快速解离性多巴胺2受体拮抗剂

发明领域

本发明涉及作为快速解离性(fast dissociating)多巴胺2受体拮抗剂 的4-芳基-6-哌嗪-1-基-3-取代哒嗪、这些化合物的制备方法、包含这些 化合物做为活性成分的药物组合物。所述化合物因其表现出抗精神病 效果而无运动原副作用而用作治疗或预防中枢神经系统障碍例如精神 分裂症的药物。

发明描述

精神分裂症是一种影响大约1％人口的严重的慢性心智疾病。临床 症状在一生的较早期就很显著，一般而言是在青少年期或成人期早期 发生。精神分裂症的症状通常分成被形容为阳性者，包括：幻觉、错 觉和没有条理的思考；以及被称为阴性者，包括社交退缩、递减效应、 言语贫乏和没有体验欢乐的能力。此外精神分裂症患者会患有认知不 足，如注意力和记忆力受损。该疾病来历语至今不详，但是出轨的神 经传导物质作用已经被假设藏在精神分裂症的症状下。该多巴胺引起 的假说是最常被人认为的，该假说提出多巴胺传导的过度活跃造成在 精神分裂症患者身上观察到的阳性症状。这项假说是根据多巴胺促进 药物如安非他命或古柯碱可能诱发精神病的观察，以及存在于抗精神 病药物的临床剂量与其阻断多巴胺D2受体的效力之间的关连性。所有 销售的抗精神病药物是通过阻断多巴胺D2受体来调控其对抗阳性症 状的医疗效力。除了临床效力之外，显然抗精神病药剂的主要负作用 如椎体外径综合征(EPS)和迟发性不自主运动也与多巴胺的拮抗作用相 关。使用典型的或第一代抗精神病剂(例如易宁忧[haloperidol])最常出 现这些衰弱的副作用。用非典型的或第二代抗精神病剂(例如利螺环酮 [risperidone]、欧兰札平[olanzapine])的副作用较不显著且使用克罗札平 [clazapine]时根本没有副作用，克罗札平被认为是原型的非典型抗精神 病剂。在被提出来解释使用非典型抗精神病剂观察到EPS的影响较低 的相异理论之中，在过去的十五年里引起许注意的是多重受体假说。 这项假说是在受体结合研究之后提出的，该研究显示许多非典型抗精 神病剂与多巴胺D2受体之外的各种神经传导物质受体交互作用，尤其 是与血清素5TH-2受体交互作用，然而典型的抗精神病剂像易宁忧却 比较选择性地与D2受体结合。此项理论在近年已受到挑战，因为所有 主要的非典型抗精神病剂在临床相关药剂中完全占据了血清素5TH-2 受体，但在诱发运动原副作用上却仍然相异。在做为多重受体假说的 另一种选择上，Kapur和Seeman(<是否从多巴胺D2受体上快速解离 解释了非典型抗精神病剂的作用？：一项新的假说>，《美国精神病学 期刊》，2001年，第158(3)期：第360-369页)提出非典型的抗精神病剂 可与典型的抗精神病剂通过其从多巴胺D受体2上解离的速率加以区 辨。从多巴胺D受体2上迅速解离可使抗精神病剂更能包容生理学上 的多巴胺传导，容许产生抗精神病的作用而没有运动原副作用。这项 假说在考虑克罗札平[clazapine]和奎地阿平[quetiapine]时尤其具说服 力。这两种药物具有从多巴胺D2受体解离的最快的速率并且它们携载 着于人体诱发EPS的最低风险。相反，与EPS的高普遍性相关的典型 抗精神病剂是最慢解离的多巴胺D2受体拮抗剂。因此，根据从D2受 体解离的速率来鉴认新药显然是一项提供新颖非典型抗精神病剂的正 确的策略。

如先前所陈述的，目前的非典型抗精神病剂会与许多神经传导物 质受体作用。这些作用中的某些(如阻滞血清素5-HT6和多巴胺D3受 体)可能是有利的，当认知障碍与负面的综合征被考虑时。其实，许多 临床前的数据已经显示5-HT6受体的拮抗作用在啮齿动物身上对于认 知过程具有正面的影响(Mitchell和Neumaier(2005年)<5-HT6受体： 认知促进作用的新标靶>，《药理学与治疗剂》，第108期：第320-333 页)。5-HT6拮抗作用已经与食欲和食物摄取受抑关连。而且，D3受体 的拮抗作用在大鼠会促进社交显示其对于精神分裂症患者的负面的副 作用可能具有好处(Joyce和Millan(2005年)，<多巴胺D3受体拮抗剂 作为治疗剂>，《今日药物发现》，第10期：第917-925页)。另一方面， 其它交互作用(如与肾上腺α1、组织胺H1和血清素5-HT2C受体发生 者)则与调控副作用包括高血压、镇静、代谢疾病和增重有关联。因此， 另一目标是要将迅速解离的D2受体性质与血清素5-HT6和多巴胺D3 受体在不与肾上腺α1、组织胺H1和血清素5-HT2C受体发生交互作用 下的抑制作用合并。此一蓝图被期望能提供有效对抗阳性综合征、阴 性综合征和认知缺损但具较少或不具有与目前抗精神病剂关联的主要 副作用的新化合物。

本发明的目的是要提供新化合物，所述化合物为快速解离性多巴 胺2受体拮抗剂以及血清素5-HT6和多巴胺3受体拮抗剂，具有如本 文前面所解释的有利的药理特性，尤其是降低的运动原副作用以及与 其它受体的中度或轻微作用而使得产生代谢病症的风险降低。

该目的是通过本发明式(I)的新化合物实现的：

及其立体异构体形式，其中：

R¹是氯、三氟甲基或氰基；

R²是苯基；被1、2或3个取代基取代的苯基，所述取代基分别独立地 选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟C_1-4烷基、全氟C_1-4烷氧基、二C_1-4烷基氨基、羟基和任选被1、2或3个 分别独立地选自卤素、C_1-4烷基和全氟C_1-4烷基的取代基取代的苯基； 噻吩基；被1或2个分别独立地选自卤素和C_1-4烷基的取代基取代的 噻吩基；萘基；吡啶基；吡咯基；苯并噻唑基；吲哚基；喹啉基；C_3-8环烷基；或C_5-7环烯基；

R³是氢、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基或卤素；

R⁴和R⁵分别独立地为氢或C_1-4烷基，或者R⁴和R⁵一起形成C_1-4烷二 基；

n是1或2；并且

R⁶是氢、C_1-4烷基、羟基C_2-4烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基、 吡啶基甲基或任选在苯基上被1、2或3个取代基取代的苯基甲基，所 述取代基分别独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷 基磺酰基、全氟C_1-4烷基、全氟C_1-4烷氧基和二C_1-4烷基氨基；或者

R⁵和R⁶一起形成C_2-5烷二基；

及其可药用盐或溶剂化物。

本发明化合物是快速解离性D₂受体拮抗剂。此外，本发明化合物 对于多巴胺D3和血清素5-HT6受体与对于多巴胺D2受体具有大约相 同的亲和力。目前所测试到的，本发明化合物是三种受体亚型的拮抗 剂。这种性质使得本发明化合物尤其适于用作治疗或预防以下病症的 药物：精神分裂症、精神分裂症样精神障碍、分裂情感性精神障碍、 妄想性障碍、短暂型精神病、共享型精神病、因为一般医学状况造成 的精神病、物质诱发的精神病、未专门指明的精神病、与痴呆有关的 精神病、重性抑郁症、精神抑郁症、经前期焦虑症、未专门指明的抑 郁症、双相性I精神障碍、双相性II精神障碍、循环情感性障碍、未 专门指明的双相性精神障碍、因为一般医学状况造成的情绪障碍、物 质诱导的情绪障碍、未专门指明的情绪障碍、泛化性焦虑症、强迫症、 惊恐性障碍、急性紧张症、创伤后紧张症、心智迟缓、广泛性发育障 碍、注意力不足障碍、注意力不足/多动症、破坏性行为病症、类偏执 狂性人格障碍、类精神分裂症样人格障碍、精神分裂症样人格障碍、 抽搐病症、Tourette’s综合征、物质依赖、物质滥用、物质戒断、拔毛 症；以及其中认知受损的病症；阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞 蹈病、雷维小体痴呆、因为HIV疾病造成的痴呆、因为Creutzfeldt-Jacob 病造成的痴呆；遗忘症；轻度认知障碍；与年龄相关的认知退化；以 及进食障碍例如厌食症和贪食症；以及肥胖症。

本领域技术人员可以根据本说明书下文的实验部份所提供的实验 数据来选择化合物。化合物的任何选择都包括在本发明的范围内。

本发明涉及式(I)化合物及其立体异构体形式，其中：

R¹是氯、三氟甲基或氰基；

R²是苯基；被1、2或3个取代基取代的苯基，所述取代基分别独立地 选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟C_1-4烷基、全氟C_1-4烷氧基、二C_1-4烷基氨基、羟基和被1、2或3个分别 独立地选自卤素、C_1-4烷基和全氟C_1-4烷基的取代基取代的苯基；噻吩 基；被1或2个分别独立地选自卤素和C_1-4烷基的取代基取代的噻吩 基；萘基；吡啶基；吡咯基；苯并噻唑基；吲哚基；喹啉基；C_3-8环烷 基；或C_5-7环烯基；

