厄多司坦在多种中毒,特别是重金属如铅或汞,和扑热息痛中毒中的应用的指示

技术领域

本发明涉及厄多司坦在不同中毒中作为解毒剂的指示。

背景技术

在被认为是有毒元素的重金属中，铅和汞是最常见的。

铅(Pb)是自然界中通常存在的成分。铅在油漆和燃料中作为添加剂的用途增加了中毒的风险。铅盐可以通过摄食或吸入而被吸收。铅的血液半衰期约为30-35天，而铅在骨骼中的半衰期约为10⁴天(几乎30年)。

汞(Hg)可以在自然界、无机盐或有机盐中找到。天然的汞被用于温度计、血压计、电池等等。汞盐被用于多种生产过程。有机汞被用于涂层、杀菌剂和有些工业过程。在人体中汞的半衰期为40-70天。

天然的汞是可挥发的，并能通过呼吸而被吸收。无机或有机的汞盐可以通过皮肤或肠胃而被吸收。

已经知道几种解毒剂可以治疗重金属中毒，其中在教科书中最常见的是螯合试剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)和二巯基丙醇(BAL)单独或联合使用。使用这些药物的主要问题是它们不能特异性螯合毒金属离子，而是也对通常的生理学功能所必需的元素例如钙和锌有反应。严重的不良副作用限制了其长期应用和在慢性中毒中的应用。

N-乙酰半胱氨酸(NAC)长期对扑热息痛(对乙酰氨基酚)中毒具有参考标准，并在某些国家具有用于铅中毒的明确指示。也有评估NAC的其它指示，其被用于汞中毒的非常规用药；这后一种用途已经得到一些实验研究的支持(Aremu et al，Environ Health Perspect.2008 January；116(1)：26-31.Koh et al.Molecular Pharmacology Vol.62，Issue 4，921-926，October 2002，Ballatori et al.，Environ Health Perspect.1998 May；106(5)：267-271.)。NAC具有口服或注射形式。

我们在文献中未找到对这种中毒的任何有效的预防性治疗方法；在特殊的操作中可能存在中毒的更高风险的对象包括军人、消防员、专业工人和其他。在一些公共安全的情况中也需要考虑进行预防。

厄多司坦是一种在几个国家以粘液溶解药注册的药物。它已经被用于大量患者；药物警戒和公开数据显示出良好的耐受性，至少在使用剂量下。由于2巯基基团的存在，厄多司坦在体外表现了良好的抗氧化活性。

发明内容

我们认为厄多司坦可以作为有效的和更安全的解毒剂用于大范围的中毒，特别是对于重金属和扑热息痛。

为了测试在不同中毒中的效果，我们决定进行多个实验。

我们发现厄多司坦和解毒剂可以以口服和注射形式使用。我们发现厄多司坦具有非常低的内在毒性。

基于NAC被认为是最有希望的解毒剂之一(也允许口服和注射形式)，在两个实验里我们比较了厄多司坦治疗和NAC治疗，实验在可选择地具有铅/汞中毒的动物组中进行。NAC很可能比EDTA或BAL更安全。NAC在化学上与厄多司坦非常相似，我们认为对其进行比较是很重要的。

在第一个实验中测试了口服，而在第二个实验中测试了厄多司坦静脉注射处理与相应形式的NAC的对比。我们开发了静脉注射治疗的特定配方，并评估了这些药学剂型的内在毒性和稳定性。与未处理或NAC处理相比，厄多司坦处理表现得更有效。

第三个实验在铅中毒的动物中我们比较了厄多司坦处理与未处理、传统EDTA+BAL治疗、和与厄多司坦加入传统EDTA+BAL治疗的效果。厄多司坦的治疗被证实比未治疗和传统治疗更加有效，死亡率和存活者的生命参数都是如此。

第四个试验在扑热息痛中毒的动物中我们比较了厄多司坦注射剂与NAC(标准治疗)。由于扑热息痛在化学上与重金属非常不同，我们可以推断厄多司坦可以用作广谱解毒剂。与未处理相比，厄多司坦导致了更低的死亡率；与NAC处理相比，其具有更好的存活者结果。

第五个实验测试了厄多司坦在重金属中毒中作为预防药的效果。含厄多司坦的预防药被证实在中毒之前不影响对象的正常健康，并提供对中毒的保护。

实施例1

第一个实施例在铅中毒的大鼠和汞中毒的大鼠中评价了口服厄多司坦的效果，以未处理和NAC处理作为参照。

材料与方法

在每个实验中的组都是同源的，其间的不同可以假定是由于不同的处理。我们尝试对不同实例保持尽可能不变的条件，除非在不同时刻进行指定操作。在不同实例间最重要的可变因素是动物的年龄和外界条件(温度，湿度)。不同实例的相似组(不是平行进行的)不能比较。

所用物质与溶液

1.三水醋酸铅(分子式C₄H₆O₂Pb.3H₂O；分子量379.33，溶解度45.61g/100ml水在15℃；LD₅₀口服4665mg/kg)(Toxicology and Applied Pharmacology vol.18，pg 185，1991)

