一种棕榈植物种质资源抢救性收集保存的方法

技术领域

本发明涉及种苗繁育技术领域，尤其涉及一种棕榈植物种质资源 抢救性收集保存的方法。

背景技术

种质资源的收集与保存是育种研究的基础。棕榈植物主要靠种子 繁殖，但在野外收集棕榈植物种质资源时，经常会遇到时机不对、没 有新鲜的成熟种果，或者树体过高、无法采果等问题。而树下散落的 种果因长期暴露在不适宜的自然条件下，发芽率急剧下降甚至完全无 法发芽，从而导致资源收集工作受阻。本发明以树下收集的腐烂种果 或半干种子的胚为材料，经适当前期处理后，通过胚培养产生幼苗， 从而达到对收集到的不同状态的各种种质资源进行抢救性收集保存 以及高效繁殖更新的目的。

关于棕榈植物种质资源的收集与保存，普遍存在的问题是收集到 的种子发育状态不一致、人工催芽条件下的萌发率较低或完全不能萌 发，其主要原因是种壳及胚乳包被阻隔、胚脱水萎缩等。因此，破除 种壳取出完整的胚，然后将其植入适当的植物培养基进行萌发的方法 有利于消除上述不利条件的影响。培养基可为胚萌发提供必要的营 养，同时保证其正常生长。因此，利用胚培养技术可以对获取的各种 棕榈植物种质资源进行抢救性收集与保存，有利于拓展棕榈植物种质 资源的收集范围、提高种质资源保存的成功率。目前，将相关技术用 于棕榈植物种质资源收集与保存的相关研究尚未见报道。

发明内容

本发明针对棕榈植物种质资源收集与保存的特点提供了一种适 合棕榈植物种质资源抢救性收集保存的方法，以收集获得的各种状态 的离体胚为材料，通过适当的植物培养基及培养条件促使胚萌发并产 生幼苗，进一步通过炼苗移栽对有关种质资源进行活体保存，对于棕 榈植物种质资源的收集和保存具有重要意义。

本发明采用如下技术方案：

本发明的棕榈植物种质资源抢救性收集保存的方法的具体步骤 如下：

(1)离体胚的获取：

选取收集的棕榈植物种子材料，洗净后除掉果肉后破开果壳，切 取包裹胚的胚乳块消毒灭菌，然后切除多余胚乳取出胚待接种；

(2)胚的初步培养：

将经过步骤(1)处理获取的无菌胚接种至初培养基上，至暗培 养条件下，温度设置为26～29℃，培养15～35天，获得分化出胚根和 胚芽的萌发胚；

(3)萌发胚的再培养：

将萌发胚接种至生根培养基中进行成苗培养，培养条件：温度 25～28℃，光照时间12h/d，光照强度1500～2000lux；培养时间60～70 天，萌发胚基本培养成具有初生根和叶片的幼苗；

(4)幼苗培养：

将将步骤(3)培养成的幼苗接种至幼苗培养基上进行幼苗培养， 以达到壮苗的目的，从而提高移栽成活率，培养条件：温度26～29℃， 光照时间12h/d，光照强度1500～2000lux；培养时间50～60天；

(5)炼苗移栽：

将具有两片以上初生叶片且长度达到5cm的幼苗移至幼苗培养 室开盖炼苗，时间控制在20～30d，培养条件：温度24～26℃，光照时 间12h/d，光照强度2000～3000lux，然后移栽至栽培基质中，可将栽 培基质做成苗床或者分装成育苗盆，注意保持基质水分。

步骤(1)中，所述的消毒灭菌程序为：先在浓度75％的酒精浸 泡2分钟，继续在浓度为0.1％的升汞溶液中浸泡30分钟，期间不定 时摇晃容器，保证灭菌溶液与被灭菌物充分接触，提高灭菌效率，然 后用灭菌水冲洗5次。