R³是氢、C_1-4烷基或卤素；

R⁴和R⁵分别独立地为氢或C_1-4烷基，或者R⁴和R⁵一起形成C_1-4烷二 基；

n是1或2；且

R⁶是氢、C_1-4烷基、羟基C_2-4烷基、C_3-6环烷基、C_3-6环烷基-C_1-4烷基 或在苯基上被1、2或3个取代基取代的苯基甲基，所述取代基分别独 立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟 C_1-4烷基、全氟C_1-4烷氧基和二C_1-4烷基氨基；或者R⁵和R⁶一起形成 C_2-5烷二基；

及其可药用盐或溶剂化物。

例如，本发明涉及式(I)化合物及其立体异构体形式，其中：

R¹是三氟甲基或氰基；

R²是苯基；被1、2或3个取代基取代的苯基，所述取代基分别独立地 选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟C_1-4烷基、二C_1-4烷基氨基、羟基和被1、2或3个分别独立地选自卤素、 C_1-4烷基和全氟C_1-4烷基的取代基取代的苯基；噻吩基；被1或2个分 别独立地选自卤素和C_1-4烷基的取代基取代的噻吩基；萘基；吡啶基； 吡咯基；苯并噻唑基；吲哚基；喹啉基；C_3-8环烷基；或C_5-7环烯基；

R³是氢；

R⁴和R⁵分别独立地为氢或C_1-4烷基；

n是1；

R⁶是氢、甲基、乙基、环丙基或在苯基上被1、2或3个取代基取代的 苯基甲基，所述取代基分别独立地选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷 氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟C_1-4烷基和二C_1-4烷基氨基；或者R⁵和 R⁶一起形成C_2-5烷二基；

或其可药用盐或溶剂化物。

制得特别关注的是式(I)化合物及其立体异构体形式，其中：

R¹是三氟甲基；

R²是苯基；被1、2或3个取代基取代的苯基，所述取代基分别独立地 选自卤素、氰基、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4烷基磺酰基、全氟C_1-4烷基、二C_1-4烷基氨基、羟基和被1、2或3个分别独立地选自卤素、 C_1-4烷基和全氟C_1-4烷基的取代基取代的苯基；噻吩基；被1或2个分 别独立地选自卤素和C_1-4烷基的取代基取代的噻吩基；萘基；吡啶基； 吡咯基；苯并噻唑基；吲哚基；喹啉基；C_3-8环烷基；或C_5-7环烯基；

R³是氢；

R⁴和R⁵分别独立地为氢或甲基；

n是1；

R⁶是氢、乙基或(3，5-二氟苯基)甲基；或者

R⁵和R⁶一起形成1，3-丙烷二基；

或其可药用盐或溶剂化物。

在式(I)化合物及其立体异构体形式当中，最值得关注的是例如：

4-苯基-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E1)，

6-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E2)，

6-[4-(3，5-二氟苄基)哌嗪-1-基]-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E3)，

6-(3，5-二甲基哌嗪-1-基)-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E4)，

2-(5-苯基-6-三氟甲基)-哒嗪-3-基]-八氢-吡咯并[1，2-α]吡嗪(E5)，

4-(4-氟苯基)-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E6)，

6-哌嗪-1-基-4-噻吩-3-基-3-三氟甲基-哒嗪(E7)，

6-哌嗪-1-基-4-邻甲基苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E8)，

4-(4’-氟联苯-4-基)-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E9)和

4-苯基-6-哌嗪-1-基-哒嗪-3-甲腈(E10)

及其可药用盐和溶剂化物。

在本申请中，当单独使用以及当在组合使用例如“C_1-4烷氧基”、 “全氟C_1-4烷基”、“二C_1-4烷基氨基”中使用时，术语“C_1-4烷基”包 括例如甲基、乙基、丙基、丁基、1-甲基丙基、1，1-二甲基乙基；术语 “全氟C_1-4烷基”包括例如三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基和九氟丁 基；C_3-8环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛 基；C_5-7环烯基包括环戊烯基、环己烯基和环庚烯基。术语卤素包括氟、 氯、溴和碘。

可药用盐被定义为包括式(I)化合物能形成的具有治疗学活性的无 毒酸加成盐形式。所述盐可以通过将碱形式的式(I)化合物用适当酸处 理而获得，所述适当酸是例如无机酸如氢卤酸，特别是盐酸、氢溴酸、 硫酸、硝酸和磷酸；有机酸，例如乙酸、羟基乙酸、丙酸、乳酸、丙 酮酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、扁桃酸、富马酸、苹果酸、 酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己烷氨 基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、扑酸和扁桃酸。

溶剂化物是指式(I)化合物可形成的水合物或醇化物。

本说明书上文所使用的术语“立体化学异构体形式”定义为式(I)所 可具有的所有可能的异构体形式。除非另外提出或指明，化合物的化 学名称指所有可能的立体化学异构体形式的混合物，所述混合物包含 所有基本分子结构的非对映体和对映体。更尤其是，立体构成中心可 具有R-或S-构型；二价环状(部分)饱和基团上的取代基可具有顺式-或 者反式-构型。包括双键的化合物可在该双键上具有E-或Z-立体化学。 式(I)化合物的立体化学异构体形式包括在本发明范围内。

如下文所述方法制备的式(I)化合物可以以对映体之外消旋混合物 形式合成，再依据本领域已知的拆分方法彼此分离。式(I)之外消旋化 合物可通过用适当手性酸处理，转化为相应的非对映异构体盐形式。 接着，将该非对映异构体盐形式，例如，通过选择或分级结晶法分离， 并且通过碱使其释放出对映体。分离式(I)化合物的对映体形式的替代 方法包括使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构体形式 也可衍生自相应的纯立体化学异构体形式的适当原料，只要反应以立 体专一性进行即可。优选地，如果需要专一性立体异构体，则可通过 立体专一性制备方法合成所述化合物。这些方法是有利地使用对映体 纯的原料。

药理学

为了发现具有抗阳性和阴性综合征和认知障碍的活性且具有改进 的安全特性(低EPS发病率和无代谢病症)的抗精神病化合物，我们筛选 了与多巴胺D2受体选择性作用并且快速从此受体解离而且还对多巴 胺D3受体和血清素5-HT-6受体具有亲和力的化合物。首先在结合测 定中使用[³H]螺环哌啶酮(spiperone)和人D2L受体细胞膜来筛选化合物 的D2亲和力。显示IC₅₀小于10μM的化合物在修饰自Josee E.Leysen and Walter Gommeren，Journal of Receptor Research，1984，4(7)，817-845 出版的方法之间接测定中进行测试来评估其解离速率。

将化合物进一步在具有大于50种常见G-蛋白偶联受体(CEREP)的 组(panel)中进行筛选，发现具有干净的特性，也就是对于除了多巴胺 D3受体和血清素5-HT6受体之外的被测试受体具有低亲和力。

已经进一步在体内模型如“在大鼠中对阿朴吗啡诱导的扰动试验 的拮抗作用(Antagonism of apomorphine induced agitation test in rats)”中 测试了某些化合物，并且发现其具有口服活性和生物利用性。

进一步在‘大鼠中亚慢性PCP诱导的注意力模式转移的逆转 (Reversal of subchronic PCP-induced attentional set shifting in rats)’测试 (J.S.Rodefer等人，Neurospychopharmacology(2007)，1-10)中发现了化 合物E1具有活性。

鉴于上述式(I)化合物的药理学性质，其适于用作药物，特别是用 作抗精神病的药物。更尤其是，本发明化合物适于用作治疗或预防以 下病症的药物：精神分裂症、精神分裂症样精神障碍、分裂情感性精 神障碍、妄想性障碍、短暂型精神病、共享型精神病、因为一般医学 状况造成的精神病、物质诱发的精神病、未专门指明的精神病、与痴 呆有关的精神病、重性抑郁症、精神抑郁症、经前期焦虑症、未专门 指明的抑郁症、双相性I精神障碍、双相性II精神障碍、循环情感性 障碍、未专门指明的双相性精神障碍、因为一般医学状况造成的情绪 障碍、物质诱导的情绪障碍、未专门指明的情绪障碍、泛化性焦虑症、 强迫症、惊恐性障碍、急性紧张症、创伤后紧张症、心智迟缓、广泛 性发育障碍、注意力不足障碍、注意力不足/多动症、破坏性行为病症、 类偏执狂性人格障碍、类精神分裂症样人格障碍、精神分裂症样人格 障碍、抽搐病症、Tourette’s综合征、物质依赖、物质滥用、物质戒断、 拔毛症。由于其5-HT6拮抗活性，本发明化合物还可用于治疗或预防 以及其中认知受损的病症；阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、 雷维小体痴呆、因为HIV疾病造成的痴呆、因为Creutzfeldt-Jacob病 造成的痴呆；遗忘症；轻度认知障碍；以及与年龄相关的认知退化。

为了使患有如前一段落所提到的病症的患者的治疗达到最佳，式(I) 化合物可与其它抗精神病化合物一起施用。因此，在精神分裂症的情 形中，可以将阴性和认知综合征作为标靶。