2.氯化汞(分子式HgCl₂；分子量271.5；溶解度7.4g/100ml水在20℃；LD₅₀口服42mg/kg)(Toxicology and Applied Pharmacology vol.18，pg 185，1991)

3.N-乙酰半胱氨酸/NAC(分子式C₅H₉NO₃S；分子量163.19；在20℃微溶于水；大鼠LD₅₀静脉注射1140mg/kg)(European Jounal of Respiratory Diseases vol.61 page 138)口服5050mg/kg(Toxicology and Applied Pharmacology vol.18，pg 185，1991)

4.厄多司坦(分子式C₈H₁₁NO₄S₂；分子量249.31；适度的溶于水；大鼠LD₅₀静脉注射＞3500mg/kg，口服8750mg/kg(European Patent Application vol.0061 1386)。大鼠静脉注射LD50将由我们再评估。

生物材料

210只动物，雄性和雌性Wistar鼠，被用于本实验。所有动物随机分为7组，每组30只(15只雄性和15只雌性)，饲养在合适环境中并自由取食和饮水，不接触任何杀虫剂。

溶液给药的方法

1.醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药于3组不同组的大鼠

2.氯化汞以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药于3组不同组的大鼠

3.NAC以500mg/kg(1/10的LD₅₀，理论上认为有效的剂量)的剂量口服给药于铅或汞给药刚结束后的2组不同组的大鼠。NAC给药每天重复1次持续7天。NAC与重蒸馏水混合，所得溶液以10ml/kg的体积给药。

4.厄多司坦以875mg/kg(1/10的LD₅₀，理论上认为有效的剂量)口服给药于铅或汞给药刚结束后的2组不同组的大鼠。厄多司坦给药每天重复1次持续7天。厄多司坦与重蒸馏水和碳酸氢钠等摩尔混合，所得溶液以10ml/kg的体积给药。

动物监控

在给药重金属7天之前开始监控动物，评价其体重和常规健康。在溶液给药24小时之前，动物受限摄食并自由饮水。

动物被监控常规健康、中毒信号和最重要的死亡率。在处理7天之后测试存活者的下述参数：血红蛋白，红细胞压积，红细胞和白细胞的数量，以及尿液中的尿素，肌酸酐，尿酸，Pb和Hg。

实验步骤

对口服厄多司坦和NAC作为解毒剂在Pb中毒动物和Hg中毒动物的实验模型中做了比较。

记录了死亡率。对中毒并开始处理7天之后的存活者测试了如上所指定的生物化学和血液病学参数，以评价处理的效果。少数动物被收集自发排放的尿液用于Pb-Hg分析。动物用乙醚全身麻醉后处死。每个小组随机选取6只动物(3只雄性和3只雌性)用于宏观和微观的解剖病理学检验。

铅中毒动物中厄多司坦效果的评价

如前所介绍的4组的各30只动物(15只雄性和15只雌性)如下操作：

组1-空白对照，未中毒并未处理。

组2-Pb中毒并且未处理，醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。

组3-Pb中毒并用厄多司坦处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以875mg/kg(1/10LD₅₀口服)给药厄多司坦并每天一次持续7天。

组4-Pb中毒并用NAC处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以500mg/kg(1/10LD₅₀口服)给药NAC并每天一次持续7天。

汞中毒动物中厄多司坦效果的评价

如前所介绍，与其它4组平行地，3组的各30只动物(15只雄性和15只雌性)分别如下操作：

组5-Hg中毒并且未处理，氯化汞以42mg/kg给药。

组6-Hg中毒并用厄多司坦处理。该组氯化汞以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以875mg/kg(1/10LD₅₀口服)给药厄多司坦并每天一次持续7天。

组7-Hg中毒并用NAC处理。该组醋酸铅以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以500mg/kg(1/10LD₅₀口服)给药NAC并每天一次持续7天。

统计学分析

用卡方检验分析死亡率。

其它结果的统计学分析用t-学生分布检验、削弱变量通过Origin5.0软件进行。p＜0.05的结果被认为是统计学显著的。

分析仪器

生化检测用Refloton 2000进行，血液学检测用Hemastar 4，尿液汇总用Urilux，尿液中的Pb用GC-MS Varian。

结果

结果在下列表格中展现。

死亡率

表1：Pb和Hg中毒中厄多司坦保护与未处理和NAC处理的对比的评价

¹与组5的差别是统计学显著的

²与组5的差别是统计学不显著的

用氯化汞中毒并用厄多司坦口服处理的组显示死亡率统计学显著的低于中毒并且未处理组，而用NAC处理的组显示与未处理组相比不显著的差别。用厄多司坦处理的组与对应的用NAC处理的组相比显示更低的死亡率，但是其差别是不显著的。