步骤(2)中，所述的初培养基是以MS培养基为基本培养基， 并添加琼脂7.0g/L。

步骤(2)中，优选初步培养中，温度设置为28℃，培养18天。

步骤(3)中，生根培养基是以MS培养基为基本培养基，并添 加活性炭5.0g/L、NAA0.5mg/L、琼脂7.0g/L。

步骤(3)中，优选再培养条件：温度27℃，光照时间12h/d， 光照强度1800lux；培养时间65天。

步骤(4)中，所述的幼苗培养基是以N6培养基为基本培养基， 并添加活性炭5.0g/L、NAA1.0mg/L、琼脂10.0g/L。

步骤(4)中，优选幼苗培养条件：温度28℃，光照时间12h/d， 光照强度1800lux；培养时间55天。

步骤(5)中，所述的栽培基质是指将椰糠和营养土壤按照1:2 的比例混合的基质。

步骤(5)中，优选炼苗培养条件：温度25℃，光照时间12h/d， 光照强度2500lux，时间控制在25d。

本发明的积极效果如下：

本发明是以棕榈植物的种胚为培养目标物，通过人工破除种壳和 胚乳并将获取的无菌裸胚接种在适当的培养基中，在人工控制的生长 条件下获取幼苗的方法。能够应用于棕榈植物种质资源的抢救性收集 与保存领域，对筛选优良种质资源类型、培育适合我国栽培的棕榈植 物品种具有重要的意义。

具体实施方式

下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。

实施例一

以收集的油棕落果为例，具体说明本方法。

1、油棕果离体胚的获取：选取收集油棕落果，洗净后除掉果肉 后破开果壳，切取包裹胚的胚乳块消毒灭菌，先在浓度75％的酒精浸 泡2分钟，摇晃灭菌容器，保证灭菌溶液与被灭菌物充分接触。然后 倒掉酒精，继续添加浓度为0.1％的升汞溶液，或者将被灭菌物从酒 精中取出加入到升汞溶液中，灭菌时间为30分钟，然后用灭菌水冲 洗5次，将完成消毒步骤的胚乳块放在经过灭菌处理的吸水纸上吸出 多余的水分，切除多余胚乳取出胚待接种。

2、油棕胚的初步培养：将经过前一步骤处理获取的无菌胚接种 至初培养基上，培养基的配制是以MS培养基为基本培养基，并添加 琼脂7.0g/L。至暗培养条件下，温度设置为26～29℃，约3周后可获 得长出胚根和胚芽的萌发胚。对于其它棕榈植物，其萌发时间由其自 身萌发特性决定。培养期间注意观察，及时剔除染菌胚。

3、油棕萌发胚的再培养：将萌发的油棕胚接种至生根培养基中 进行成苗培养，培养基的配制是以MS培养基为基本培养基，并添加 活性炭5.0g/L、NAA0.5mg/L、琼脂7.0g/L。培养条件：温度 25～28℃，光照时间12h/d，光照强度1500～2000lux；培养时间60～70 天，待萌发胚基本成苗后可转移培养基再培养。

4、油棕幼苗的培养：经过萌发胚的再培养，可以初步获得具有 初生根和叶片的幼苗，将其接种至幼苗培养基上进行幼苗培养，以达 到壮苗的目的，从而提高移栽成活率。培养基的配制是以N6培养基 为基本培养基，并添加活性炭5.0g/L、NAA1.0mg/L、琼脂10.0g/L。 培养条件：温度26～29℃，光照时间12h/d，光照强度1500～2000lux； 培养时间50～60天。

5、油棕幼苗的炼苗移栽：将具有两片以上初生叶片且长度达到 5cm的幼苗移至幼苗培养室开盖炼苗，时间控制在20～30d，培养条 件：温度24～26℃，光照时间12h/d，提高光照强度至2000～3000lux。 然后移栽至栽培基质中，栽培基质配制方法是将将珍珠岩和营养土壤 按照1:2的比例混合。可将栽培基质做成苗床或者分装成育苗盆，注 意保持基质水分。

经过上述步骤的操作，可以初步获得收集的油棕落果的幼苗。应 用本发明可对果肉已腐烂或失水半干等不良状态的种子进行胚培养 并产生幼苗，从而达到对相关种质资源进行抢救性收集保存的目的。 本技术的应用有利于开展油棕、槟榔、酒瓶椰子等棕榈科植物的收集、 繁育等工作，在筛选优良棕榈植物种质资源类型或培育适合我国栽培 的棕榈作物品种的工作中具有重要的意义。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术 人员而言，可以在不脱离本发明的原理和精神的情况下对这些实施例 进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及 其等同物限定。