本发明还提供了治疗患有这样的病症的温血动物的方法，所述方 法包括全身施用有效治疗所述病症的治疗量的式(I)化合物。

本发明还涉及如上所定义的式(I)化合物在制备药物，特别是抗精 神病药物，更尤其是用于治疗或预防以下病症的药物中的应用：精神 分裂症、精神分裂症样精神障碍、分裂情感性精神障碍、妄想性障碍、 短暂型精神病、共享型精神病、因为一般医学状况造成的精神病、物 质诱发的精神病、未专门指明的精神病、与痴呆有关的精神病、重性 抑郁症、精神抑郁症、经前期焦虑症、未专门指明的抑郁症、双相性I 精神障碍、双相性II精神障碍、循环情感性障碍、未专门指明的双相 性精神障碍、因为一般医学状况造成的情绪障碍、物质诱导的情绪障 碍、未专门指明的情绪障碍、泛化性焦虑症、强迫症、惊恐性障碍、 急性紧张症、创伤后紧张症、心智迟缓、广泛性发育障碍、注意力不 足障碍、注意力不足/多动症、破坏性行为病症、类偏执狂性人格障碍、 类精神分裂症样人格障碍、精神分裂症样人格障碍、抽搐病症、 Tourette’s综合征、物质依赖、物质滥用、物质戒断、拔毛症；和其中 认知受损的病症；阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿舞蹈病、雷维小 体痴呆、因为HIV疾病造成的痴呆、因为Creutzfeldt-Jacob病造成的 痴呆；遗忘症；轻度认知障碍；以及与年龄相关的认知退化。

治疗这样的疾病的本领域技术人员可以从下文提供的结果决定每 日有效治疗量。每日有效治疗量可以为约0.01mg/kg至约10mg/kg体重， 更优选约0.05mg/kg至约1mg/kg体重。

本发明还涉及药物组合物，其包含可药用载体以及作为活性成分 的治疗有效量的式(I)化合物。

为了容易施用，本发明化合物可被配制成施用用途的各种医药形 式。本发明化合物，尤其是式(I)化合物，其可药用的酸或碱添加盐、 一种立体异构体的形式、其N-氧化物的形式和其药物前身或是其任何 亚群或组合物可被配制成各种施用用途的医药形式。作为适当的组合 物，我们可引用所有常被采用以供全身施用药物的组合物。为了制备 本发明的药物组合物，有效量的做为活性成分的某化合物，任选呈添 加盐的形式与一种可药用的载体以充分混合的方式合并，该载体视希 望用于施用的制备物形式而定可采广泛种的形式。这些药物组合物较 好是以单位药剂的形式，尤其是适用在口服、直肠、经皮、或非经肠 的注射或吸入者。例如，在制备呈口服形式的组合物时，任何常用的 医药介质均可被采用，例如水、二醇、油、醇及类似者于口服液体制 备物如悬浮液、糖浆、酏剂、乳化物或溶液中；或固体载体如淀粉、 糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、结合剂、分散剂及类似者在粉末、药 丸、胶囊和片剂的情形中。因为易于施用，片剂和胶囊代表最有利的 口服单位药剂形式，其中显然采用固体的医药载体。对于非经肠的组 合物，该载体通常包括消毒过的水，至少是大部分，虽然举例而言有 其它帮助溶解的的成分可能包括在内。例如可制备可注射的溶液，其 中的载体包含盐水溶液、葡萄糖溶或盐水和葡萄糖溶液的混合物。含 有式(I)化合物的可注射溶液可配制在油中以便长期间作用。用于此目 的的适当的油是例如花生油、芝麻油、棉籽油、玉米油、黄豆油、长 链脂肪酸的合成甘油、以及这些和其它油的混合物。还可制备可注射 的悬浮液，其中可采用适当的液体载体、悬浮剂及类似者。同样包含 的是固体形式的制备物，特意使其在使用前短暂的时间里被转换成液 体形式的制备物。在适用于经皮施用的组合物中，该载体任选包含一 种促进穿透的用剂和/或适当的湿润剂，任选与占少部分的具有任何性 质的适当添加物合并，该添加物不会对皮肤导入显著有破坏性的作用。 该添加物可协助施入到皮肤和/或可有助于制备所希望的组合物。这些 组合物可以用各种方式施用，例如穿透皮的贴布、圆点贴布、药膏。 式(I)化合物的酸或碱添加盐因其比相应的碱或酸形式增进的水溶性， 所以更适用于制备水溶液的组合物。

尤其有利的是将先前提到的药物组合物配制成便于施用和药剂均 一的单位剂型。本说明书所使用的单位剂型是指适用于单位药剂的物 理上分开的单位，每一单位含有预先决定量的经计算过的活性成分以 和所需的医药载体联结产生所希望的医疗效果。此种单位剂型的实例 是片剂，(包括截痕或经包覆的片剂)、胶囊、药丸、粉末药包、威化剂、 塞剂、可注射溶液或悬浮液及类似者，及其分隔开的复数药剂。

因为本发明化合物是有效的口服可施用化合物，因此用于口服施 用的包含该化合物的药物组合物尤其有利。

为了促进式(I)化合物在药物组合物中的溶解度和/或稳定性，我们 可以有利的采用α-、β-或γ-环糊精或其衍生物，尤其是羟烷基取代的 环糊精，例如2-羟丙基-β-环糊精。而且辅助溶剂例如醇可以促进根据 本发明的化合物在药物组合物中的溶解度和/或稳定性。

制备

其中R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、R⁴、R⁵、R⁶和n如上所定义 的式(I)化合物可这样制得：将式(II)化合物

其中R¹是氯或三氟甲基，且R²和R³如上所定义，

与式(III)化合物反应

其中R⁴、R⁵、R⁶和n如上所定义，

所述反应在适当的碱例如二异丙基乙胺存在下，在适当的溶剂例如乙腈中 且在适当的反应条件例如适宜的温度下通过传统加热法或在微波照射下 一段时间进行以确保反应完全。

其中R¹是氯，且R²和R³如上所定义的式(II)化合物可通过类似于 WO-2005/013907中描述的方法制备。

其中R¹是三氟甲基，且R²和R³如上所定义的式(II)化合物可这样 制得：将式(IV)的化合物

其中R¹是三氟甲基，且R²和R³如上所定义

与三氯氧化磷反应，所述反应在适当的溶剂例如乙腈中，在适当的反 应条件例如适宜的温度下通过传统加热法或在微波照射下一段时间以 确保反应完全来进行。

其中R¹是三氟甲基，且R²和R³如上所定义的式(IV)化合物可这 样制得：将式(V)的化合物

其中R¹是三氟甲基，且R²和R³如上所定义

与肼水合物反应，所述反应在适当的催化剂例如乙酸存在下，于适当 溶剂例如乙腈中，在适当的反应条件例如适宜的温度下通过传统加热 法或在微波照射下一段时间以确保反应完全来进行。

其中R¹是三氟甲基，且R²和R³如上所定义的式(V)化合物可这样 制得：将式(VI)化合物

其中R²和R³如上所定义，

与CF₃SiMe₃(VII)在适当的催化剂例如氟化铯存在下，在合适的溶剂例 如乙腈中，在适当的反应条件例如低温(典型上于-78℃至0℃)来进行。

其中R²和R³如上所定义的式(VI)化合物可以商购获得或者通过类 似于在Dean，W.D.；Bum，D.M.J.Org.Chem.1993，58，7916-7917中描 述的方法制备。

式(I-a)化合物

其中R⁶’和R⁶如上所定义但不是氢，R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、 R⁴、R⁵和n如上所定义，

可这样制得：将式(I-b)化合物

其中R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，

与R⁶’-W的试剂反应，其中R⁶’是如上所定义的R⁶但不是氢，且W代 表离去基团例如氯、溴或碘或磺酰氧基例如甲磺酰氧基、三氟甲磺酰 氧基或甲基苯基磺酰氧基，所述反应在碱例如二异丙基乙胺存在下， 在合适的溶剂例如乙腈中，在适当的反应条件例如适宜的温度下通过 传统加热法或在微波照射下一段时间以确保反应完全来进行。

或者，其中R⁶’和R⁶如上所定义但不是氢，R¹是氯或三氟甲基， 且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义的式(I-a)的化合物还可以这样制得： 由其中R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义的式(I-b) 化合物，通过用适当的酮或醛在适当还原剂如三乙酰氧基硼氢化钠存 在下，于适当的溶剂例如四氢呋喃中进行还原性N-烷基化。

其中R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义的式 (I-b)化合物可这样制得：将式(VIII)中间体

其中L代表适当的保护基例如叔丁氧基羰基，R¹是氯或三氟甲基，且 R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，

中的保护基在适当条件例如当L代表叔丁氧基羰基时于二氯甲烷中的 三氟乙酸或在甲醇中的15离子交换树脂(酸的形式)脱保护。

其中R¹是氯或三氟甲基，且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义的式 (VIII)化合物可这样制得：将其中R¹是氯或三氟甲基，且R²和R³如上 所定义的式(II)化合物与式(IX)化合物反应

其中L代表适当的保护基，如叔丁氧基羰基，且R⁴、R⁵和n如上所定 义，所述反应在适当的碱例如二异丙基乙胺存在下，在适当的溶剂例 如乙腈中，在适当的反应条件例如适宜的温度下通过传统加热法或在 微波照射下一段时间以确保反应完全来进行。