存活者-生物化学结果

表2：相对于未中毒、未处理和NAC处理，在铅/汞中毒中厄多司坦处理对生化参数的影响。

¹与组1相比的差别不显著

²与组4或7(NAC处理)分别相比的差别显著

³与组1未中毒相比的差别显著

对于Pb中毒的组，厄多司坦的处理显示尿素和肌醇酐的平均值与未中毒组相比没有差别，而与NAC处理组相比有差别，证实了其具有高的肾损害保护。NAC处理显示尿素和肌醇酐的平均值与未中毒组相比具有差别。

对于Hg中毒的组，厄多司坦的处理显示所有参数与未中毒组相比都没有差别，而尿素和肌醇酐的平均值与NAC处理组相比有差别，证实了其具有高的肾损害保护。NAC处理显示尿素和肌醇酐的平均值与未中毒组相比具有差别。

存活者——血液学结果

表3：相对于未中毒、未处理和NAC处理，在铅/汞中毒中厄多司坦处理对血液学参数的影响。

³与组1未中毒相比的差别显著

所有处理都显示对血液学参数没有显著性保护。

尿液中的Pb和Hg值

表4：尿液中的Pb，用GS MS Varian 4100测量。

表5：尿液中的Hg，用GS MS Varian 4100测量。

排泄Pb和Hg的速度增加提示厄多司坦的作用机理可能是结合重金属以形成非毒性或低毒性化合物并通过尿液容易地排出。

解剖病理学结果

宏观和微观检验展示了如下的结果。

在铅中毒中发现了中度的脑损伤、肝水平损伤和严重的胃和肾水平损伤。NAC处理没有改善损伤，而厄多司坦处理显示了更低程度的损伤。

在Hg中毒中脑、胃和肾损伤很严重。用厄多司坦或NAC处理的动物表现出更低程度的损伤。

讨论-实施例1

厄多司坦口服处理显著降低了氯化汞中毒组的死亡率，尽管只是每组中相对小的数目的动物，同时NAC处理显示与未处理组相比无显著差别。厄多司坦的处理与NAC处理组相比使死亡率几乎减半，与未处理组相比也减半，但是可能由于动物数目较小，结果并非统计学显著的。

在存活者中，Pb和Hg毒性很严重，并从生物化学和解剖病理学的观点通过肾脏功能(尿素、肌醇酐、尿酸)和消化功能的改变以及血液学参数(红细胞、白细胞、红细胞压积、血红蛋白)的改变得到证实。

厄多司坦口服给药提供了与Pb和Hg中毒的未处理组相比更好的保护，降低了毒性并增加了这些毒性物质的尿液排出速度。

厄多司坦的给药与NAC给药相比提供了在肾脏毒性、尿素平均值和肌醇酐平均值相比更好的保护，与正常(未中毒的空白对照)没有差别。与NAC处理组的差别是显著的。

厄多司坦或NAC给药都没有通过血液学参数显示对抗毒性。

解剖病理学检验确认了厄多司坦处理与未处理和NAC处理相比提供了更好的保护，显示肝脏、肾脏和消化水平上更低程度的损伤。

总之，厄多司坦口服用于重金属中毒是有用的和有效的。

实施例2

第二个实施例体现铅中毒大鼠和汞中毒大鼠中厄多司坦静脉给药的效果的评价，用未处理和NAC处理作为对照。

材料与方法

所用物质与溶液

如实施例1所述。

生物材料

335只动物，雄性和雌性Wistar大鼠，被用于本实验。所有动物随机分为11组，其中9组每组35只(15只雄性和20只雌性)，另外2组每组10只动物(5只雄性和5只雌性)，饲养在合适环境中并自由取食和饮水，不接触任何杀虫剂。

溶液给药的方法

1.醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药于4组不同组的大鼠

2.氯化汞以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药于4组不同组的大鼠

3.NAC以500mg/kg(1/10的LD₅₀，理论上认为有效的剂量)的剂量在大鼠尾静脉以静脉(i.v.)给药于铅或汞给药刚结束后的2组不同组的大鼠。NAC给药每天重复1次持续7天。NAC溶于重蒸馏水中。

4.厄多司坦在大鼠尾静脉缓慢静脉给药于铅或汞口服给药刚结束后的大鼠，以2种不同的剂量给药于4个不同的组：

ERDO1 350mg/kg(大约LD₅₀的1/10)给2组。

ERDO1 175mg/kg(大约LD₅₀的1/20)给2组。

厄多司坦给药每天重复1次持续7天。厄多司坦和碳酸氢钠以等摩尔数溶于重蒸馏水中，所得溶液以10ml/kg的体积给药。我们初步测试了不同摩尔比的厄多司坦/碳酸氢钠，从0.5∶1到1.5∶1的范围，以及可溶解的体积。发现最适比例是1∶1(350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠)，可以将其溶于10ml中。对于更低剂量(175mg厄多司坦和59mg碳酸氢钠)我们也保持了同样10ml的体积。

动物监控：

在给药重金属7天之前开始监控动物，评价其体重和常规健康。在溶液给药24小时之前，动物受限摄食并自由饮水。

动物被监控常规健康、中毒信号和最重要的死亡率。在处理7天之后测试存活者的下述参数：血红蛋白，红细胞压积，红细胞和白细胞的数量，以及尿液中的尿素，肌酸酐，尿酸，Pb和Hg。

