液等的情况是在加热前预先添加。这里所称的碱 标准溶液用来使溶解肌酸组合物的水或饮料的pH(氢离子浓度)变 为7～10。碱标准溶液的种类，只要是经口摄取时，对人体影响小的 弱碱性物质(例如，碳酸钠水溶液等)的水溶液，则没有特别限定， 浓度也没有特别限定。并且，也可以不另外添加碱标准溶液。

关于加热温度，如果以提高溶解度为目的，也可考虑将水加入压 力釜等中，边加压边在水的沸点(约100℃)以上使该组合物溶解， 但因为经口摄取，且肌酸组合物自身有引起变性(主要是作为主成分 的肌酸自身的分解等)的可能性，因此将上限设定为水的沸点100℃ (1个大气压)。此外，加热温度为80℃以下时，有时该组合物也难 以溶解，但在摄取溶解了的肌酸组合物时，未分解除尽的肌酸组合物 中含有的微量的杂质(主要是氰化合物)与体内的胃酸等酸性物质反 应，如背景技术中记述的那样，有哮喘症状恶化的可能。关于该点， 后面列举实施例进行详细说明。

步骤S11之后，使肌酸组合物溶解1秒以上，配制肌酸组合物水 溶液(步骤S12)。

关于溶解时间，在1秒以下时，肌酸组合物未充分溶解，且肌酸 组合物中含有的微量的杂质未被分解除去。此外，关于溶解时间的上 限没有特别限定，但若考虑到肌酸组合物自身的变性等，优选大体至 10分钟(600秒)左右。并且，水的量及肌酸的量，只要使肌酸组合 物溶解于水中时，水溶液整体变为均一体系即可，因此没有特别限定。

接着，步骤S2之后，使所述肌酸组合物水溶液混入常温(10～ 35℃左右)或冷温(10℃以下)的饮料中来进行摄取(步骤S13)。 作为该饮料，如上所述的那样，不限于水或果汁、市售的运动饮料等， 但其中优选为水。并且，用作饮料时的水，可以与配制所述肌酸组合 物水溶液时使用的水使用相同的水，也可以使用不同的水。

并且，关于在本申请摄取方法中使用的饮料、肌酸组合物，对将 肌酸晶体粉末(主要是一水肌酸)用作肌酸组合物的情况进行说明， 但不限于此，只要满足上述那样的条件，则在溶入肌酸时可使用各种 饮料，或者也可以使用上述的肌酸化合物或肌酸类似物的晶体粉末来 代替一水羧酸，作为肌酸组合物。此外，也可以与抑制胃酸等酸性物 质的食品、食品添加物、医药品同时摄取肌酸组合物。

接着，对主要在本申请摄取方法中使用的肌酸组合物进行说明。 并且，本实施方式中，设定一水肌酸的晶体粉末(以下，仅称为“肌 酸晶体粉末”。)作为肌酸组合物来进行说明。

一般地，如前所述，在肌酸晶体粉末(现有市售品)中，虽然微 量但含有钠盐、氰化合物等这样的杂质。例如，可考虑使用重结晶法 来除去杂质，但使用重结晶法的情况下，必须对所使用的溶剂的选择 进行研究，此外，根据所使用的溶剂不同，难以完全除去溶剂成分， 因此在经口摄取的情况下，必须注意。

此外，通过使用本申请摄取方法，即使是在市售品的状态下也能 够充分除去杂质(主要是氰化合物)，但根据杂质量的不同，即使是 本申请摄取方法也不能断言能够完全除去。

这里，关于肌酸组合物(本实施方式中设定为一水肌酸的晶体粉 末)，探讨在本申请摄取方法中使用的前阶段，即制品阶段，进一步 除去了杂质的肌酸组合物。以下，基于图2的流程图来进行说明。

对肌酸组合物(这里称为一水肌酸的晶体粉末。)，按照常规方法， 进行肌酸组合物的合成反应(步骤S21)。并且，这里所称的常规方 法例如参照日本特表2009-532406号公报(或对应的国际专利公开第 2007/115799号小册子)。即，日本特表2009-532406号公报记载的方 法是指在铜/镍基底的雷尼镍催化剂存在下，使N-甲醇胺与氢氧化钠 水溶液在高压釜中反应，得到肌氨酸钠溶液后，调整至pH9.6，使所 述肌氨酸钠溶液与氨基氰反应，得到一水肌酸(参照日本特表 2009-532406号公报实施例1及3。)。通过所述公报或现有的合成反 应制造肌酸组合物时，在步骤S21中，在得到反应粗产物的阶段停止。

将在步骤S21中得到的粗产物在加热至80～100℃的水中洗涤1 秒以上(步骤S22)。这种情况下，水优选为纯水，但也可以是自来 水。并且，水的加热温度为80℃以下时，杂质的分解除去并不充分， 若为100℃以上，则作为肌酸组合物主成分的肌酸自身有分解的可能。 此外，对于洗涤次数，只要为1次以上，则对次数没有限定，但优选 至10次左右。