其中R¹是三氟甲基，R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表 适当的保护基例如叔丁氧基羰基的式(VIII)化合物还可这样制得：将式 (X)化合物

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当的保 护基例如叔丁氧基羰基，

与相应的芳基硼酸R₂-B(OH)₂在适当催化剂例如1，1’-双(二苯基膦基) 二茂铁钯(II)二氯化物，二氯甲烷于适当的配体例如1，1’-双(二苯基膦基) 二茂铁和碱例如磷酸钾存在下，在适当的惰性溶剂例如二氧杂环己烷 中于高温下反应。

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当 的保护基例如叔丁氧基羰基的式(X)化合物可这样制得：将式(XI)化合 物

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当的保 护基例如叔丁氧基羰基，

与碘在适当的碱例如丁基锂和2，2，6，6-四甲基哌啶的混合物存在下，于 合适的惰性溶剂例如四氢呋喃中，在低温，典型地是-78℃至0℃温度 下反应。

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当 保护基例如叔丁氧基羰基的式(XI)化合物可这样制得：将6-氯-3-三氟 甲基哒嗪(按照Goodman，A.J.；Stanforth，S.P；Tarbit B.Tetrahedron 1999， 55，15067-15070中描述的方法制备的)与1-哌嗪甲酸叔丁酯在适当的碱 例如二异丙基乙胺存在下，在适当的溶剂例如乙腈中，在适当的反应 条件例如适宜的温度下通过传统加热法或在微波照射下一段时间以确 保反应完全来进行反应。

其中R⁶’是如上所定义的R⁶但不是氢，R¹是三氟甲基，且R³、R⁴、 R⁵、R⁷和n如上所定义的式(I-c)化合物

可这样制得：将式(I-d)化合物

其中R¹是三氟甲基，且R³、R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义，

与式R⁶’-W的试剂反应，其中R⁶’是如上所定义的R⁶但不是氢，且W 代表离去基团如卤素例如氯、溴或碘或磺酰氧基例如甲磺酰氧基、三 氟甲磺酰氧基或甲基苯基磺酰氧基，所述反应在碱例如二异丙基乙胺 存在下，在适当的溶剂例如乙腈中，在适当的反应条件例如适宜的温 度下通过传统加热法或在微波照射下一段时间以确保反应完全来进 行。

或者，其中R⁶’是如上所定义的R⁶但不是氢，R¹是三氟甲基，R³、 R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义的式(I-c)化合物可以由其中R¹是三氟甲基， R³、R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义的式(I-d)化合物，通过在合适的溶剂 例如四氢呋喃中，在合适的还原剂例如三乙酰氧基硼氢化钠存在下， 用合适的酮或醛进行还原N-烷基化而制得。

其中R¹是三氟甲基，且R³、R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义的式(I-d) 化合物可这样制得：将式(XII)中间体：

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义，且L代表适当 的保护基例如叔丁氧基羰基，

中的保护基在适当条件例如当L代表叔丁氧基羰基时于二氯甲烷中的 三氟乙酸或在甲醇中的15离子交换树脂(酸的形式)脱保护。

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵、R⁷和n如上所定义，且L代表 适当的保护基例如叔丁氧基羰基的式(XII)化合物可这样制得：将式 (XIII)化合物

其中R¹是三氟甲基，R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当的保 护基例如叔丁氧基羰基，

与相应的芳基硼酸反应，所述反应在适当的催化剂如反式 -Pd(OAc)₂(Cy₂NH)₂(按照Tao，B.；Boykin，D.W.Tetrahedron Lett.2003， 44，7993-7996中描述的方法制备的)存在下，于适当的碱例如磷酸钾存 在下，在适当的惰性溶剂例如二氧杂环己烷中，在适当的反应条件例 如适宜的温度下通过传统的加热法或在微波照射下一段时间以确保反 应完全来进行。

其中R¹是氰基，R⁶如上所定义但不是氢，R²、R³、R⁴、R⁵和n如 上所定义的式(I)化合物可这样制得：将式(I-e)化合物

其中R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，

与R⁶’-W的试剂反应，其中R⁶’是如上所定义的R⁶但不是氢，且W代 表离去基团如卤素例如氯、溴或碘或磺酰氧基例如甲磺酰氧基、三氟 甲磺酰氧基或甲基苯基磺酰氧基，所述反应在碱例如二异丙基乙胺存 在下，在适当的反应条件例如适宜的温度下通过传统加热法或在微波 照射下一段时间以确保反应完全来进行。

或者，其中R¹是氰基，R⁶’是R⁶但不是氢，R²、R³、R⁴、R⁵和n 如上所定义的式(I)化合物可这样制得：将其中R¹是氰基，R⁶’是氢，且 R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义的式(I-e)化合物在适当的还原剂存在 下于适当的溶剂中用适当的酮或醛进行还原N-烷基化。

其中R¹是氰基，R⁶如上所定义，且R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所 定义的式(I)化合物可这样制得：将式(XIV)中间体

其中R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当的保护基例如叔 丁氧基羰基，

中的保护基在适当条件例如当L代表叔丁氧基羰基时于二氯甲烷中的 三氟乙酸或在甲醇中的15离子交换树脂(酸的形式)脱保护。

其中R²、R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当的保护基例 如叔丁氧基羰基的式(XIV)化合物是这样制得的：将其中R¹是氯，R²、 R³、R⁴、R⁵和n如上所定义，且L代表适当保护基例如叔丁氧基羰基 的式(VIII)化合物与氰化锌在适当催化剂如四(三苯基膦)钯(0)存在下， 在适当溶剂例如N，N-二甲基甲酰胺中，在适当的反应条件例如适宜的 温度下通过传统加热法或在微波照射下一段时间以确保反应完全来进 行反应。

实验部分

化学

微波促进的反应是在单一操作方式的反应器：EmrysTM Optimizer 微波炉反应器(Personal Chemistry A.B.公司出品，线在名为Biotage公 司)中进行的。

实施例(E1-E39)的最终纯化是通过柱色谱法在硅胶上利用所说明 的洗脱剂或通过逆向制备用HPLC在Hyperprep RP18 BDS(Shandon公 司出品)(8μm，200mm，250g)柱上进行的。三种流动相(流动相A：90％ 0.5％乙酸铵+10％乙腈；流动相B：甲醇；流动相C：乙腈)被用于进行 梯度洗脱，从75％A和25％B开始，以40ml/分钟的流速，在同样的条 件下停留0.5分钟，接着在0.01分钟内增加流速至80ml/分钟，在41 分钟内至50％B和50％C，在20分钟内至100％C并且保持这些条件经 4分钟。

¹H光谱是在Bruker DPX 360、DPX 400或Bruker AV-500分光光度 计上记录的。化学位移是以相对于四甲基硅烷的ppm来表示

熔点测定是在Mettler FP62装置上进行的。

LCMS

一般LCMS方法A：

HPLC测量是利用得自Agilent Technologies公司的HP1100进行 的，该装置包含一个具有除气机的四级泵、自动取样机、柱高温箱(设 定在40℃除了方法4是将温度设定在60℃)、一个二极管数组检测器 (DAD)和一支如以下相关方法中指明的柱。从该柱流出者分流到一台 MS检测器。该MS检测器经组装而具有一个电子喷雾的离子化作用来 源。用氮作为喷雾气体。将来源温度维持在140℃。用 MassLynx-Openlynx软件进行数据的获取。

一般LCMS方法B：

HPLC测量是利用Agilent1100模块进行的，该装置包含泵、一个 二极管数组检测器(DAD)(使用220nm的波长)和柱加热器与如以下相 关方法中指明的柱。从该柱流出者分流到Agilent MSD系列的G1946C 和G1956A。该MS检测器经组装而具有API-ES(大气压力电子喷雾离 子化作用)。质谱是通过从100扫描到1000获得的。毛细针头电压对阳 离子化模式是2500V而对阴离子化模式是3000V。片段化电压是50V。 烘干气体以10l/分钟的流速保持在350℃的温度。

LCMS方法1

除了一般的LCMS方法A之外：在购自Advanced Chromatography Technologies公司的ACE-C18柱(3.0μm，4.6×30mm)上以1.5ml/分钟的 流速进行反相HPLC。所使用的梯度条件是：于6.5分钟内从 80％A(0.5g/l乙酸铵溶液)、10％B(乙腈)、10％C(甲醇)到50％B和50％C， 在7分钟时达到100％B，且在7.5分钟时平衡至最初条件直到9分钟 时。注射体积是5μl。高分辨率质谱(Time of Flight，TOF)仅在阳离子 化模式取得，在0.5秒钟内从100扫描至750，使用0.1秒的最大时间 间隔。毛细针头电压对阳离子化模式是2.5kV而锥尖电压是20V。亮 氨酸-脑啡肽是标准物质，用于锁定质量的校准。