实验步骤

对静脉注射厄多司坦和静脉注射NAC作为解毒剂在Pb中毒动物和Hg中毒动物的实验模型中做了比较。

记录了死亡率。中毒并开始处理7天之后存活者测试了如上所指定的生物化学和血液病学参数，以评价处理的效果。少数动物被收集自发排放的尿液用于Pb-Hg分析。动物用乙醚全身麻醉后处死。每个小组随机选取6只动物(3只雄性和3只雌性)用于宏观和微观的解剖病理学检验。

铅中毒动物中厄多司坦效果的评价

如前所介绍的5组的各35只动物(15只雄性和20只雌性)如下操作：

组1-空白对照，未中毒并未处理。

组2-Pb中毒并且未处理，醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。

组3-Pb中毒并用ERDO1处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以350mg/kg给药厄多司坦并每天一次持续7天。

组4-Pb中毒并用ERDO2处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以175mg/kg给药厄多司坦并每天一次持续7天。

组5-Pb中毒并用NAC处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以114mg/kg(1/10LD₅₀口服)给药静脉注射NAC并每天一次持续7天。

汞中毒动物中厄多司坦效果的评价

如前所介绍，与其它5组平行地，4组每组35只动物(15只雄性和25只雌性)分别如下操作：

组7-Hg中毒并且未处理，氯化汞以42mg/kg给药。

组8-Hg中毒并用ERDO1处理。该组氯化汞以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以350mg/kg厄多司坦静脉注射给药并每天一次持续7天。

组9-Hg中毒并用ERDO2处理。该组氯化汞以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以175mg/kg厄多司坦静脉注射给药并每天一次持续7天。

组10-Hg中毒并用NAC处理。该组醋酸铅以42mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以114mg/kg(1/10LD₅₀)NAC静脉注射给药并每天一次持续7天。

注射压力和厄多司坦毒性的评价

如前所介绍，与其它5组平行地，2组每组10只动物(5只雄性和5只雌性)分别如下操作：

组6-对这些动物缓慢静脉给药水+118mg碳酸氢钠的溶液以总体积10ml/kg，以测试其注射压力。

组11-对这些动物缓慢静脉给药3500mg/kg厄多司坦，以评价厄多司坦毒性。

这些组只评价死亡率。

统计学分析

如实施例1所描述。

结果

结果在下列表格中展现。

死亡率

表6：Pb和Hg中毒中厄多司坦静脉注射与未处理和NAC处理的对比的评价

¹与组2-7(Pb-Hg中毒并且未处理)相比统计学显著的差别

²与组5-10(Pb-Hg中毒并NAC处理)相比统计学显著的差别

³与组2-7(Pb-Hg中毒并且未处理)相比统计学不显著的差别

厄多司坦静脉注射处理在醋酸铅和氯化汞两种类型的中毒中都显著降低了死亡率。跟未处理的组的动物和以NAC静脉处理的组的动物相比，厄多司坦处理的组的动物的死亡率降低了。

NAC处理对死亡率没有影响。

ERDO1比ERDO2降低死亡率的幅度更大，但差别不显著。

注射压力对死亡率没有影响，而我们的静脉注射形式的厄多司坦显示具有高于3500mg/kg的LD₅₀(厄多司坦的毒性非常低)。

存活者-生物化学结果

表7：在铅/汞中毒中厄多司坦静脉处理对生化参数的影响，与未中毒、未处理和NAC处理相比。

¹与组1未中毒相比差异不显著

²与组5-10NAC处理组相比差异显著

³与ERDO2相比差异显著

⁴与组1未中毒相比差异显著

厄多司坦处理的存活者显示了与组1未中毒相比同样的尿素和肌醇酐平均值，显示了高的肾脏保护。厄多司坦处理与NAC处理相比具有显著差异。

NAC处理与未中毒组相比具有显著差异。

存活者——血液学结果

表8：在铅/汞中毒中厄多司坦静脉处理对血液学参数的影响，与未中毒、未处理和NAC处理相比。

³与组1未中毒相比差别显著

所有处理都显示对血液学参数没有显著性保护。

尿液中的Pb和Hg值

表9：尿液中的Pb，用GS MS Varian 4100测量。

表10：尿液中的Hg，用GS MS Varian 4100测量。

结果显示厄多司坦处理提高了排毒水平。由于收集自发排泄的尿液的困难性，使用了前述实验的组1和组2作为比较。

解剖病理学结果

铅中毒中发现了典型的损伤。NAC和ERDO2处理没有改善损伤，而REDO1处理显示出更低程度的损伤。

汞中毒中脑、胃和肾损伤很严重。ERDO2处理的动物表现出更低程度的损伤，而ERDO1和NAC处理似乎表现最不严重的损伤。

实施例2讨论

在Pb和Hg中毒中厄多司坦静脉处理均显著降低了死亡率。NAC处理显示与未处理组无显著差别，表明其没有效果。在醋酸铅中毒模型中，死亡率从未处理组的62.8％和NAC处理组的80％降低至ERDO1的14.3％。在氯化汞中毒模型中，死亡率从未处理组的82.9％和NAC处理组的85.7％降低至ERDO1的22.6％。

