一种用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，尤其涉及一种用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法。

背景技术

李砧玛丽安娜无性砧是优良半矮化砧木品种之一，其根系发达、产量高，成年树相对矮小，适于密植和保护地栽培。同时对潮湿土壤适应性强，对真菌引起的各类病害和线虫有较强抗性，是嫁接梨、扁桃、李子等的标准砧木，可以作为抗线虫砧木的首选品种。

国内核果类苗木繁殖和培育主在存在以下问题：(1)目前选择的砧木主要以实生砧为主，例如陕甘山桃、山桃、毛桃等，具有较强的抗寒、抗旱、耐盐碱能力，与油桃的嫁接亲合性好等优点。但树体结果期偏晚，易受线虫、根癌病、根腐病和真菌的侵染；(2)育苗方式主要以常规的繁殖手段，常规的大田育苗劳动强度大，育苗周期长，受到自然环境影响大，苗木的质量不易保证，特别是在种子或插条等繁育材料紧缺的情况下，常规繁殖手段会受到极大的制约。

发明内容

本发明提供了一种用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法，旨在解决目前对李砧玛丽安娜无性砧组培的研究并不充分、全面以及采用常规的繁殖手段时，李砧玛丽安娜的苗木质量不能保证的问题。

本发明的目的在于提供一种用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法，所述方法包括以下步骤：

准备越冬枝条；

以越冬的休眠枝条叶片为外植体；

对培养基的设计筛选及对愈伤组织的诱导；

对生根培养基进行研究筛选。

本发明提供的用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法，该方法根据植物叶片再生原理，首先准备越冬的枝条，以越冬的休眠枝条的叶片为外植体，接种至培养基上进行愈伤组织诱导的培养基设计筛选，然后对生根培养基进行研究筛选，从而获得了诱导培养基及生根培养基的最佳的激素配方，方法简单实用，解决了采用常规的繁殖手段时，苗木质量不能保证的问题，实现了对李砧玛丽安娜无性砧组培技术系统地研究，为砧木的工厂化、标准化和规模化生产奠定了基础。

附图说明

图1示出了本发明实施例提供的用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法的实现流程图；

图2示出了本发明实施例提供的越冬的休眠枝条处理培养为外植体的实现流程图；

图3示出了本发明实施例提供的对愈伤组织诱导培养基进行研究的实现方法的流程图；

图4示出了本发明实施例提供的对生根培养基进行研究的实现方法的流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步的详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定发明。

图1示出了本发明实施例提供的用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法的实现流程。

该方法包括以下步骤：

在步骤S101中，准备越冬枝条；

在步骤S102中，以越冬的休眠枝条叶片为外植体；

在步骤S103中，对培养基的设计筛选及对愈伤组织的诱导；

在步骤S104中，对生根培养基进行研究筛选。

在本发明实施例中，准备越冬枝条的实现方法：

在冬季来临时剪下生长健康植株的枝条埋于地下，并覆盖土5～6cm。

如图2所示，在本发明实施例中，以越冬的休眠枝条叶片为外植体包括以下步骤：

在步骤S201中，次年开春后将上年越冬的的枝条取出，去泥沙后以一芽一茎段剪下，插在培养土中，放在光照培养箱里；

在步骤S202中，在温度26～28℃下，每天3000L ux光照处理12小时，透气1～2次，透气时间视室外温度而定；

在步骤S203中，当枝条的叶子展开时，对外殖体的叶子进行灭菌处理。

在本发明实施例中，对外殖体进行灭菌的实现方法为：

先用75％酒精处理5～6s，然后用加有2～3滴吐温的0.1％升汞消毒5～6min；

消毒后用无菌水冲洗5～6遍，每遍2min。

如图3所示，在本发明实施例中，对愈伤组织诱导培养基进行研究的实现方法的实现方法为：

在步骤S301中，在MS培养基中，加入不同浓度的NAA、6BA和2，4-D构成12种激素配比的培养基；

在步骤S302中，将消毒好的无菌外植体叶片切成0.7cm×0.7cm左右大小，分别接种在上述愈伤组织诱导培养基上。每种培养基接25瓶，每瓶5～6个；

在步骤S303中，愈伤组织的诱导率的计算；

在步骤S304中，根据诱导效果，确定最佳诱导愈伤组织的培养基。

在本发明实施例中，12种诱导培养基的激素配比如下：

配比1：1.5mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比2：1.5mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D；

配比3：1.5mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比4：1.5mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D；

配比5：1.0mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比6：1.0mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D；

配比7：1.0mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比8：1.0mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D；

配比9：0.5mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比10：0.5mg/L NAA，1.0mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D；

配比11：0.5mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，1.0mg/L2，4-D；

配比12：0.5mg/L NAA，0.5mg/L 6-BA，0.5mg/L2，4-D。

如图4所示，在本发明实施例中，对生根培养基进行研究筛选的实现方法为：

在步骤S401中，在1/2MS培养基中加入1.0g/L的活性炭，再添加IAA和6-BA配比构成9种不同激素组合的生根培养基；

在步骤S402中，将已长成的愈伤组织在分化培养基

MS+NAA0.2～0.5+6BA0.5～1培养后；

在步骤S403中，分别转接到上述不同配比激素组合的1/2MS培养基上，每种培养基接25瓶，每瓶5～6个；

在步骤S404中，观察生根条数和生根率，筛选生根培养基配方。

在本发明实施例中，所述9种加入IAA和6-BA不同浓度组合的生根培养基如下：

配比1：0.5mg/LIAA，0.1mg/L 6-BA；

配比2：0.5mg/LIAA，0.3mg/L 6-BA；

配比3：0.5mg/LIAA，0.5mg/L 6-BA；

配比4：0.3mg/LIAA，0.1mg/L 6-BA；

配比5：0.3mg/LIAA，0.3mg/L 6-BA；

配比6：0.3mg/LIAA，0.5mg/L 6-BA；

配比7：0.1mg/LIAA，0.1mg/L 6-BA；

配比8：0.1mg/LIAA，0.3mg/L 6-BA；

配比9：0.1mg/LIAA，0.5mg/L 6-BA。

本发明实施例提供的用于研究李砧玛丽安娜无性砧组培的方法，该方法根据植物叶片再生原理，首先准备越冬的枝条，以越冬的休眠枝条的叶片为外植体，接种至培养基上进行愈伤组织诱导的培养基设计筛选，然后对生根培养基进行研究筛选，从而获得了诱导培养基及生根培养基的最佳的激素配方，方法简单实用，解决了采用常规的繁殖手段时，苗木质量不能保证的问题，实现了对李砧玛丽安娜无性砧组培技术系统地研究，为砧木的工厂化、标准化和规模化生产奠定了基础。

以上仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。