LCMS方法2

除了一般的LCMS方法A之外：在购自Advanced Chromatography Technologies公司的ACE-C18柱(3.0μm，4.6×30mm)上以1.5ml/分钟的 流速进行反相HPLC。所使用的梯度条件是：于6.5分钟内从 80％A(0.5g/l乙酸铵溶液)、10％B(乙腈)、10％C(甲醇)到50％B和50％C， 在7分钟时达到100％B，且在7.5分钟时平衡至最初条件直到9分钟 时。注射体积是5μl。高分辨率的质谱(Time of Flight，TOF)在0.5秒钟 内从100扫描至750，使用0.3秒的最大时间间隔。毛细针头电压对阳 离子化模式是2.5kV而对阴离子化模式是2.9kV。对于阳离子化模式和 阴离子化模式而言锥尖电压均为20V。亮氨酸-脑啡肽是标准物质，用 于锁定质量的校准。

LCMS方法3

与LCMS方法1相同但使用10μl的注射体积。

LCMS方法4

除了一般的LCMS方法A之外：在购自Agilent公司的XDB-C18 柱(1.8μm，2.1×30mm)上以1ml/分钟的流速进行反相HPLC。所使用的 梯度条件是：于6.5分钟内从90％A(0.5g/l乙酸铵溶液)、5％B(乙腈)、 5％C(甲醇)到50％B和50％C，在7分钟时达到100％B，且在7.5分钟 时平衡至最初条件直到9.0分钟时。注射体积是2μl。高分辨率的质谱 (Time of Flight，TOF)仅在阳离子化模式取得，在0.5秒钟内从100扫 描至750，使用0.1秒的最大时间间隔。毛细针头电压对阳离子化模式 是2.5kV而锥尖电压是20V。亮氨酸-脑啡肽是标准物质，用于锁定质 量的校准。

LCMS方法5

除了一般的LCMS方法A之外：在购自Advanced Chromatography Technologies公司的ACE-C18柱(3.0μm，4.6×30mm)上以1.5ml/分钟的 流速进行反相HPLC。所使用的梯度条件是：于6.5分钟内从80％A(1g/l 碳酸氢铵溶液)、10％B(乙腈)、10％C(甲醇)到50％B和50％C，在7分 钟时达到100％B，且在7.5分钟时平衡至最初条件直到9分钟时。注 射体积是5μl。高分辨率的质谱(Time of Flight，TOF)仅在阳离子化模 式取得，在0.5秒钟内从100扫描至750，使用0.1秒的最大时间间隔。 毛细针头电压对阳离子化模式是2.5kV而锥尖电压是20V。亮氨酸-脑 啡肽是标准物质，用于锁定质量的校准。

LCMS方法6

除了一般的LCMS方法B之外：在YMC-Pack ODS-AQ柱上(50×2.0 mm，5μm)以0.8ml/分钟的流速进行反相HPLC。使用两种流动相(流动 相A：含0.1％TFA的水；流动相B：含0.05％TFA的乙腈)。首先，使 100％A维持1分钟。然后施以梯度使其于4分钟内达到40％A和60％B 并且维持2.5分钟。使用典型的注射体积是2μl。高温箱的温度是 50℃(MS极性：阳极)。

LCMS方法7

除了一般的LCMS方法B之外：在YMC-Pack ODS-AQ柱上(50×2.0 mm，5μm)以0.8ml/分钟的流速进行反相HPLC。使用两种流动相(流动 相A：含0.1％TFA的水；流动相B：含0.05％TFA的乙腈)。首先，使 90％A和10％B维持0.8分钟。然后施以梯度使其于3.7分钟内达到 20％A和80％B并且维持3分钟。使用典型的注射体积是2μl。高温箱 的温度是50℃(MS极性：阳极)。

说明D1

5，5，5-三氟-4-氧代-3-苯基-2-戊-2-烯酸(D1)

在0℃(冰/水/氯化钠浴，浴温度-10℃)向苯基马来酸酐(18.7g，0.107 mol)在乙腈(180ml)内的搅拌着的溶液中加入CsF(18.6g，0.127mol)， 接着在氮气下滴加CF₃SiMe₃(18.58ml，0.127mol)。将反应混合物搅拌 一小时，然后用乙醚稀释并且用2M氢氧化钠(200ml)萃取。通过添加 浓盐酸将分离出的水层酸化成pH＝1。将混合物用二氯甲烷萃取。使分 离出的有机层干燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在真空中蒸发产生D1(22.6g， 86％)，为异构体混合物(用LCMS测得80/11的比率)。C₁₁H₇F₃O₃计算 值244；实测值243(M-H^-)。

说明D2

5-苯基-6-三氟甲基-2H-哒嗪-3-酮(D2)

向5，5，5-三氟-4-氧代-3-苯基-2-戊-2-烯酸(D1)(22.6g，0.084mol)在 乙腈(15ml)和乙酸(15ml)混合物的搅拌着的溶液添加肼水合物(7.75ml， 0.148mol)。将反应混合物回流加热16小时，冷却至室温，用二氯甲烷 稀释然后用0.5M盐酸(150ml)萃取。使分离出的有机层干燥(Na₂SO₄)， 并且将溶剂在真空中蒸发产生D2(20.7g，100％)，为异构体的混合物(用 LCMS测得75/5的比率)。C₁₁H₇F₃N₂O计算值240；实测值239(M-H^-)。

说明D3

6-氯-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(D3)

向5-苯基-6-三氟甲基-2H-哒嗪-3-酮(D2)(20.66g，0.086mol)在乙腈 (150ml)内的搅拌着的溶液添加三氯氧化磷(20ml，0.215mmol)并将反应 混合物回流加热1小时。在此期间后，将反应混合物倒入饱和碳酸氢 纳的饱和溶液、冰和二氯甲烷中。然后添加更多固体的碳酸氢钠直到 气体停止产生。然后将有机层分离出、干燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在真 空中蒸发。然后将粗制的残余物经由硅胶过滤，用二氯甲烷洗脱以除 去占小部份的异构体。将溶剂蒸发之后，用柱色谱法将粗制的产物再 纯化(硅胶；0-25％乙酸乙酯/庚烷)以产生D3(7.1g，32％)。C₁₁H₆ClF₃N₂计算值258；实测值259(MH⁺)。

说明D4

4-(5-苯基-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D4)

向6-氯-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(D3)(7.1g，0.0274mol)和N-Boc- 哌嗪(5.62g，0.0302mol)在乙腈(150ml)内的搅拌着的溶液添加二异丙基 乙胺(5.1ml，0.0302mol)并将混合物在150℃在微波照射下加热20分 钟。在此期间以后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并且用水萃取。将 有机层分离出、干燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在真空中蒸发。然后用柱色 谱法将粗制的产物纯化(硅胶；20％乙酸乙酯在庚烷中，接着用10％乙 酸乙酯在二氯甲烷中)。将溶剂蒸发之后，将粗制产物从庚烷中结晶出 来产生D4(10.4g，93％)。C₂₀H₂₃F₃N₄O₂计算值408；实测值409(MH⁺)。

说明D5

5，5，5-三氟-3-(4-氟-苯基)-4-氧代-戊-2-烯酸(D5)

向0℃(冰/水/氯化钠浴，浴温度-10℃)的4-氟苯基马来酸酐(1.42g， 7.39mmol)(通过Dean，W.D.：Bum，D.M.，《有机化学杂志》，1993年， 第58期，第7916-7917页相似的方法制备)在乙腈(15ml)内的搅拌着的 溶液添加CsF(1.1g，7.39mol)，接着在氮气下滴加CF₃SiMe₃(18.58ml， 0.127mol)。将反应混合物搅拌一小时，然后用乙醚稀释并且用2M氢 氧化钠(200ml)萃取。通过添加浓盐酸将分离出的水层酸化成pH＝1。将 混合物用二氯甲烷萃取并且移除有机层，干燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在 真空中蒸发产生D5(1.4g，72％)，为异构体的混合物。C₁₁H₆F₄O₃计算 值262；实测值261(M-H^-)。

说明D6

5-(4-氟苯基)-6-三氟甲基-2H-哒嗪-3-酮(D6)

向5，5，5-三氟-3-(4-氟苯基)-4-氧代-戊-2-烯酸(D5)(1.4g，5.3mmol) 在乙醇(10ml)和乙酸(1ml)混合物的搅拌着的溶液添加肼水合物 (0.49ml，9.33mmol)。将反应混合物回流加热16小时，冷却至室温， 用二氯甲烷稀释然后用0.5M盐酸(150ml)萃取。使分离出的有机层干燥 (Na₂SO₄)，并且将溶剂在真空中蒸发产生D6(0.96g，70％)，为异构体 的混合物。C₁₁H₆F₄N₂O计算值258；实测值259(MH⁺)。

说明D7

6-氯-4-(4-氟苯基)-3-三氟甲基-哒嗪(D7)

向5-(4-氟苯基)-6-三氟甲基-2H-哒嗪-3-酮(D6)(0.96g，3.7mmol)在 乙腈(10ml)内的搅拌着的溶液添加三氯氧化磷(0.866ml，9.3mmol)并将 反应混合物在180℃回流加热30分钟。在此期间之后，将反应混合物 倒入碳酸氢纳的饱和溶液、冰和二氯甲烷中。然后添加更多固体的碳 酸氢钠直到气体停止产生。然后将有机层分离出、干燥(Na₂SO₄)，并且 将溶剂在真空中蒸发产生D7(0.81g，79％)。在回收之后仅有微量不希 望的异构体被检测到。C₁₁H₅ClF₄N₂计算值276；实测值277(MH⁺)。

说明D8

4-[5-(4-氟苯基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D8)