ERDO1和ERDO2的处理显示他们之间没有统计学差异，尽管对ERDO1具有明显的倾向性，其在Pb模型中与ERDO2相比使死亡率减半。可能由于相对小数量的动物，结果不是统计学显著的。

在存活者中，Pb和Hg毒性很严重，并从生物化学和解剖病理学的观点通过肾脏功能(尿素、肌醇酐、尿酸)和消化功能的改变以及血液学参数(红细胞、白细胞、红细胞压积、血红蛋白)的改变得到证实。

厄多司坦给药提供了与Pb和Hg中毒的未处理组相比更好的保护，降低了毒性并增加了这些毒性物质的尿液排出速度。

厄多司坦给药与NAC给药相比和与未处理组相比，在肾脏毒性、尿素平均值和肌醇酐平均值上，提供了更好的保护，与正常(未中毒的空白对照)没有差别。该差异是显著的。对于尿素，ERDO1显示比ERDO2更好的结果。

厄多司坦或NAC给药都没有通过血液学参数显示对抗毒性。

解剖病理学检验确认了厄多司坦处理与未处理和NAC处理相比提供了更好的保护，显示肝脏、肾脏和消化水平上更低程度的损伤。ERDO1显示比ERDO2更好的保护。

总之，厄多司坦静脉处理在Pb和Hg中毒的存活者中降低了死亡率并具有抗毒性效果。

实施例3

第三个实施例体现铅中毒大鼠中厄多司坦静脉给药的效果的评价，用未处理和EDTA+BAL处理作为对照。

材料与方法

所用物质与溶液

1.前述实施例中的三水醋酸铅

2.前述实施例中的厄多司坦

3.二巯基丙醇(2，3-二巯基-丙醇)(BAL)是一种能够螯合重金属从而避免重金属与内源硫代基团的相互作用的物质。分子式C₃H₈OS₂，分子量124.22，难溶于水，硫醇的使人不愉快的气味，LD₅₀静脉注射大鼠105mg/kg。

4.6EDTA Ca Na₂是一种螯合试剂，它能够用Pb取代钙原子团，形成稳定物质并通过尿液排出。分子式C10H14O8CaNa22H20，水中溶解度100g/l，LD₅₀腹腔注射(i.p.r.)大鼠397mg/kg(Material Safety Data Sheets http://msds.chem.ox.ac.uk/ED/EDTA.html)，肌肉注射(i.m.)大鼠LD₅₀不明。

生物材料

140只动物，雄性和雌性Wistar大鼠，被用于本实验。所有动物随机分为6组，其中4组每组30只(10只雄性和10只雌性)，另外2组每组10只动物(5只雄性和5只雌性)，饲养在合适环境中并自由取食和饮水，不接触任何杀虫剂。

溶液给药的方法

1.醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量和20ml/kg的体积口服给药于3组不同组的大鼠。

2.铅给药之后，二巯基丙醇(BAL)立即以25.2mg/kg的剂量肌肉注射给药于大鼠，BAL给药之后EDTA以30mg/kg的剂量肌肉注射给药。BAL+EDTA给药每天重复1次持续7天。大鼠肌肉注射LD₅₀尚不明确。人类铅毒性脑病中BAL+EDTA最高可能剂量为BAL 3-5mg/kg每4小时，EDTA30mg/kg/天分为2-3次剂量(Medical Toxicology，Richard Dart ed.III)。给药剂量与人类中的最大可能剂量相似。

3.铅给药之后，厄多司坦立即以350mg/kg的剂量静脉注射给药于大鼠。厄多司坦给药天重复1次持续7天。350mg厄多司坦与118mg碳酸氢钠溶于2ml重蒸馏水中(不同于实施例2中的10ml)。

4.中毒之后，首先立即给药厄多司坦，然后快速BAL(给药)，之后EDTA，依次多操作给药，以模仿人体在可以灌注静脉注射的同时肌肉注射给药的时候的状况。

动物监控：

在给药重金属7天之前开始监控动物，评价其体重和常规健康。在溶液给药24小时之前，动物受限摄食并自由饮水。

动物被监控常规健康、中毒信号和最重要的死亡率。在处理之后72小时和7天，测试固定数量的存活者的下述参数：血红蛋白(Hb)，红细胞压积(Hct)，平均血球血红蛋白(MCH)，红细胞(RBC红细胞)、白细胞(WBC白细胞)和血小板(PLT血小板数)的平均数量，以及尿液中的尿素，尿酸，AST，ALT，尿汇总，Pb。