接着，对在步骤S22中洗涤并提纯的肌酸组合物使用真空烘箱等 进行减压干燥，得到所希望的肌酸组合物(步骤S23)。减压干燥时 的压力没有特别限定。此外，关于减压干燥时的温度，优选为40～ 100℃左右。即，由于为用来除去水的减压干燥，因此可进行适当调 节。

并且，关于所述肌酸组合物，以一水肌酸的晶体粉末为例，对实 施方式进行说明，但除此以外，还可适用于肌酸酐、肌酸酐及一水肌 酸的混合物、肌酸磷酸盐、肌酸丙酮酸盐、肌酸柠檬酸盐、肌酸酐、 一水肌酸、肌酸酐及一水肌酸的混合物、肌酸磷酸盐、肌酸丙酮酸盐、 肌酸柠檬酸盐、肌酸马来酸酯、肌酸马来酸盐、肌酸甲基酯、肌酸乙 基酯、肌酸磷酸酯、肌酸硝酸酯、肌酸硫酸酯、肌酸亮氨酸酯、葡糖 酸肌酸、环肌酸等所有肌酸化合物的晶体粉末，进而可适用于肌酸类 似物的晶体粉末等。

此外，基于在步骤S23中得到的肌酸组合物，可应用于粉末、片 剂型、颗粒状、悬浊液状，或者用胶囊或肠溶剂包覆的任一种食品、 或粉末、颗粒状、片剂型、用胶囊或肠溶剂包覆的任一种含肌酸的药 剂。并且，虽然为所述胶囊及肠溶剂，但只要能抑制胃酸与肌酸成分 反应即可，因此材质没有特别限制。

以上，对本发明涉及的肌酸组合物的摄取方法及在该摄取方法中 使用的肌酸组合物进行了说明，但本发明的实施方式不限于此。

实施例

下面，对本发明的肌酸组合物的摄取方法涉及的实施例进行说 明。

[实施例1]基于各种温度下的肌酸水溶液与盐酸的反应是否产 生氰化氢气体

如前所述，推测为摄取到体内的肌酸组合物与体内的胃酸反应而 产生氰化氢气体，进而，推测为也与使肌酸组合物溶解的水的温度有 某种关联。

因此，为了验证上述推测，使肌酸组合物溶解于各种温度的水中， 进行肌酸与盐酸的反应实验。

首先，在烧杯内，相对于5mL常温的纯水(以下，仅称为“水”。)， 加入作为肌酸组合物的2g一水肌酸(以下，在本实施例1中称为“肌 酸”。)，搅拌。这里所称的常温是指10～35℃左右的温度。所述搅拌 之后，将该水溶液改换至三角烧瓶中，加入10mL盐酸，在三角烧瓶 中塞入栓，边搅拌边使其溶解，自溶解3分钟后，用氰化氢气体检测 管(GASTEC公司制GV－100S。测定范围0.2～7ppm)进行测定。 此时，该检测管呈粉红色，检测到0.2ppm的氰化氢气体(参照图3 (a))。

同样地，将纯水分别调整为60℃、70℃、80℃、100℃，通过与 上述顺序同样的顺序，进行即时实验。结果，纯水的温度为60℃及 70℃的情况，与使用了常温的纯水的情况同样，检测管呈粉红色，检 测到0.2ppm的氰化氢气体(参照图3(b)及图3(c))。此外，纯水 的温度为80℃的情况下，小于0.2ppm(参照图3(d))，即，没有呈 现出如图3(a)至(c)中所示那样的粉红色，纯水的温度为100℃ 的情况下，检测管没有呈现颜色，得到未检出氰化氢气体这样的结果。 并且，纯水的温度与氰化氢气体浓度间的关系如下面的表1所示。

[表1]

表1.水的温度与氰化氢气体浓度间的关系

从上述结果可确认，在肌酸中使用常温的水的情况自不用说，即 使使用60℃及70℃的水的情况也有产生氰化氢气体的危险性。另一 方面，在80℃的温水中，变为小于0.2ppm，在100℃的水中，确认 到不产生氰化氢气体。据此，启示了若不将一水肌酸中微量含有的氰 化合物在80℃以上的温水中进行分解处理，则有产生氰化氢气体的 危险性。

下面，在本发明的肌酸组合物的摄取方法中，使肌酸(一水肌酸) 溶解于常温(10～35℃左右)的水(介质)中，为了确认在该摄取方 法中使用时的效果，使用豚鼠进行动物实验。以下，作为实施例2至 8，依次进行说明。