向6-氯-4-(4-氟苯基)-3-三氟甲基-哒嗪(D7)(0.81g，2.93mmol)和 N-Boc-哌嗪(0.818g，4.39mmol)在乙腈(10ml)内的搅拌着的溶液添加二 异丙基乙胺(1ml，5.9mmol)并将混合物在80℃在微波照射下加热20 分钟。在此期间以后，将反应混合物用二氯甲烷稀释并且用水萃取。 将有机层分离出、干燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在真空中蒸发产生 D8(1.27g，62％)。C₂₀H₂₂F₄N₄O₂计算值426；实测值427(MH⁺)。

说明D9

4-(6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D9)

向6-氯-3-三氟甲基-哒嗪(0.666g，5.09mmol)(依照Goodman A.J.； Stanforth，S.P.；Tarbit B《四面体》，1999年，第55期，第15067-15070 页中描述的方法制备)、N-Boc-哌嗪(1.138g，6.11mmol)、和二异丙基 乙胺(1.95ml，1.12mmol)在乙腈(10ml)的混合物在180℃在微波照射下 加热30分钟。将溶剂在真空中蒸发并且用柱色谱法将残余物纯化(硅 胶；己烷/乙酸乙酯)产生成微黄色固体的D9(1.67g，99％)。C₁₄H₁₉F₃N₄O₂计算值332；实测值333(MH⁺)。

说明D10

4-(5-碘-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D10)

向0℃丁基锂(2.5M溶于己烷)(6.31ml，15.79mmol)在四氢呋喃的 混合物(125ml)添加2，2，6，6-四甲基哌啶(3.808ml，22.56mmol)。然后在 室温下将反应混合物搅拌1小时。将反应混合物冷却至-78℃然后添加 4-(6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D9)(2.5g，7.52mmol)在 四氢呋喃(20ml)的溶液。在-78℃将混合物搅拌1小时然后用10％乙酸 溶于四氢呋喃的溶液予以稀释。然后使混合物达到室温而后在真空中 将溶剂蒸发掉。用二氯甲烷稀释残余物并且用水萃取。把有机层分离 出、干燥(MgSO₄)、过滤并在真空中将溶剂蒸发掉。使残余物从乙醚中 沉淀产生D10(2.81g，82％)，为微黄色固体。C₁₄H₁₈F₃IN₄O₂计算值458； 实测值459(MH⁺)。

说明D11

4-[5-(2-甲基苯基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D11)

将4-(5-碘-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D10)(0.20g， 0.436mmol)、邻-甲苯基硼酸(0.071g，0.523mmol)、1，1’-双(二苯基膦 基)二茂铁钯(II)的二氯化物，二氯甲烷(0.022g，0.026mmol)、1，1’-双(二 苯基膦基)二茂铁(0.015g，0.026mmol)和磷酸钾(0.138g，0.654mmol) 在二氧杂环己烷(8.5ml)中的混合物在80℃搅拌16小时然后在110℃ 搅拌两天。然后将混合物通过一个硅藻土层块过滤并使溶剂在真空中 蒸发掉。用柱色谱法纯化残余物(硅胶；二氯甲烷/甲醇70/30)产生 D11(0.089g，48％)，为黄色固体。C₂₁H₂₅F₃N₄O₂计算值422；实测值 423(MH⁺)。

说明D12

4-[5-(4’-氟-联苯-4-基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D12)

将4-[5-(4-溴苯基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (0.2g，0.41mmol)(通过相似D8说明的方法制备)、4-氟苯硼酸(0.069g， 0.49mmol)、依照Tao，B，；Boykin，D.W.，《四面体通信》，2003年， 第44期，第7993-7996页的方法所制备的反式 -Pd(OAc)₂(Cy₂NH)₂(0.015g，0.026mmol)和磷酸钾(0.261g，1.23mmol) 在二氧杂环己烷中的混合物在80℃搅拌至隔夜。然后用二氯甲烷稀释 反应混合物并且用饱和的碳酸钠溶液进行萃取。把有机层分离出、干 燥(Na₂SO₄)，并且将溶剂在真空中蒸发。然后用柱色谱法(硅胶；二氯 甲烷/庚烷3∶7到10∶0)纯化残余物。将所需的级份收集物收集起来并且 在真空中蒸发产生D12(0.115g，56％)。C₂₆H₂₆F₄N₄O₂计算值502；实测 值503(MH⁺)。

说明D13

4-(6-氯-5-苯基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D13)

将依照WO-2005/013907中描述的方法制备的3，6-二氯-4-苯基-哒 嗪(0.41g，1.82mmol)、N-Boc-哌嗪(0.509g，2.73mmol)和二异丙基乙 胺(0.634ml，3.64mmol)在乙腈(7.5ml)中的混合物在180℃微波照射下 搅拌40分钟，然后另外搅拌30分。在此期间之后，添加额外量的二 异丙基乙胺(0.1ml，0.57mmol)和N-Boc-哌嗪(0.1g，0.54mmol)并且将 所得到的混合物在180℃搅拌40分钟。将溶剂在真空中蒸发掉，然后 添加二氯甲烷和饱和的氯化铵水溶液。将有机层分离，干燥(Na₂SO₄)， 过滤并将溶剂在真空中蒸发掉。然后将残余物用柱色谱法(硅胶；二氯 甲烷和庚烷/乙酸乙酯8∶2到7∶3)纯化。将所需的级份收集物收集起来 并且在真空中蒸发产生D13(0.137g，20％)，为白色固体。C₁₉H₂₃ClN₄O₂计算值374；实测值375(MH⁺)。

说明D14

4-(6-氰基-5-苯基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D14)

向氰化锌(0.077g，0.66mmol)和四(三苯基膦)钯(0)(0.1g，0.09mmol) 的混合物添加4-(6-氯-5-苯基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (D13)(0.137g，0.36mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(3.5ml)的溶液。将所得 到的混合物在160℃微波照射下搅拌30分钟。将溶剂在真空中蒸发产 生D14(0.133g，定量)。C₂₀H₂₃N₅O₂计算值365；实测值366(MH⁺)。

说明D15

4-[5-(氯-噻吩-2-基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D15)

将4-(5-碘-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D10)(0.20g， 0.436mmol)、5-氯噻吩-2-(0.082g，0.51mmol)、四(三苯基膦)钯 (0)(0.024g，0.021mmol)和碳酸钠(0.103g，0.96mmol)在二甲氧基乙烷 (3ml)和水(0.75ml)的混合物在110℃密封试管中搅拌16小时。然后将 混合物经由硅藻土层块过滤并且将溶剂在真空中蒸发。用柱色谱法纯 化残余物(硅胶；二氯甲烷/10％氨水在甲醇中(7M)在二氯甲烷中97/3) 以产生D15(0.152g，67％)，为黄色糖浆。C₁₈H₂₀ClF₃N₄O₂S计算值448； 实测值449(MH⁺)。

实施例1

4-苯基-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E1)

向4-(5-苯基-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D4)(1.8g， 0.0044mol)在甲醇(125ml)的溶液添加15离子交换树脂(酸 的形式，4.1mmol/g)(5.3g，0.022mol)并将反应混合物在室温下摇动18 小时。在此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲醇中的饱和溶液。 将混合物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸发。将粗制产物从 乙醚/庚烷中结晶以产生E1(1.3g，96％)。C₁₅H₁₅F₃N₄计算值308；实测 值309(MH⁺)。

熔点(乙醚/庚烷)：130.7℃。

¹H NMR(500MHz，氯仿-d)δppm：1.71(bs，1H)，3.01(t，J＝5.20Hz， 4H)，3.77(t，J＝5.20Hz，4H)，6.71(s，1H)，7.29-7.37(m，2H)， 7.42-7.49(m，3H)。

¹³C NMR(126MHz，氯仿-d)δppm：45.72(s，2CH₂)，45.76(s，2CH₂)， 112.73(s，CH)，122.48(q，J＝581Hz，C)，128.19(s，CH)，128.36(s， 2CH)，129.01(s，CH)，135.66(s，C)，140.55(s，C)，141.03(s，C)， 160.22(s，C)。

实施例2

6-(4-乙基哌嗪-1-基)-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E2)

向4-苯基-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E1)(0.15g，0.49mol)于四 氢呋喃(5ml)的混合物添加乙醛(55ml，0.97mmol)。将反应混合物在室 温下搅拌30分钟，然后添加三乙酰氧基氢化硼(0.154g，0.73mmol)。 将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后添加更多乙醛(55ml，0.97 mmol)和三乙酰氧基氢化硼(0.154g，0.73mmol)并且将反应混合物在室 温下搅拌4小时。然后添加二氯甲烷并且将混合物用饱和的氯化铵溶 液萃取。把有机层分离出、干燥(Na₂SO₄)，过滤并将溶剂在真空中蒸发 掉。然后将残余物用柱色谱法纯化(硅胶；乙酸乙酯/10％氨水在甲醇中 (7M)在二氯甲烷中10∶0到8∶2)。收集所计算值的部份收集物，将溶剂 在真真空中蒸发，并且将残余物溶解在乙腈中且予添加的盐酸于乙醚 的饱和溶液使其转变成盐酸盐。将所得到的白色固体过滤出来并且干 燥产生E2(0.039g，21％)。C₁₇H₁₉F₃N₄·HCl；游离碱计算值336；实测 值337(MH⁺)。