实验步骤

比较了Pb中毒组未处理、传统治疗(TT)BAL+EDTA肌肉注射处理、厄多司坦静脉注射处理、传统治疗(TT)BAL+EDTA+厄多司坦静脉注射联合处理。

测试了静脉注射配方以鉴定具有厄多司坦∶碳酸氢钠摩尔比为2∶1、1.5∶1、1∶1、1∶1.5、1∶2的范围内的溶解性。已经溶解的配方的稳定性在立即(第0天)和第1天、第3天、第7天、第12天、第30天分别通过RMN光谱用Varian核磁共振波谱仪来测试。溶液室温保存，大约25-28℃。

记录了死亡率。中毒并开始处理72小时和7天之后存活者测试了如上所指定的生物化学和血液病学参数，以评价处理的效果。7天之后通过膀胱穿刺来收集尿液。

铅中毒动物中厄多司坦效果的评价

如前所介绍的4组每组30只动物(15只雄性和15只雌性)以及1组10只动物如下操作：

组1-空白对照，未中毒并未处理(10只大鼠)。

组2-Pb中毒并且未处理，醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。

组3-Pb中毒并用传统治疗(TT)处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即给药BAL+EDTA(TT)并每天一次持续7天。更多操作连续工作以快速完成。

组4-Pb中毒并用厄多司坦和TT处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即给药厄多司坦和TT并每天一次持续7天。

组5-Pb中毒并用厄多司坦处理。该组醋酸铅以4665mg/kg(1LD₅₀)的剂量口服给药。中毒之后立即以350mg/kg给药厄多司坦并每天一次持续7天。

注射压力评价

如前所介绍，与其它5组平行地，1组10只动物(5只雄性和5只雌性)如下操作：

组6-对这些动物以总体积2ml/kg缓慢静脉给药重蒸馏水+118mg碳酸氢钠的溶液，以测试其注射压力。

厄多司坦配方毒性评价

如前所述的4组每组10只动物(5只雄性和5只雌性)如下操作：

组10-厄多司坦3500mg/kg静脉注射中毒，4.37g厄多司坦+1.48g碳酸氢钠溶于25ml，以2ml/100g动物体重给药。

组11-厄多司坦4000mg/kg静脉注射中毒，如组10，以2.28ml/100g动物体重给药。

组12-厄多司坦4500mg/kg静脉注射中毒，4.5g厄多司坦溶于20ml，以2ml/100g动物体重给药。选择该溶解体积是为了保持相似的注射体积。

组13-厄多司坦5500mg/kg静脉注射中毒，如组12，以2.44ml/100g动物体重给药。

统计学分析

用卡方检验分析死亡率。

其它结果的统计学分析用t-学生分布检验、削弱变量通过Origin5.0软件进行。p＜0.05的结果被认为是统计学显著的。

分析仪器

生物化学检测用Refloton 2000进行，血液学检测用Hemastar 4，尿液汇总用Urilux，尿液中的Pb用GC-MS Varian。

实施例3结果

死亡率

评价了厄多司坦∶碳酸氢钠摩尔比从2∶1到1∶2范围的配方。

摩尔比2∶1和1.5∶1的配方溶解不好。

摩尔比1∶1的配方溶解得好，并且降解产物在第7天检测不到，在第12天开始检测到。

摩尔比1∶1.5的配方溶解得好，并且降解产物在第7天开始检测到。

稳定性数据建议我们使用3.5g厄多司坦+1.18g碳酸氢钠溶于20ml的配方，用磁性搅拌子搅拌5分钟并微热2分钟。大鼠以2ml/kg体重给药。

死亡率

表11：Pb中毒中厄多司坦静脉注射的保护的评价，与未处理、TT处理、厄多司坦+TT联合和厄多司坦单独处理对比。

2对比3统计学不显著

2对比4统计学显著p＜0.001

2对比5统计学显著p＜0.001

3对比4显著p＜0.05

3对比5显著p＜0.05

4对比5统计学不显著

厄多司坦处理，与TT联合或单独，显示出降低了死亡率。TT处理与未治疗相比没有统计学差别。厄多司坦处理与TT处理相比减少了死亡率。厄多司坦单独和与TT联合处理的差别不显著。

存活者

存活者的结果列于下表。

72小时的结果显示出与7天的结果相类似的趋势，因此没有列出。

表12：厄多司坦静脉注射处理7天后的效果，与未处理和TT相比。

¹与组2相比差异显著

²与组1相比差异不显著

³与组3TT处理相比差异显著

对于所考虑的大多数参数，厄多司坦与TT一起处理或单独处理显示出比TT(BAL+EDTA)处理显著更好的结果。

对于尿素、AST和ALT，厄多司坦与传统治疗(TT)联合处理的组显示与未中毒组没有差别。

对于ALT，厄多司坦单独处理的组显示与未中毒组没有差别。

表13：末期的尿液汇总

二巯基丙醇+EDTA处理(TT)没有对抗肾脏侵害。厄多司坦处理与TT相比显示出进步。厄多司坦与传统治疗的联合似乎在肾小管和肾小球功能两方面都以最好的效果降低了伤害。