[实施例2]肌酸待测物质溶液及对照实验用溶液的配制

(1)肌酸待测物质溶液的配制

首先，在本实施例2中，配制了肌酸待测物质溶液及对照实验用 溶液。配制肌酸待测物质溶液时使用的肌酸组合物及介质，如下面所 示的表2所示。

[表2]

表2.在实施例2中配制的肌酸待测物质溶液配制中使用的试剂等

肌酸待测物质溶液的配制为，称量必要量的一水肌酸(以下，称 为“肌酸粉末”。)后，用玛瑙乳钵磨碎该肌酸粉末，加入适量的介质 使其悬浊。这里所称的必要量是指每1kg豚鼠，投药3000mg的肌酸 粉末。

接着，将得到的肌酸粉末悬浊液转移至量筒或量瓶中，进而加入 介质，配制成肌酸粉末悬浊液，使其为300mg/mL。并且，肌酸待测 物质溶液的配制为用时配制，即，在每次后述的经口投药实验(实施 例5及6)时随时配制。

(2)对照实验用溶液的配制

关于对照实验用溶液，直接使用如表2所示的0.5w/v％甲基纤维 素400溶液(常温)。

[实施例3]实施例5及6中使用的试剂的配制

下面，对后述的实施例5及6中使用的含抗原的生理盐水溶液 (1w/v％及2w/v％)、甲吡酮生理盐水溶液及马来酸吡拉明生理盐水 溶液的配制进行说明。

(1)含抗原的生理盐水溶液(1w/v％及2w/v％)的配制

首先，作为抗原，使用Sigma-Aldrich公司的卵白蛋白 (Ovalbumin)(以下，称为“OVA”。)。配制为，在称量OVA后，使 用生理盐水(大塚制药制)配制成1w/v％及2w/v％的含OVA的生理 盐水溶液。关于配制，为用时配制，即在每次后述的经口投药实验(参 照实施例5及6)时随时配制。

(2)甲吡酮生理盐水溶液

所使用的甲吡酮，使用Sigma-Aldrich公司的甲吡酮。配制为， 称量甲吡酮后，使用生理盐水(大塚制药制)配制甲吡酮生理盐水溶 液，使其为10mg/mL的浓度。并且，关于配制，与上述含OVA的生 理盐水溶液同样为用时配制。

(3)马来酸吡拉明生理盐水溶液的配制

所使用的吡拉明马来酸盐使用Sigma-Aldrich公司的吡拉明马来 酸盐。配制为，称量吡拉明马来酸盐后，使用生理盐水(大塚制药制) 配制甲吡酮生理盐水溶液，使其为10mg/mL的浓度。并且，关于配 制，与上述含OVA的生理盐水溶液同样为用时配制。

[实施例4]在实施例2中配制的肌酸待测物质溶液及对照实验 用溶液的投药

在后述的实施例5及6涉及的试验前，将在实施例2中配制的肌 酸待测物质溶液及对照试验用溶液分别对2只豚鼠(由九动株式会社 提供)经口投药。以下，将已投药肌酸待测物质溶液的豚鼠称为“肌 酸哮喘模型豚鼠”，将已投药对照试验用溶液的豚鼠称为“对照哮喘 模型豚鼠”。

所使用的豚鼠，2只豚鼠均为雄性5周龄豚鼠。并且，豚鼠根据 后述的实施例5及6涉及的实验次数，每次使用其他豚鼠。关于经口 投药，首先在投药前测定豚鼠的体重。接着，该肌酸待测物质溶液及 对照实验用溶液的投药量为每1kg豚鼠设为10mL，基于预先测定的 体重，按0.1mL单位计算。

并且，关于经口投药，使用注射筒及营养导管进行投药，在实施 例5及6涉及的试验的1小时前，投药1次。

[实施例5]制作哮喘模型豚鼠

在实施例4中，将已投药肌酸待测物质溶液的豚鼠(肌酸哮喘模 型豚鼠)及已投药对照实验用溶液的豚鼠(对照哮喘模型豚鼠)分别 收容到聚丙烯制容器后，用超声波喷雾器使在实施例3中配制的1w/v ％的含OVA的生理盐水溶液雾化，使所述含OVA的生理盐水溶液每 天吸入10分钟且连续吸入8天。如此制作哮喘模型豚鼠。

[实施例6]哮喘反应的诱发实验

对于在实施例5中制作的肌酸哮喘模型豚鼠及对照哮喘模型豚 鼠，最终致敏的1周后，收容并保存在呼吸机能测定用腔室中，然后， 使用超声波喷雾器，使在实施例3中配制的2w/v％的含OVA的生理 盐水溶液雾化，通过吸入喷雾5分钟，诱发抗原抗体反应。在该诱发 约24小时(前后1小时)前及约1小时(前后5分钟)前，对哮喘 模型豚鼠投药在实施例3中配制的甲吡酮生理盐水溶液到后肢末梢 静脉内，在该诱发30分钟前，对哮喘模型豚鼠投药在实施例3中配 制的马来酸吡拉明生理盐水溶液到腹腔内。

