中药多糖作为结肠递药载体的应用

具体实施方式：

本发明涉及中药多糖作为结肠靶向递药载体达到结肠定位递药的应用，下面将以大黄多糖作为结肠定位递药载体为例详细说明本发明的技术方案，但本发明并不局限在实施例所描述的范围。

本发明所涉及的治疗溃疡性结肠炎前体药包括5-氨基水杨酸前体药，即大黄多糖与5-氨基水杨酸的连接物；糖皮质激素前体药，即糖皮质激素与大黄多糖的连接物等细分的种类。

下面将通过多糖-地塞米松前体药的制备方法及其对TNBS诱导的大鼠结肠炎的药理试验和结果来说明其在制药领域中的用途。

(一)大黄多糖-地塞米松前体药物(TMP-DX)的制备：

(1)糖皮质激素琥珀酸半酯的合成

将用无水丙酮溶解的地塞米松、4-二甲氨基吡啶和丁二酸酐在室温下反应30min后，除去丙酮，将残留物用30％的乙醇纯化得到地塞米松琥珀酸半酯(DSH)。

(2)大黄多糖的制备

包括下述步骤：①将大黄粉碎；②用乙醇去除脂溶性成分后，蒸馏水回流；③回流液合并、浓缩、冻融法除蛋白，用乙醇沉淀、脱色；④蒸馏水溶解、除蛋白，除蛋白的方法是冻融法和sevag法联用，其过程如下：先用冻融法除蛋白数次，再用sevag法除蛋白数次测定糖含量(≥90％)；⑤经透析、过滤、浓缩、冷冻干燥等方法得到中药粗多糖，再采用超滤分离的方法分离纯化而得到分子量是(5-3)×10⁵的多糖。

(3)糖皮质激素琥珀酸半酯与大黄多糖的连接

将用无水二甲亚砜溶解的地塞米松琥珀酸半酯和羰基二咪唑在室温下反应30min，得到的反应物、用无水二甲亚砜溶解的大黄多糖和三乙胺在25℃、24h下反应，得到的反应物放入以1∶1的比例混合的乙醇和乙醚中沉淀，得到多糖连接物沉淀

将沉淀物重新溶于二甲亚砜溶液，加入无水乙醇∶乙醚＝1∶1的混合溶液沉淀多糖连接物。重复溶解沉淀步骤三次，最后将沉淀物分散于无水乙醇中，挥干乙醇，得到多糖连接物。

(二)地塞米松前体药药代动力学特性的观察：采用文献方法，将动物随机分为16组，按5μmol/kg的剂量(前体药按地塞米松剂量折算)分别ig给予地塞米松前体药或地塞米松，于给药后1、2.5、3.5、4.5、6、9、12、15h用乙醚麻醉大鼠，腹主动脉取血，采集抗凝血标本；并立即取胃、小肠近端、小肠远端、盲肠、结肠粘膜及内容物。①内容物均用4℃PH＝6.8NaH₂PO₄-Na₂HPO₄缓冲液按1∶10(g/ml)稀释，匀浆。取匀浆液0.7ml，加入0.7ml饱和NaCl溶液及0.2ml 6mg/L强的松琥珀酸半酯(内标)，用2ml甲基叔丁醚∶戊烷＝6∶4的混合液提取两次，每次取有机层溶液1.5ml，共3ml于尖底试管中，通风橱中挥干，残留物用50μl甲醇溶解，20μl用于高效液相色谱分析。②粘膜的处理方法同①。③抗凝全血经2500r/min离心5min，取血浆1ml，加入0.2ml 8mg/L强的松作为内标，用2ml甲基叔丁醚∶戊烷(6∶4)的混合液提取两次，每次取有机层溶液1.5ml，共3ml于尖底试管中，通风橱中挥干，残留物用50μl甲醇溶解，20μl用于高效液相色谱分析。

大黄多糖-地塞米松前体药的药代动力学结果如下：

参见表1，地塞米松给大鼠口服后，其主要分布在胃、小肠近端粘膜中，小肠远端、盲肠、结肠粘膜中分布较少。

表1  大鼠口服地塞米松(5μg/kg)后在胃肠道不同部位的分布(n＝6，x±s)

时间                 地塞米松(μg/g粘膜)

(h)        胃            小肠近端       小肠远端       回肠          结肠

1          3.04±0.60    1.24±0.42     0.36±0.34     ---           ---

2.5        1.43±0.21    0.55±0.14     0.43±0.11     0.32±0.09    0.21±0.05

3.5        1.03±0.34    0.46±0.23     0.56±0.21     0.45±0.16    0.33±0.12

4.5        0.86±0.12    0.44±0.18     0.32±0.15     0.34±0.08    0.56±0.05

6          0.41±0.18    0.31±0.07     0.22±0.11     0.20±0.12    0.13±0.03

9          0.23±0.10    0.12±0.02     0.14±0.03     0.08±0.05    0.06±0.03

12         0.06±0.03    0.03±0.01     0.07±0.04     0.04±0.01    0.03±0.01

15         ---           ---            ---            ---           ---

---表示未检测到

参见表2，地塞米松前体药口服后在大鼠胃、小肠近端粘膜中未检测到地塞米松。

表2大鼠口服大黄多糖-地塞米松前体药(5μg/kg)后地塞米松在胃肠道不同部位的分布                                           (n＝6，x±s)

时间                      地塞米松(μg/g粘膜)

(h)        胃    小肠近端    小肠远端    回肠          结肠

1          ---   ---         ---         ---           ---

2.5        ---   ---         ---         ---           --- 

3.5        ---   ---         ---         ---           ---

4.5        ---   ---         ---         ---           ---

6          ---   ---         ---         0.23±0.10    0.10±0.06

9          ---   ---         ---         0.28±0.09    0.60±0.14

12         ---   ---         ---         0.10±0.05    0.11±0.07

15         ---   ---         ---         ---           ---

---表示未检测到

(三)所述大黄多糖-地塞米松前体药对溃疡性结肠炎大鼠的治疗作用：

将48只大鼠分为6组，分别为对照组、模型组、地塞米松0.25μg/kg、多糖-地塞米松0.05μg/kg，0.25μg/kg，1.25μg/kg。结果显示：对2、4、6-三硝基本磺酸(TNBS)诱导的大鼠结肠炎，地塞米松虽具有良好的治疗作用，但也具有众所周知的免疫抑制副作用；采用地塞米松-大黄多糖连接物治疗TNBS诱导的结肠炎，不仅使地塞米松用量减小，疗效明显提高，且很好地避免了地塞米松引起的免疫抑制副作用。采用多糖-地塞米松和地塞米松治疗结肠炎大鼠，1次/天，共5天。结果如下表所示，多糖-地塞米松连接物的剂量为地塞米松的1/5时，其降低溃疡指数的作用几乎是地塞米松的200％，当二者剂量相等时，作用几乎相差300％。说明多糖-地塞米松治疗结肠炎的作用明显优于地塞米松(表3)。

表3多糖-地塞米松治疗TNBS诱导大鼠结肠炎的作用(n＝8，x±s)

组别             药物剂量       溃疡面积       结肠指数

                 μg/kg/d       mm²           mg/g

对照组           0              0              3.5±1.1

模型组           0              398.8±76.8    6.8±1.6

地塞米松         0.25           258.8±74.4    5.5±0.6

多糖-地塞米松    0.05           128.4±35.6    5.2±1.2

多糖-地塞米松    0.25           71.1±28.9     4.9±1.6

多糖-地塞米松    1.25           35.9±12.0     4.4±1.1