左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质的合成及其制备和检测方法

技术领域

本发明涉及药物化学领域，具体涉及一种左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质、及其合成与分离测定方法。 

背景技术

磷酸酯化是一种常见的前体药物设计方法，可提高母体药物的水溶性、改善药代动力学性质、提高靶向性、减少药物毒副作用、增加药物稳定性等，在现代药物研发中得到了广泛的重视与应用。 

左旋奥硝唑磷酸酯二钠正是依据这一原理开发得到的一种结构新颖的化合物，本品作为左旋奥硝唑的前提药物，其较奥硝唑具有显著的临床优势，近年来处于临床研究阶段，有潜力作为新一代的抗菌药物应用于临床。 

研究表明，左旋奥硝唑磷酸酯二钠及其制剂在长期留样过程中易发生降解，形成微量杂质，见附图3，限度可达2.5％左右，对左旋奥硝唑磷酸酯二钠原料的纯度及制剂的安全性有重要影响。目前，现有技术中没有关于该左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质及其制备和分析方面的报道。 

发明内容

本发明的目的是解决上述技术问题，提供一种左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质化合物。 

本发明的另一个目的是提供制备上述左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质化合物的方法。 

根据上述目的，本发明的技术方案如下： 

本发明人通过采用大量的左旋奥硝唑磷酸酯二钠长期留样样品，进行色谱柱分离，制备得到mg级杂质样品，经研究，所述杂质为左旋奥硝唑磷酸酯二钠环合物，该化合物的结构式 如式(I)所示： 

本发明还提供上述式(I)化合物的制备方法，包括步骤： 

1)将左旋奥硝唑磷酸酯二钠在催化量KI作用下进行反应； 

2)反应完毕后，将反应液浓缩得到油状物； 

3)向油状物中加入极性溶剂进行提取，提取液浓缩得到化合物I； 

4)化合物I粗品进行纯化即得精制后的化合物I。 

所述步骤1)是在KI的催化下进行，左旋奥硝唑磷酸酯二钠发生分子内脱NaCl反应，主产物为目标化合物I，副产物即为脱NaCl形成的无机盐。 

所述步骤1的左旋奥硝唑磷酸酯二钠与KI的质量比例为(10～50)：1,优选20：1。。 

所述步骤1中的反应在有机溶剂中进行，反应温度的提升有助于加快反应速度，反应温度的选择与反应溶剂的沸点相关。优选与溶剂的沸点相当或者接近。 

所述的有机溶剂包括甲醇，乙醇，丙酮等的一种或多种，优选甲醇；所述步骤1)的反应温度为10至70℃，优选50℃。 

步骤3)中所述的极性溶剂包括甲醇、丙酮、乙醇的一种或多种，鉴于无机盐NaCl是该反应的主要副产物，考虑化合物I与NaCl均具有良好的水溶性，因此采用常规的有机溶剂溶解，水洗涤的方法，不适用该产品的脱盐操作。为此，本发明以有机溶剂提取，且有机溶剂的极性相对较大，主要采用甲醇，乙醇及丙酮等常规的极性溶剂，目的在于将产品萃取至有机溶剂中，而此类溶剂对无机盐溶解度很低，从而达到去除反应过程中形成的无机盐的目的。 

所述剂型溶剂为甲醇与丙酮的混合物溶剂，甲醇与丙酮的体积比为1：0.5～5，优选1：1。 

所述剂型溶剂的用量：左旋奥硝唑磷酸酯二钠与所述极性溶剂的质量/体积比为1：2～5 

步骤4中所述的纯化包括使用柱层析进行纯化，固定相为正相硅胶，展开剂为乙酸乙酯，甲醇，乙醇及其混合物，优选乙酸乙酯与甲醇的3：1的混合液。采用柱层析进行纯化的优点在于：1)可显著提高产品的HPLC纯度，达99％以上；2)可去除粗品中少量无机盐。 

本发明还提供一种色谱分离左旋奥硝唑磷酸酯二钠与所述杂质的方法，从而为定量分析左旋奥硝唑磷酸二酯钠中的限度提供依据。其特征在于，它包括采用反相高效液相色谱法进行分离，其中色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶(Diamonsil C18250mm×4.6mm×5μm)；流动相为0.05mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(三乙胺调pH＝6.5)－甲醇(75:25)；检测波长为312nm；流速为1.0ml/min。 

