公开/公告号CN101503341A
专利类型发明专利
公开/公告日2009-08-12
原文格式PDF
申请/专利权人 沈阳药科大学;
申请/专利号CN200910010631.0
申请日2009-03-10
分类号C07C43/253(20060101);C07D317/70(20060101);C07C41/36(20060101);C07C41/38(20060101);C07C41/40(20060101);A61P1/00(20060101);A61P9/00(20060101);A61P25/28(20060101);A61P15/00(20060101);A61P39/06(20060101);A61P17/00(20060101);
代理机构21207 沈阳杰克知识产权代理有限公司;
代理人李宇彤
地址 110016 辽宁省沈阳市沈河区文化路103号
入库时间 2023-12-17 22:23:16
法律状态公告日
法律状态信息
法律状态
2014-04-23
授权
授权
2011-07-13
实质审查的生效 IPC(主分类):C07C43/253 申请日:20090310
实质审查的生效
2009-08-12
公开
公开
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种大量制备五味子醇甲和五味子醇乙的新工艺。该工艺采用五味子叶作为原料，而非采用常用的果实作为原料。
背景技术
1.五味子叶是木兰科五味子属植物木兰科植物木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Bill.、华中五味子Schisandra sphenantheraRehd.et Wils.、内南五味子Kadsura interior A.c.Smith.、K.heteroclita(Roxb.)Craib.、绿叶五味子Schisandra viridis A.C.Smith、毛叶五味子Schisandra pubescens Hemsl.et Wils.、球蕊五味子Schisandra sphaerandraStapf的干燥叶。
2.国外学者应用高效液相对五味子叶的CO2超临界提取物进行分析，发现其含有和五味子果实相同的木脂素，五味子醇甲、醇乙、甲素、乙素、丙素和gomisin N(Journal of Chromatography B，770(2002)283-289)。
五味子醇甲，又称五味子素(schizandrin)；五味子醇乙，又称戈米辛A(gomisinA)，广泛存在有北五味子及华中五味子的果实、果梗及叶子中。其药理作用涉及消化系统、心血管系统、中枢神经系统、生殖系统以及抗氧化、抗衰老等各个方面(中药材2005年2月第28卷第2期)。
中国专利说明书CN1817839A就公开了一种五味子醇甲的提取工艺，该方法是采用五味子果实为原料，通过溶剂提取，萃取物进行柱层析分离后，得到的五味子醇甲的纯度仅为50％或50％以上，为淡绿色粉末，木脂素类化合物的纯度越高，其颜色应该越浅或无色，因此可见其方法纯度并不高，而且目前，由于五味子市场需求量很大，远远满足不了国内外市场的要求，出现了对资源灭绝性的割蔓采收和破坏，有的地区普遍出现掠青现象，使五味子资源受到不同程度的破坏，导致可利用的五味子的资源减少，质量下降，价格不断攀升。而五味子叶资源十分丰富，因此本发明开发五味子叶作为提取五味子醇甲和五味子醇乙化学对照品的新原料，如果能将五味子叶作为五味子药源的补充，能够充分利用资源，变废为宝。
目前市场上销售的五味子醇乙和五味子醇甲化学对照品均从五味子果实中提取制备得到，而从五味子叶中提取五味子醇乙和五味子醇甲化学对照品的发明未见报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述五味子药材紧缺的情况，从五味子叶中提供一种具有较高提取效率、同时能提高其纯度、工艺简单、稳定、经济的五味子醇甲和五味子醇乙化学对照品提取制备方法。
本发明是通过如下技术方案完成的：
1.将五味子叶干燥，粉碎，用乙醇、丙酮、乙酸乙酯、石油醚中一种或几种温浸或加热回流提取后，将含有五味子醇甲和五味子醇乙的提取液减压浓缩至一定体积的药液，加入石油醚萃取，回收溶剂后再将含有五味子醇甲和五味子醇乙的萃取物经过柱层析分离，或将提取液浓缩至干直接进行柱层析分离，分别收集含有五味子醇乙和五味子醇甲的流份，将含有五味子醇乙的流份再次经过硅胶柱层析分离，收集含有五味子醇乙的流份，即为五味子醇乙粗晶，再经过反复重结晶即为五味子醇乙。将含有五味子醇甲的流份再经过一次硅胶柱层析及一次ODS色谱柱分离，收集含有五味子醇甲的流份，即为五味子醇甲粗晶，在经过反复重结晶即为五味子醇甲。
2.将制得的五味子醇甲和五味子醇乙经过UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS光谱鉴定，确定其结构。经TLC检测，在紫外254nm下观察，仅有单一暗斑。HFLC检测，采用RP-HPLC法，C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水(65:35)，检测波长为217nm，纯度达到98％以上，符合对照品要求。
本发明的有益效果是：本发明提供了从五味子叶中提取分离制备五味子醇乙和五味子醇甲标准品的新工艺，原料为废弃的叶子作为新原料，原料不需成本，制备方法亦为新方法。通过该方法，从5.2Kg叶五味子叶中可获得纯度在98％以上的五味子醇乙150mg，五味子醇甲52.3mg，获得纯度在90％以上的五味子醇乙90mg，五味子醇甲20mg，可进一步纯化纯度可达到98％以上。此工艺简单，操作方便，原料不需成本，能够较快速获得五味子醇乙和五味子醇甲的标准品，缓解当前五味子资源的紧缺，从而扩大药源，达到变废为宝的目的。
附图说明
图1为五味子醇甲和五味子醇乙提取分离流程图
图2为五味子醇甲的1H-NMR图谱；
图3为五味子醇乙的1H-NMR图谱
图4为五味子醇甲和五味子醇乙结构式
图5为HPLC纯度检查图谱
具体实施方式
实施例1：