熔点(乙醚/庚烷)：281.9℃。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)ppm：1.28(t，J＝7.22Hz，3H)，2.98 -3.22(m，4H)，3.48-3.64(m，4H)，4.73(d，J＝13.58Hz，2H)，7.32 -7.46(m，3H)，7.46-7.60(m，3H)，11.26(br.s.，1H)。

实施例3

6-[4-(3，5-二氟苄基)哌嗪-1-基]-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E3)

将4-苯基-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E1)(0.050g，0.16mmol)， 3，5-二氟苄基溴(0.031ml，0.24mmol)和二异丙基乙胺(0.056ml，0.32 mmol)在乙腈(2ml)的混合物在100℃微波照射下搅拌10分钟。将溶剂 在真空中蒸发掉并且将残余物用CC-TLC(离心圆型薄层色谱)在一台色 层分析离心机(制备用，离心加速的圆形薄层色析)。从乙醚/庚烷中将 粗制的产物结晶出来以产生呈固体的E3(0.037g，52％)。C₂₂H₁₉F₅N₄计 算值434；实测值435(MH⁺)。

熔点(乙醚/庚烷)：138.8℃。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm：2.56-2.62(m，4H)，3.54(s，2H)， 3.78-3.85(m，4H)，6.72(tt，J＝8.91，2.28Hz，1H)，6.71(s，1H)， 6.86-6.95(m，2H)，7.28-7.35(m，2H)，7.41-7.51(m，3H)。

实施例4

顺式-6-(3，5-二甲基哌嗪-1-基)-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E4)

将6-氯-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(D3)(0.15g，0.58mmol)、2，6-顺式 -二甲基哌嗪(0.097g，0.87mmol)、和二异丙基乙胺(0.202ml，1.16mmol) 在乙腈(3ml)的混合物在180℃微波照射下搅拌30分钟。将溶剂在真空 中蒸发然后添加二氯甲烷和氯化铵的饱和溶液。将混合物过滤并且将 溶剂在真空中蒸发。用柱色谱法纯化残余物(硅胶；1-3％氨在甲醇(7M))/ 二氯甲烷)。将所需的级份收集物收集起来并且在真空中进行蒸发。用 盐酸在乙醚(2M)的溶液向所得到的产物进行处理产生相应的盐 E4(0.058g，27％；CIS)，为灰褐色的固体。C₁₇H₁₉F₃N₄·HCl计算值336； 实测值337(MH⁺)。

熔点(乙醚)：285.4℃。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.32(d，J＝6.63Hz，6H)，3.08 (dd，J＝13.99，11.51Hz，2H)，3.30-3.41(m，2H)，4.76(d，J＝13.27 Hz，2H)，7.36-7.43(m，3H)，7.49-7.55(m，3H)，9.16-9.27(m， 1H)，9.60(d，J＝9.74Hz，1H)。

实施例5

2-(5-苯基-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-八氢-吡咯并[1，2-α]吡嗪(E5)

将6-氯-4-苯基-3-三氟甲基-哒嗪(D3)(0.10g，0.39mmol)、八氢-吡 咯并[1，2-α]哌嗪外消旋混合物(0.053g，0.42mmol)和二异丙基乙胺 (0.103ml，0.585mmol)在乙腈(3ml)的混合物在150℃微波照射下搅拌 30分钟。将反应混合物用二氯甲烷(25ml)稀释并且用饱和的碳酸钠溶 液(12ml)萃取。将有机层分离、干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发。 然后将残余物用柱色谱法(硅胶；0-2.5％氨在甲醇中(7M)/二氯甲烷)纯 化。使残余物从乙腈/庚烷中沉淀。将所得到的产物用盐酸在乙醚(2M) 的溶液处理以产生相应的盐E5(0.081g，54％)，为白色固体。C₁₈H₁₉F₃N₄·HCl；游离碱计算值348；实测值349(MH⁺)。

熔点(乙醚)：104.2℃。

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆)δppm：1.71-2.25(m，3.5H)，2.88-3.01 (m，0.5H)，3.06-3.19(m，0.5H)，3.19-3.60(m，4.5H)，3.65(d， J＝11.85Hz，0.5H)，3.83-3.98(m，2H)，4.26-4.37(m，0.5H)，4.86 (d，J＝14.16Hz，0.5H)，5.00(d，J＝13.29Hz，0.5H)，7.28(s，0.5H)， 7.37-7.46(m，2.5H)，7.47-7.57(m，3H)，11.74(s，0.5H)，11.87(s， 0.5H)。

实施例6

4-(4-氟苯基)-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E6)

向4-[5-(4-氟苯基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (D8)(1.25g，2.93mmol)在甲醇(50ml)中的溶液添加15离子 交换树脂(酸的形式，4.1mmol/g)(3.6g，14.64mmol)并将反应混合物在 室温下摇动18小时。在此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲醇 中的饱和溶液。将混合物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸发。 将粗制产物用HPLC纯化。收集所需的级份收集物并且在真空中蒸发 以产生E6(0.507g，53％)。C₁₅H₁₄F₄N₄计算值326；实测值327(MH⁺)。

熔点：137.4℃。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm：1.67(br.s.，1H)，2.99-3.05(m， 4H)，3.74-3.82(m，4H)，6.68(s，1H)，7.15(t，J＝8.71Hz，2H)， 7.31(dd，J＝8.50，5.39Hz，2H)。

实施例7

6-哌嗪-1-基-4-噻吩-3-基-3-三氟甲基-哒嗪(E7)

向以类似于向D8中描述的方法制备的4-[5-(3-噻吩-3-基)-6-三氟 甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.074g，0.18mmol)在甲醇(5ml)中 的溶液添加15离子交换树脂(酸的形式，4.1 mmol/g)(0.218g，0.89mmol)并将反应混合物在室温下摇动18小时。在 此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲醇中的饱和溶液。将混合 物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸发。将粗制产物从乙醚/庚 烷中结晶以产生E7(0.049g，87％)。C₁₃H₁₃F₃N₄S计算值314；实测值 315(MH⁺)。

熔点(乙醚/庚烷)：244.3℃。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm：1.68(br.s.，1H)，2.98-3.05(m， 4H)，3.73-3.81(m，4H)，6.78(s，1H)，7.14-7.21(m，1H)，7.36- 7.45(m，2H)。

实施例8

6-哌嗪-1-基-4-邻甲基苯基-3-三氟甲基-哒嗪(E8)

向4-[5-(2-甲基苯基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (D11)(0.089g，0.21mmol)在甲醇(7ml)的溶液添加15离子交 换树脂(酸的形式，4.1mmol/g)(0.257g，1.05mmol)并将反应混合物在 室温下摇动18小时。在此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲醇 中的饱和溶液。将混合物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸发。 将粗制产物用HPLC纯化并且收集所需的级份收集物且在真空中蒸发 产生E8(0.026g，50％)，为白色固体。C₁₆H₁₇F₃N₄计算值322；实测值 323(MH⁺)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.05(s，3H)，2.74-2.83(m，4 H)，3.37(br.s.，1H)，3.62-3.72(m，4H)，7.15(t，J＝3.63Hz，2H)， 7.26(td，J＝7.26，1.66Hz，1H)，7.31-7.38(m，2H)。

实施例9

4-(4’-氟联苯-4-基)-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E9)

将4-[5-(4’-氟-联苯-4-基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁 酯(D12)(0.115g，0.23mmol)和三氟乙酸(2ml)在二氯甲烷(8ml)中的混合 物在室温下搅拌2小时。将溶剂在真空中蒸发然后添加二氯甲烷和碳 酸氢钠的饱和溶液。将有机层分离出，干燥(Na₂SO₄)，过滤并将溶剂在 真空中蒸发掉。用柱色谱法纯化残余物(硅胶；1-3％氨水在甲醇中(7M) /二氯甲烷)。收集所需的级份收集物并且在真空中蒸发以产生 E9(0.084g，91％)。C₂₁H₁₈F₄N₄计算值402；实测值403(MH⁺)。

熔点(乙醚/庚烷)：161.9℃。

¹H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm：1.72(br.s.，1H)，2.99-3.05(m， 4H)，3.75-3.82(m，4H)，6.74(s，1H)，7.13-7.20(m，2H)，7.40(d， J＝8.29Hz，2H)，7.57-7.64(m，4H)。

实施例10

4-苯基-6-哌嗪-1-基-哒嗪-3-甲腈(E10)

向4-(6-氰基-5-苯基-哒嗪-3-基)-哌嗪-1-甲酸叔丁酯(D14)(0.133g， 0.37mmol)在甲醇(10ml)中的溶液添加15离子交换树脂(酸 的形式，4.1mmol/g)(1.3g，5.3mmol)并将反应混合物在室温下摇动18 小时。在此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲醇中的饱和溶液。 将混合物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸发。将粗制产物用 HPLC纯化。收集所需的级份收集物并且在真空中蒸发以产生 E10(0.06989g，72％)，为白色固体。C₁₅H₁₅N₅计算值265；实测值 266(MH⁺)。

熔点：271.6℃。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.77-2.84(m，4H)，3.34(br.s.， 1H)，3.71-3.80(m，4H)，7.29(s，1H)，7.55-7.61(m，3H)，7.66- 7.72(m，2H)。