有益效果： 

本发明分离获得并确认了左旋奥硝唑磷酸酯二钠的杂质及其化学结构，并且通过本发明提供的化学合成法，可以大量制备该杂质化合物，以100g左旋奥硝唑磷酸酯二钠为原料，经反应和纯化后至少可得到约20g的杂质化合物，纯度大于99.0％，满足作为杂质对照品的纯度要求，解决了通过左旋奥硝唑磷酸酯二钠自身原料降解进行富集并分离纯化这一杂质的难题，仅仅通过富集，仅能得到微量杂质，不利于制备化学对照品的问题。 

本发明提供了对左旋奥硝唑磷酸酯二钠进行质量控制的重要的依据，进而有效的控制左旋奥硝唑磷酸酯二钠原料的质量标准，从而提高左旋奥硝唑磷酸酯二钠的临床使用的安全性与有效性。 

附图说明：

1.左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质¹HNMR色谱图 

2.左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质TOF-MS色谱图 

3.左旋奥硝唑磷酸酯二钠加速试验纯度检查图 

4.左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质HPLC纯度检查图 

5.左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质与左旋奥硝唑磷酸酯二钠混合样色谱图 

6.左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质化学结构式图 

具体实施方式：

以下实施例仅用于解释说明本发明，而不是对本发明范围的限制。 

实施例1左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质的柱层析及结构确证 

取左旋奥硝唑磷酸酯二钠原料100g，HPLC纯度检查结果显示该杂质达到2.5％，以柱层析硅胶为填充剂，乙酸乙酯：甲醇(3：1)为洗脱剂进行洗脱，采用TLC或HPLC监控洗脱液纯度。收集洗脱液，减压浓缩至干即得该化合物，约25mg。结构确证信息如下: 

¹HNMR(DMSO-d)：2.51(3H，s，-CH3),3.78(1H，m，1/2-CH₂O-),4.11(1H，m，1/2-CH₂O-)，4.33(1H，m，1/2-CH2-N-),4.41(1H，m，-CH-),4.53(1H，m，1/2-CH2-N-)； 

TOF-MS(M/z):262.0[M-Na]^-

实施例2左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质的制备 

左旋奥硝唑磷酸酯二钠20g，加入甲醇150ml，KI 1.0g，加热至50℃搅拌反应约1h，将反应液浓缩至干，向浓缩物中加入甲醇：丙酮(4：1)约50ml，搅拌30min，过滤除去不溶物，浓缩提取液，以柱层析硅胶为填充剂，乙酸乙酯：甲醇(3：1)为洗脱剂进行洗脱，采用TLC或HPLC监控洗脱液纯度。收集洗脱液，减压浓缩至干即得左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质4.3g。 

实施例3左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质的制备 

左旋奥硝唑磷酸酯二钠100g，加入乙醇1000ml，KI 5.0g，加热至70℃搅拌反应约1h，将反应液浓缩至干，向浓缩物中加入乙醇：丙酮(10：1)约250ml，搅拌30min，过滤除去不溶物，浓缩提取液，以柱层析硅胶为填充剂，乙酸乙酯：甲醇(4：1)为洗脱剂进行洗脱，采用TLC或HPLC监控洗脱液纯度。收集洗脱液，减压浓缩至干即得左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质31g，HPLC纯度为99.5％，见附图4。 

实施例4左旋奥硝唑磷酸酯二钠与左旋奥硝唑磷酸酯二钠的色谱分离 

1、仪器与试剂 

仪器：安捷伦2100高效液相色谱仪，色谱级甲醇 

2、色谱条件 

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(Diamonsil C18250mm×4.6mm×5μm)； 

流动相：0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(三乙胺调pH＝6.5)－甲醇(75:25)； 

检测波长：312nm； 

流速：1.0ml/min。 

3、实验步骤： 

精密称取左旋奥硝唑磷酸酯二钠及环合物分别约10.0mg，置10ml量瓶中，加0.1mol·L-1磷酸二氢钾溶液稀释至刻度，摇匀。精密量取混合溶液20μl，在上述色谱条件下进样，对左旋奥硝唑磷酸酯二钠与左旋奥硝唑磷酸酯二钠进行分离检测，左旋奥硝唑磷酸酯二钠杂质的保留时间为3.797min，左旋奥硝唑磷酸酯二钠的保留时间为9.966min，两色谱峰完全分离，符合《中国药典》关于分离度的相关要求，见附图5。