五味子叶5.2kg，粉碎，加入80％丙酮加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液减压浓缩至密度为0.982的药液3.5L。加入等体积的石油醚萃取6次，石油醚层减压浓缩至干，得萃取物150g，将萃取物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品140mg，其纯度可达98.9％。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行ODS柱层析，30-70％甲醇洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品43mg，其纯度可达98.2％。
实施例2：
五味子叶5.2kg，粉碎，加入75％乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液减压浓缩至密度为0.982的药液4.5L。加入等体积的石油醚萃取6次，石油醚层减压浓缩至干，得萃取物203g，将萃取物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品150mg，其纯度可达98.7％以上。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行ODS柱层析，30-70％甲醇洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品52.3mg，其纯度可达98.4％。
实施例3：
五味子叶5.2kg，粉碎，加入75％乙醇，加热回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液减压浓缩至密度为0.982的药液4.5L。药液上HPD100大孔树脂吸附，并依次用水、30％、40-90％乙醇洗脱，收集40-90％乙醇洗脱物，回收乙醇并水浴蒸干，得洗脱物160.8g，将洗脱物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品120mg，其纯度可达98％以上。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行ODS柱层析，30-70％甲醇洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品50mg，其纯度可达98％以上。。
实施例4：
五味子叶1kg，粉碎，加入10倍量石油醚温浸48h，过滤，合并滤液减压浓缩至干，得提取物65.2g，将提取物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品18mg，其纯度可达99.0％。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(25:1-1:1)洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品6mg，其纯度可达98.4％
实施例5：
五味子叶1kg，粉碎，加入10倍量二氯甲烷温浸48h，过滤，合并滤液减压浓缩至干，得提取物70g，将提取物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品17.5mg，其纯度可达99.2％。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(25:1-1:1)洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品6mg，其纯度可达98.8％。
实施例6：
五味子叶1kg，粉碎，加入10倍量乙酸乙酯温浸48h，过滤，合并滤液减压浓缩至干，得提取物125g，将提取物进行硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(300:0.5—300:5)体积比的混合液梯度洗脱，粗分成6段，TLC检识，收集富含五味子醇乙的第2段部分，再进行二次硅胶柱层析，以环己烷-乙酸乙酯(10:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇乙的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇乙纯品18mg，其纯度可达98.2％。收集富含五味子醇甲的第5段部分，再进行硅胶层析，以环己烷-乙酸乙酯(8:1-1:1)体积比的混合液洗脱，TLC检识，收集富含五味子醇甲的部分，将此部分进行硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯(25:1-1:1)洗脱，收集富含五味子醇甲的部分，石油醚-甲醇-水反复重结晶，即为五味子醇甲的纯品6mg，其纯度可达98.9％。
实施例7：
结构与纯度检测：
结构确认：
UV：五味子醇乙为UVmax(MEOH)＝218nm；五味子醇甲为216.5nm；1H-NMR：数据与Yukinobu I，Heihachiro T，Itiro Y.The constituents ofSchisandra chinensis Baill.I.Isolation and structure determination of five newlignans，Gomisin A，B，C，F and G，and the absolute structure of Schisandrin.Chem.Pharm.Bull，1979，27(6)：1383-1394.所公布的基本一致。数据见表1。图谱见附图2、3
表1 五味子醇甲和五味子醇乙的1H-NMR谱数据(δ，300HZ)
经分析确定为五味子醇甲和五味子醇乙。
纯度分析：
A.TLC：在高效薄层板上点样1ug、5ug、10ug、15ug、25ug、50ug，分别以环己烷-丙酮(3:1)，石油醚-丙酮(3:1)，石油醚-乙酸乙酯(1:1)展开，在紫外254nm下观察，仅有单一暗斑。
B.经HPLC检测，纯度达到98％。见附图5。
机译： 包含五味子醇甲醇提取物作为活性成分的增强皮肤屏障的组合物
机译： 一种五味子提取物的未稀释溶液的制备方法和五味子提取物制备的五味子提取物的未稀释溶液
机译： 一种制备叔醇，一种衍生自α-卤代烷基嘧啶化合物的化合物和一种制备6-（1-溴乙腈）-4-氯-5-氟嘧啶的中间体的方法