表14：实验末期存活者尿液中的Pb。

组4和5相比组3差异显著

组4相比组5差异显著

毒物的加速排出是处理有效的间接证据。厄多司坦处理组的尿液中铅水平的增加显示出螯合活性更好的效果。Pb排出的最高水平在TT和厄多司坦联合处理中获得。

厄多司坦毒性评价

表15

评价了350mg厄多司坦+118mg碳酸氢钠的配方的毒性(显示最好的稳定性数据的配方)。

组12和13中使用的溶液并非完全清澈，显示可能已经超过溶解度的限制。组12和13中的死亡率可能也是由于增加厄多司坦压力的原因。

这些结果显示我们所用的剂量低于LD50的1/10，提供了需要的情况下增加剂量的理论依据。

实施例3讨论

与在所有教科书中通常存在的治疗方法相比，厄多司坦处理显示显著降低了死亡率。

厄多司坦单独处理，和厄多司坦与TT联合处理组的死亡率没有差别。存活者中最好的数据是加入厄多司坦时得到的。

重金属的尿液排出，同其他实验中确认的一样，支持如下的机理假说：稳定的结合毒物，形成无毒性或低毒性的化合物。该化合物可以通过尿液很容易的排出。传统试剂并不是与有毒金属离子特异性螯合，而是也与对平常的生理学功能所必需的元素例如钙和锌有反应。低的内源毒性可以由厄多司坦的高选择性解释，这也解释了获得的更好的结果。

实施例4

第四个实施例体现在扑热息痛中毒的大鼠中评价了静脉注射给药厄多司坦的效果，以未处理和NAC处理作为参照。该实施例表明厄多司坦用作宽范围的解毒剂，因为扑热息痛在化学上与重金属没有联系。

材料与方法

所用物质和溶液

1.扑热息痛(分子式C₈H₉NO2，水中溶解度14g/l，大鼠LD50口服1944mg/kg(Toxicology and Applied Pharmacology vol 18，pg 187，1991)

2.N-乙酰半胱氨酸，同前面实施例

3.厄多司坦，同前面实施例

生物材料

90只动物，雄性和雌性Wistar大鼠被用于本实验。本实验与实施例3中的实验平行进行，以没有中毒没有处理的动物(组1)的结果作为参照。动物随机分为3组，每组30只(10只雄性和10只雌性)，饲养在合适环境中并自由取食和饮水，不接触任何杀虫剂。

溶液的给药方法：

1.扑热息痛以1944mg/kg(1DL50)的剂量和20ml/kg的体积口服给药。

2.给药扑热息痛后，厄多司坦以350mg/kg的剂量立即对大鼠静脉注射给药。厄多司坦给药每天重复1次持续7天。350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠一起溶解在2ml双蒸馏水中(不同于实施例2制备中的10ml)。

3.在给药扑热息痛后，NAC以114mg/kg(1/10的LD50，理论上认为的有效剂量)于大鼠尾静脉注射(i.v.)给药。NAC给药每天重复1次持续7天。NAC溶入重蒸馏水中。

动物监控：

在给药扑热息痛7天之前开始监控动物，评价体重和常规健康。在溶液给药24小时之前，动物限制摄食和自由饮水。动物如实施例3所述进行监控。

实验步骤

比较了扑热息痛中毒未处理、NAC处理、厄多司坦静脉注射处理的组。

记录死亡数。为了评价处理效果，在中毒后和处理开始的72小时和7天，测试存活者的之前指定的参数，以评价处理的效果。

扑热息痛中毒动物中的厄多司坦效果的评价

引入3组每组30只动物(15只雄性和15只雌性)，并考虑前述实验(在相同时间平行进行的实验)的组1，如下所述：

组1-空白对照，未中毒并未处理(10只大鼠)

组7-扑热息痛中毒并未处理，扑热息痛以1944mg/kg(1LD50)的剂量口服给药。

组8-扑热息痛中毒并用厄多司坦处理，扑热息痛以1944mg/kg(1LD50)的剂量口服给药。中毒后立即给药350mg/kg的厄多司坦，然后每天一次持续7天。

组9-扑热息痛中毒并用NAC处理，扑热息痛以1944mg/kg(1LD50)的剂量口服给药。中毒后立即给药114mg/kg的NAC，然后每天一次持续7天。

统计学分析和分析仪器

如实施例3所述

实施例4结果

死亡率

表16：与未处理、TT处理、联合厄多司坦+TT和单独的厄多司坦相比，静脉注射(iv.)厄多司坦对Pb的保护的评价

7对比8统计学显著    7对比9统计学显著

8对比9统计学不显著

1对比8统计学不显著  1对比9统计学不显著

与中毒并没有处理组相比，NAC和厄多司坦处理都显著地降低了死亡数。厄多司坦或NAC处理没有统计学上显著地差异。由于动物数量少，中毒并处理组与未中毒组之间也没有统计学差异。

