一种高纯度的中药丹参有效成分丹酚酸B的制备方法、药物制剂及临床应用

技术领域

本发明涉及一种药物有效成分的制备方法、制剂及临床应用，尤 其是从中药丹参制备丹酚酸B的方法、药物制剂及其临床应用，属于 中药技术领域。

背景技术

心脑血管疾病是中老年人常见病、多发病之一，全世界每年有 6000万病人接受肝素治疗(其中我国有1000万以上)。用化学药治 疗各种血栓栓塞疾病效果不尽理想，且不能标本兼治，中药治疗多能 标本兼治，但因中药质量受产地、生长环境、生长年限等多因素制约， 其有效成分悬殊很大，因而造成中药的疗效不稳定，测定或提取中药 的有效成分，制定数字化量化的质量标准是中药现代化当务之急。中 药丹参注射液、三七注射液、脉络宁注射液是目前用于治疗血管闭塞 性疾病的常用药，用于保护心肌缺血、缺氧，改善微循环，降低血液 粘度，抑制血小板聚集，血栓形成，中枢镇静及抗菌消炎等，治疗胸 中憋闷，冠心病，心绞痛和心肌梗塞，脉管炎等疾病，取得了令人满 意的效果。

丹参是最重要用量最大的祛瘀剂之一，丹参制剂品种较多，产量 较大，据不完全统计，每年仅丹参注射液的用量就达到30亿支以上， 丹参滴注液数亿瓶。仅丹参滴丸的年销售额达10亿元以上。丹参注 射剂工艺技术日益提高，其活性最强的丹酚酸B含量已达到50％-80％， 并且制定了数字化量化的质量标准，这无疑是中药注射剂领域一大突 破。申请人了解到现有技术中已存在从中药丹参药材中提取分离纯 化，制备高纯度丹酚酸B，具体见表1。

表1已有专利制备丹酚酸B的流程一览表

上述专利技术或工艺过程复杂，或费时，或费事，或耗煤耗能，或成本 太高，或仅为小试，或未见收率。现有的技术存在两大瓶颈，一是工艺 繁琐，大多要经4-5步反复处理过柱，很难实现连续化工业化生产；二 是丹酚酸B的稳定性相对较差，在加热提取和分离纯化过程中产生的降 解和转化率在10％～15％，总收率较低。特别是用减压加热浓缩分离纯化 得到的丹酚酸B纯度在98.5％以上稀洗脱液过程中造成降解约5％，使已 经纯化好的产品又不合格，并且是很难弥补的。凡此,本领域迫切需要一 种绿色化、智能化、工艺简单、收率高、成本低、能工业化的制备高纯 度丹酚酸B的工艺，尽快使丹酚酸B作为一类新药推上临床，为人类的 健康服务。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术存在的缺陷，提供一种制备高纯 度丹酚酸B的方法、制剂及其应用，实现完全绿色化、智能化，操 作更简单，收率更高，成本更低的目的。

本发明通过以下技术方案解决技术问题：一种高纯度的中药丹 参有效成分丹酚酸B的制备方法，包括以下步骤：

第一步，将丹参药材在室温下以水为溶剂进行常规搅拌提取， 提取时间5-10分钟，丹参药材与水之比为1︰4-10，得到提取液；

第二步，调整所述提取液的pH为5.0-6.5(优选是5.5-6.0) 后，再过大孔树脂树脂柱，分离、纯化，得到第一次洗脱液；

第三步，调整所述第一次洗脱液的pH为1.5-3.5(优选是 2.0-2.5)后，第二次过大孔树脂柱，富集得到第二次洗脱液；

第四步，将所述第二次洗脱液过滤，滤液经过喷雾干燥，得到丹 酚酸B。

发明人在制备丹酚的研究中发现，丹参中的丹酚酸B在长时间高 温水煮、高温高压灭菌和强酸强碱调节pH的过程中有10-15％的丹酚 酸B被降解转化为丹参素、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸D、丹酚酸 E等，采用超短时间水提方法即所述第一步中，提取的次数为2次， 第一次提取时间10分钟，丹参药材与水之比为1︰10；第二次提取 时间5分钟，丹参药材与水之比为1︰4。所述提取液经过三足离心 机甩滤粗滤除去大部分滤渣后，调节滤液pH为3.0～4.0，再用错流 过滤精滤，调滤液pH为5.5～6.0，得提取液备用。

以上步骤的药渣经检测水溶性成分已经提取完全。该药渣可以加 乙醇使醇浓度达75％左右，搅拌提取丹参酮ⅡA等脂溶性成分；醇提 后的药渣可用来制备沼气，作为能源；制沼气的废料可做种植丹参的 肥料，如此实现了循环经济的目标。

本发明的提取方法完全避免了丹酚酸B的降解转化，既不需要像 浸渍、渗漉等提取花几十小时到一百多小时繁琐操作，也不要像闪式、 超声、微波、CO2临界萃取等需要特殊提取设备，省时省事，成本低 廉。实践证明，药材用“室温超短时间水常规搅拌提取”，提取液中 含丹酚酸B在80％左右(归一化法)，而用水煮醇沉老工艺得到的丹 参提取物中丹酚酸B的含量在10％以下(归一化法)，最差的工艺甚 至为3.6％。在丹参提取的工作中，水提取液的成分复杂，各种细小 的有机和无机的微粒，泥沙，皂甙，使其成为一种“类胶体”，过滤 很难，沉淀也很难，有时几天都沉淀不好，水提取液的过滤难以实现， 500L丹参水提取液过滤需要3-4个人忙碌10小时以上，过滤的质量 还得不到保证，过滤已成为生产的瓶颈，经反复摸索试验，用三足离 心机甩滤粗滤与错流过滤精滤联合应用，可以获得非常满意的过滤效 果，效率提高40倍以上，并且实现了人-机对话，智能化控制过滤。