实施例27

4-(5-氯-噻吩-2-基)-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪(E27)

向4-[5-(氯-噻吩-2-基)-6-三氟甲基-哒嗪-3-基]-哌嗪-1-甲酸叔丁酯 (D15)(0.114g，0.25mmol)在甲醇(10ml)的溶液添加15离子 交换树脂(酸的形式，4.1mmol/g)(0.305g，1.25mmol)并将反应混合物 在室温下摇动18小时。在此期间之后，将混合物过滤然后添加氨在甲 醇中的饱和溶液。将混合物摇动1小时，过滤并且将滤液在真空中蒸 发。然后将残余物用柱色谱法纯化(硅胶；3％氨在甲醇中(7M)/二氯甲 烷)。收集所需的级份收集物并在真空中予以蒸发。将粗制产物溶解在 2M盐酸在乙醚的溶液中并将混合物在室温下处理16小时。将溶剂在 真空中蒸发。把所得到的固体从乙醚中研制以产生E27(0.062g，87％)。 C₁₃H₁₂ClF₃N₄S计算值348；实测值349(MH⁺)。

熔点：分解

¹H NMR(500MHz，DMSO-d₆).ppm 3.24(br.s.，4H)4.07(d，J＝5.2 Hz，4H)7.23(d，J＝3.8Hz，1H)7.26(d，J＝3.8Hz，1H)7.41(s，1H) 9.45(br.s.，2H)。

实施例40

4-苯基-6-哌嗪-1-基-3-三氟甲基-哒嗪一盐酸盐(E40)

向加热至50℃的E1(16g，51.90mmol)在2-丁酮(400ml)滴加盐酸 溶于2-丙醇(6N，51.90mmol)。将混合物在回流下加热90分钟然后在 50℃搅拌2小时并且更进一步在室温下搅拌至隔夜。将沉淀的晶体过 滤出来并且在45℃真空下干燥以产生E40(10.4g，58％)。

熔点：＞185℃(分解)。

以下实施例(E11-E19)系以类似于实施例(E6)中描述的方法制备。 实施例(E20)系通过根据类似于向实施例(E1)中描述的方法将说明(D13) 脱脱保护来制备。实施例(E28)系以类似于(E27)的方法但使用碳酸 钾做为碱并且用1，4-二氧杂环己烷作为溶剂来制备。实施例(E29)(甲苯 /乙醇/水)、实施例(E30)(甲苯/乙醇/水)、实施例(E31)(1，4-二氧杂环己烷 /水)、实施例(E32)(1，4-二氧杂环己烷/水)、实施例(E33)(1，4-二氧杂环己 烷/水)、实施例(E34)(1，4-二氧杂环己烷/水)和(E35)(1，4-二氧杂环己烷/ 水)是通过类似于实施例(E27)中描述的方法但是利用向每一情形分别 指定的溶剂来制备的。实施例(E18，E27，E28，E31，E32，E33，和 E34)被分离出成盐酸盐。

在分子量游离碱一行中的数值是利用最大量同位素的确切质量所 计算出的确切质量。

实施例(E21)是通过类似于对(E3)中描述的方法制备的，实施例 (E22，E24和E25)是通过类似于对(E2)中描述的方法制备的，(E23)是 依照Gillapsy，M.L.；Lefker，B.A.；Hada，W.A.；Hoover，D.J.在《四 面体通信》1995年，第36期，第7399-7402页中中描述的方法从(E1) 与(1-乙氧基环丙氧基)三甲基硅烷以还原性胺化作用制备的。实施例 (E26)是通过类似于对(E4)中描述的方法制备的且实施例(E36，E37，E38 和E39)是通过类似于(E2)的方法制备的但是使用E1的盐酸盐当作原 料，且分别用二氯甲烷和三乙胺作为溶剂。实施例(E2)、(E4)、(E5)、 (E22)和(E26)是以盐酸盐的形式被分离出来。实施例(E5)和(E26)是以消 旋混合物的形式获得。

药理学

对于人类D2_L受体的体外结合亲和力

使冷冻的经过人类多巴胺D2_L受体转染的CHO细胞解冻，用 Ultra-Turrax T25均质器予以短时间均质化并且用含有NaCl、CaCl₂、 MgCl₂、KCl(分别是50、120、2、1和5mM，用HCl调整至pH7.7)的 Tris-HCl检验缓冲液稀释至使特异性和非特异性结合达到最佳的适当 蛋白质浓度。将放射性配体[³H]螺环哌啶酮(spiperone)(NEN，比活性 ～70Ci/mmol)以2nmol/l的浓度稀释在检验缓冲液中。然后将制备的放 射性配体(50μl)，与50μl的10％DMSO对照组、布他拉模(Butaclamol， 最终浓度10^-6mol/l)或有兴趣的化合物与400μl制备好的细胞膜溶液培 育在一起(30分钟，37℃)。将与细胞膜结合的活性经过一台Packard Filtermate收获机过滤到GF/B单滤盘上并且用冰冷的Tris-HCl缓冲液 (50mM；pH7.7；6×0.5ml)冲洗的。使滤器先干燥然后才添加闪烁计数 液并且在一台Topcount闪烁计数器上进行估算。百分率特异性结合和 竞争结合的曲线是利用S-Plus软件(Insightful公司出品)计算的。大多 化合物具有pIC₅₀值＞5.0。

快速解离

用修饰自Josse E.Leysen和Walter Gommeren，《受体研究期刊》， 1984年，第4(7)期，第817-845页的非直接检验法试验显示出IC₅₀小 于10μM的化合物以评估其解离速率。首先将其IC₅₀的四倍浓度的化 合物与人类D2L受体细胞膜以2ml的体积在25℃培育1小时，然后 利用40孔的多孔均分机在真空抽吸下经由玻璃棉滤器过滤。紧接在此 之后将真空释放。将0.4ml含有1nM[³H]螺环哌啶酮(spiperone)的预先 温热的缓冲液(25℃)添加到滤器上经过5分钟。通过启动真空使培育终 止并且用2×5ml冰冷的缓冲液立即冲洗。在一台液体闪烁计数分光光 度计中测量与滤器结合的放射性。该检验的原理是根据化合物从D2受 体上解离得越快则[³H]螺环哌啶酮(spiperone)结合至D2受体越快的假 设。例如，当D2受体与浓度为1850nM(4×IC₅₀)的克罗札平(clozapine) 培育在一起时，培育在滤器上5分钟之后，[³H]螺环哌啶酮(spiperone) 结合等于其总结合容量(在没有药物时测量者)的60-70％。与其它抗精 神病剂培养时，[³H]螺环哌啶酮(spiperone)结合在20和50％之间变化。 因为克罗札平被包含在每一过滤试验中，因此当受试验的化合物的解 离与克罗札平一样快或更快时则被认为是快速解离性D2拮抗剂。大多 数被试验的化合物具有大于克罗札平的解离速率，即＞50％。

对于人类D3受体的体外结合亲和力

使冷冻的经过人类多巴胺D3受体转染的CHO细胞解冻，用 Ultra-Turrax T25均质器予以短时间均质化并且用含有120mMNaCl、 2mMCaCl₂、1mMMgCl₂、5mM KCl和0.1％BSA(用HCl调整至pH7.4) 的Tris-HCl检验缓冲液稀释至使特异性和非特异性结合达到最佳的适 当蛋白质浓度。将放射性配体[¹²⁵I]碘舒必利(Iodosulpride，Amersham 公司出品，比活性～2000Ci/mmol)以2nM的浓度稀释在检验缓冲液中。 然后将制备的放射性配体(20μl)，与40μl的10％DMSO对照组、利螺 环酮(Risperidone，最终浓度10^-6M)或有兴趣的化合物与70μl制备好的 细胞膜溶液和70μlWGA包覆的PVT珠子培育在一起(0.25mg/每孔的最 终浓度)。在RT摇动24小时以后在一台Topcount^TM闪烁计数器上对平 板进行估算。百分率特异性结合和竞争结合的曲线是利用S-Plus软件 (Insightful公司出品)计算的。

对于人类5HT6受体的体外结合亲和力

使冷冻的经过人类血清素5TH6受体转染的HEK细胞解冻，用 Ultra-Turrax T25均质器予以短时间均质化并且用含有10mM MgCl₂、 1mM EDTA和10μM帕尔吉林(Pargyline，用HCl调整至pH7.4)的 Tris-HCl检验缓冲液稀释至使特异性和非特异性结合达到最佳的适当 蛋白质浓度。将放射性配体[³H]麦角酸二乙酰胺(Perkin Elmer公司出 品，比活性～80Ci/mmol)以20nM的浓度稀释在检验缓冲液中。然后将 制备的放射性配体(20μl)，与40μl的10％DMSO对照组、米塞西平 (Methiothepine，最终浓度10^-5M)或有兴趣的化合物与70μl制备好的细 胞膜溶液和70μlWGA包覆的PVT珠培育在一起(0.25mg/每孔的最终浓 度)。在RT摇动24小时以后在一台Topcount^TM闪烁计数器上对平板进 行估算。百分率特异性结合和竞争结合的曲线是利用S-Plus软件 (Insightful公司出品)计算的。

n.d.：未测定