粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法

技术领域：本发明涉及一种微生物菌种培养基及其检测方法，特别是一种粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法。

背景技术：微生物球菌特别是粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌作为农业部批准使用的有益微生物菌种之一，已被广泛应用于养殖业中，为减少和避免使用抗生素发挥了很大作用。但长期以来，益生菌特别是粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌的检测使用的是乳酸细菌培养基即MRS培养基和普通营养琼脂粉且琼脂粉在培养基中的含量较高，这样检测时培养基很容易出现凝结成块，菌落与培养基斑点混淆不清，难以准确计数的缺点。

发明内容：本发明的目的就是要提供一种粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的培养基及其检测方法，其提供了一种更为有效的检测培养基和检测方法，能克服上述缺点，为粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌提供检测的培养基不易凝结成块，菌落与培养基斑点清楚，计数准确。

本发明粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测培养基技术方案是这样来实现，包括蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、琼脂粉、氯化钠或磷酸二氢钾、葡萄糖，还包括有碳酸钙。

本发明所述的粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测培养基，其包括如下质量组份混合组成：蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、氯化钠5-8、琼脂粉10-12、碳酸钙10-20、和蒸馏水1000-1500，或蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、酵母膏5-8、磷酸氢二钾3-5、碳酸钙10-20、琼脂粉10-15、和蒸馏水1000-1500；亦或是由蛋白胨10-15、牛肉膏5-8、葡萄糖15-20、琼脂粉10-12、碳酸钙10-20、蒸馏水1000-1500、和氯化钠5-8、酵母膏5-8、磷酸氢二钾3-5的一种或任意几种的组合构成。

本发明所述的粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测培养基，所述培养基由如下质量的组份混合组成：蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、氯化钠5、琼脂粉10、碳酸钙10、蒸馏水1000；或蛋白胨10、牛肉膏5、葡萄糖20、酵母膏5、磷酸氢二钾3、碳酸钙10、琼脂粉10蒸馏水1000。

本发明所述的粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测培养基，所述的培养基中琼脂粉的加入量为培养基总质量的0.8-1.4Wt％。

本发明所述的粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测培养基，所述的培养基中碳酸钙的加入量为培养基总质量的1-2Wt％。

一种粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌的检测方法，其是采用上面所述的检测培养基，按下述方法步骤进行：

1)样品稀释

a)将检测样品称量后置于盛有无菌生理盐水的容器中，加入玻璃珠，置于摇床震荡30-50分钟，得样品液；

b)将样品液移入盛有无菌水的三角瓶中，充分振摇使样品均匀分散，制成10-2的样品稀释液，再以此无菌操作制成相应适当的稀释度；

2)平板制作：

a)、选用2-3个上述相应适当的稀释度，分别置于不同的培养皿内，每个稀释度做2-3个重复；

b)、将45-52℃保温的培养基倒于培养皿中，使之均匀混合冷却制成培养皿平板。

3)培养和计数：

将2)步制成的培养皿平板倒置于30-35℃恒温箱内，培养48-72h，观察长出的菌落，计算含有透明圈的菌落数目，选择含有30-300个菌落的培养皿平板进行结果计算。

本发明采用上述方案在粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌的检测培养基中加入碳酸钙，同时控制琼脂粉的加入量，其加入量占培养基总量的1％左右；与现有的乳酸细菌培养基MRS以下简称MRS相比，由于本发明培养基在检测过程中产生的乳酸溶解菌落周围的碳酸钙形成透明圈，培养基不会凝结成块，菌落与培养基之间斑点清晰，计数准确。

附图说明

图1为本发明检测培养基及检测方法检测粪肠球菌、屎肠球菌和乳酸片球菌样品时的结果照片图。

图2为采用MRS培养基与采用本发明培养基检测粪肠球菌、屎肠球菌及乳酸片球菌样品时的结果照片对照图。

图1中结果可以看出图中培养基均一，菌落清晰，菌落透明圈非常明显，容易计数。

图2中左边为用MRS培养基所检测的倒培养皿，倒培养皿中有很多半透明凝结物，且颜色较深，影响准确计数；右边为用本发明检测培养基所检测的倒培养皿，倒培养皿中球菌的透明圈非常明显，菌落清晰可见，且整个倒培养皿色泽较浅，计数很容易。