存活者

扑热息痛中毒不影响参数Hb、白细胞(WBC)、MHC(结果未示)。在72小时的结果显示了与7天相似的趋势。表中是在7天的数据。

表17：厄多司坦静脉注射对扑热息痛中毒的影响

¹与组1相比的差别显著

²与组1相比的差别不显著

³与组9NAC处理相比的差别显著

从一些参数中表明厄多司坦处理中和了存活者中的扑热息痛的中毒效果。NAC处理没有中和毒性效果。

表18

NAC和厄多司坦处理都对抗了肾侵害，厄多司坦处理显示了更好的趋势。

实施例4讨论

厄多司坦处理与未处理组相比显示了死亡率的减少，Nac处理也一样。在存活者中，厄多司坦处理显示了比NAC更好的对抗毒性作用。厄多司坦也在与重金属在结构上不同的毒性化合物上作为解毒剂的作用支持了厄多司坦用作宽范围解毒剂的设想。

实施例5

第5个实施例评价厄多司坦给药作为预防重金属中毒的效果。实验的构造是用于在一特定场合，由于职业的或其他原因可能有更高地中毒危险的受试者。中毒后，动物被静脉注射处理。

材料和方法

本实验与实施例3平行进行。凡未指定的均与实施例3相同。

实验步骤

组14有30只Wistar大鼠(15只雄性和15只雌性)的组引入本实验。

在第-2天、第-1天和第0天，动物口服给药300mg/kg厄多司坦。在第0天，给药厄多司坦4小时后，动物如实施例3所述的铅中毒。铅中毒后，用实施例3所述的相同的治疗方案，动物用350mg/kg厄多司坦处理。在中毒前的第0天，对动物生物化学和血液学的参数(如实施例3，除了尿收集和尿中的铅)进行测定，并在处理的第7天，测定存活者的确定数目的相同参数。因为实验是平行进行且结果可比较，所以结果与组2相比较。

实施例5结果

存活率

表19：厄多司坦预防的评价

¹与组1相比显著的

²与组1相比不显著的

组2对比组14p＜0.001

与未处理组相比，厄多司坦口服预防处理和随后静脉注射处理减少了死亡率。组1和组14之间没有显著性差异，而组1和组5之间有显著差异；这一元素显示了预防对死亡率的高影响。

存活者

表20：厄多司坦预防在存活者中的评价

¹与组14第0天相比没有显著性差异

²与组1相比没有显著性差异

³与组1相比没有显著性差异

组1和组14第0天之间的差异不显著表明了厄多司坦预防是安全的，并且没有影响生命参数。厄多司坦预防和处理具有对抗中毒的效果，组2和组14在第7天有显著差异。与没有预防的组5相比，一些生命参数在组14中得到改善，表明了预防的有效性。

实验5讨论

构造了用于模拟受试者由于不同原因可能处于更高中毒危险的情形的模型。

口服厄多司坦产生的巯基的预防性负载帮助了中毒后的静脉注射处理，且没有影响中毒前的常规健康。相对于未处理，死亡率得到了降低。预防组和未中毒组在死亡率上没有统计学上的差异；我们假设这是由于相对小的数量的动物。另一方面，没有预防的处理组和没有中毒组之间的死亡率的差异是显著的。

存活者中，与没有处理和没有预防的处理相比，预防改善了生命参数。预防可容易地口服获得。

结果表明用厄多司坦预防可能对具有重金属中毒风险的受试者有帮助。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.厄多司坦用于重金属中毒中的预防处理或解毒剂。

2.根据权利要求1的厄多司坦，其中所述重金属是铅或汞。

3.根据权利要求1或2的厄多司坦，其中所述厄多司坦是注射剂型。

4.根据权利要求1或2的厄多司坦，其中所述厄多司坦是口服剂型。

5.根据权利要求3的厄多司坦，其中所述注射剂型包括厄多司坦和碳酸氢钠，其摩尔比在1∶2～2∶1的范围内。

6.根据权利要求5的厄多司坦，其中所述注射剂型包括厄多司坦和碳酸氢钠，其摩尔比为1∶1。

7.根据权利要求6的厄多司坦，其中所述注射剂型包括350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠在2ml或其倍数重蒸馏水中。

8.根据权利要求6的厄多司坦，其中所述注射剂型包括175mg厄多司坦和59mg碳酸氢钠在10ml重蒸馏水中；或者350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠在10ml重蒸馏水中。

9.注射剂型，包含厄多司坦和碳酸氢钠，其摩尔比在1∶2～2∶1范围内。

10.根据权利要求9的注射剂型，其包含厄多司坦和碳酸氢钠，摩尔比为1∶1。

11.根据权利要求10的注射剂型，其包含350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠在2ml或其倍数重蒸馏水中；或者175mg厄多司坦和59mg碳酸氢钠在10ml重蒸馏水中；或者350mg厄多司坦和118mg碳酸氢钠在10ml重蒸馏水中。

12.厄多司坦用于扑热息痛中毒中的解毒剂，其中所述厄多司坦以权利要求9-11中任意一项所定义的注射剂型给药。