并且，甲吡酮生理盐水溶液及马来酸吡拉明生理盐水溶液的投药 量为每1kg豚鼠的体重设为10mg/mL，基于在该生理盐水溶液的投 药前预先测定的体重，以0.1mL单位进行计算。

[实施例7]呼吸道阻力的测定

在本实施例7中，对于肌酸哮喘模型豚鼠及对照哮喘模型豚鼠， 使用综合呼吸机能解析系统(Pulmos-I、株式会社MIPS制)测定呼 吸道阻力(specific airway resistance，sRaw)。关于sRaw值的测定， 在实施例6中抗原抗体反应的诱发开始1分种后，所述抗体反应的诱 发开始约2、4、5、6、7、8及22(～24)小时后进行测定。各测定 时间中的sRaw设为豚鼠100次呼吸的平均值。并且，对于各豚鼠， 在实施例6中的甲吡酮生理盐水溶液投药前，至少进行1次收容及保 存在呼吸机能测定用腔室中的操作，实施对所述腔室的适应性。

接着，根据各测定时间中的sRaw值，使用综合呼吸机能解析系 统的解析软件(WinPUL16Ver.1.23、株式会社MIPS制)，计算相对 于各测定时间所对应的sRaw值的sRaw增加率。并且，sRaw增加率 用如下所示的公式表示。

此外，各测定时间中的sRaw增加率如下面的表3所示。根据表 3所示的结果，肌酸哮喘模型豚鼠及对照哮喘模型豚鼠的sRaw增加 率均在抗原抗体反应的诱发开始4小时后，暂时出现减少峰，在抗原 抗体反应的诱发开始5及6小时后转为增加。并且，肌酸哮喘模型豚 鼠在抗原抗体反应的诱发开始7小时后的sRaw增加率增加，与此相 对，对照哮喘模型豚鼠中的抗原抗体反应的诱发开始7小时后的sRaw 增加率减少。关于抗原抗体反应的诱发开始8小时后及23～24小时 后，肌酸哮喘模型豚鼠及对照哮喘模型豚鼠的sRaw增加率均有减少 的倾向。并且，可确认到肌酸哮喘模型豚鼠的sRaw增加率(其中， 除抗原抗体反应的诱发开始1分钟后。)整体比对照哮喘模型豚鼠高。

[表3]

表3.各测定时间中的sRaw增加率

注)：括号内的数值为误差范围

[实施例8]速发型哮喘反应(IAR)及迟发型反应(LAR)的 评价

上述实施例7中计算出的sRaw增加率中，以抗原抗体反应的诱 发开始1分钟后的sRaw增加率作为速发型哮喘反应(Immediate  Airway Response。以下，称为“IAR”。)的评价指标。

此外，以抗原抗体反应的诱发开始4～8小时后的sRaw增加率 作为迟发型反应(Late Airway Response。以下，称为“LAR”。)的评 价指标。并且，关于迟发型反应的评价指标，将以抗原抗体反应的诱 发开始4～8小时后的sRaw增加率为基础计算出的曲线下面积 AUC4-8h作为评价指标。AUC4-8h的计算方法基于下面的数学式2 所示的公式进行计算。此外，关于肌酸哮喘模型豚鼠及对照哮喘模型 豚鼠各自的IAR及LAR，如表4所示。

[数2]

AUC4-8h(％)＝1/2(％sRaw.4h+％sRaw.8h)+(％sRaw.5h+％sRaw.6h+％sRaw.7h)

％sRaw.*h：诱发开始*小时后的sRaw增加率

[表4]

表4.各模型豚鼠涉及的速发型哮喘反应(IAR)及迟发型 反应(LAR)的评价

注)：括号内的数值为误差范围

在探讨IAR及LAR的情况下，关于LAR，可知若与对照哮喘模 型豚鼠相比，肌酸哮喘模型豚鼠的数值高，因此，肌酸哮喘模型豚鼠 会引起强烈的哮喘症状。另外，对本申请方法中的肌酸摄取方法的有 效性及氰化氢气体与哮喘症状间的因果关系尚有各种探讨的余地，但 至少使肌酸组合物溶解于常温(10～35℃左右)的介质中进行摄取的 情况下，会引起强烈的哮喘症状，因此，可认为从实施例1中记述的、 产生氰化氢气体与介质的温度间的关系，和实施例6至8涉及的豚鼠 实验的结果来看，启示出哮喘症状与氰化氢气体的因果关系。

以上，对本发明涉及的肌酸组合物的摄取方法的相关实施例进行 了详细说明，但本实施例仅是一个例子，所使用的肌酸组合物、加热 温度以及使用豚鼠的动物实验等的各种条件不限于此。