在丹参提取液过分离2号或色谱3号大孔树脂之前，提取液的 pH必须调为5.0-6.5(优选是5.5-6.0)，否则是无法实现分离纯化， 洗脱得到的产物的纯度在85％以下；本发明调节的pH及其相关操作 与现有的专利文献报道截然不同，丹参水提液以3-9BV/h流速过大孔 树脂柱至结束，纯化水以3-9BV/h流速充分洗涤后，用15-25％乙醇 以3-9BV/h流速洗脱至无丹酚酸B止,丹酚酸B的分离纯化工作即告 完成，不需要反复蒸馏浓缩，反复调节酸碱、反复醇沉和反复上柱等 复杂的处理过程。操作简捷，收率可提高10％以上。如此操作，分离 纯化在一个树脂柱中完成，具体是所述第二步中，分离纯化时洗涤的 醇浓度为0％-15％，洗脱液的醇浓度为15％-25％；洗涤和/或洗脱速度 为2-10BV。大孔树脂柱为分离2号或色谱3号，树脂柱的径高比1 ︰8～15；提取液以3-9BV/h流速过大孔树脂至结束，纯化水以 3-9BV/h流速充分洗涤后，用15-25％乙醇以3-9BV/h流速洗脱至无丹 酚酸B止,丹酚酸B的分离纯化完成。所述提取液中丹酚酸B的量与 大孔树脂用量之比为1︰50-100。

本发明通过创造性劳动，反复试验，摸索出很稀的分离纯化洗脱 液过富集柱前，必须先调节稀洗脱液的pH1.0-3.5(优选是2.0-2.5)， 如果不调节pH，而将分离纯化的洗脱液直接过富集柱，会有15％-20％ 甚至更多的丹酚酸B泄漏，无法实现富集过程，调节稀洗脱液的pH 后，既可以增加树脂的吸附量，也能够降低泄漏率，富集的效果最理 想，富集时还可以用适量的纯化水洗涤以进一步纯化，即以3-9BV/h 流速过相同和/或不同的大孔树脂，用适量的稀乙醇洗涤后，再用 50％-95％乙醇洗脱至无丹酚酸B止即可，避免加热减压浓缩操作，不 仅节省能源，而且可避免引起丹酚酸B的降解转化，在浴温为40℃ 旋转蒸发时，会造成丹酚酸B的降解转化达5％，浴温越高，时间越 长，造成降解转化率越高，此时的降解转化会对产品纯度产生极其重 要的影响，并且是很难弥补的，因此本发明所述第三步中，富集时， 洗脱液以3-9BV/h流速过大孔树脂柱，所述大孔树脂柱是非极性或弱 极性的大孔树脂，如分离2号、色谱3号、D101、D101-1、AB-8中 的至少一种，用纯化水稀释的乙醇洗涤后，再以50％-95％乙醇洗脱至 无丹酚酸B止，丹酚酸B的富集完成。

所述第四步中，喷雾干燥的暖风温度为50℃±10℃，出风温度 为23℃±2℃，流速应以所用设备的生产能力而调定。高纯度丹酚酸 B的醇洗脱液的醇浓度约为70％左右，喷雾干燥，即得高纯度丹酚酸 B；如果其晶形、色泽或纯度不够理想时，可以重新精制，甚至重新 过柱，必要时可以加适量的针用活性炭助滤和脱色；本发明制备丹酚 酸B的提取率提高到到65％-76％(由于丹参药材中丹酚酸B的含量是 相差很大，本发明以丹参提取液中含有的丹酚酸B计)。

本发明进一步提供含有高纯度的中药丹参有效成分丹酚酸B及 药学上可接受的载体和制剂，方法可以是常规方法或新方法，如注射 用丹酚酸B、丹酚酸B注射液、可溶片、口崩片、分散片、滴丸、微 丸、控释片、控释微丸、软胶囊、片剂、胶囊、复方丹酚酸B制剂等 口服制剂，眼用制剂，凝胶剂，外用制剂等。

本发明再进一步提供上述制剂的在预防和治疗包括心脑血管、 肝、肾、眼科和烫伤在内的疾病的应用，是根据病人治疗需要，选择 适当剂型和剂量，治疗患者的心脑血管、肝、肾、眼科和烫伤外科等 疾病的治疗和心脑血管病等的预防。

本发明在从中药丹参药材中提取分离纯化制备高纯度丹酚酸B 的过程中，克服了技术困难，取得了突破性的进展，主要如下：

(1)室温超短时间的水常规搅拌提取，避免了因受热而引起 降解转化，收率提高10％以上；

(2)创造性运用调节溶液的pH，即将丹参提取液调pH为 5.5-6.0过柱，加很稀的乙醇梯度洗涤，再用稀乙醇洗脱，实现了一 次过柱达到了分离纯化的目的。稀洗脱液调pH为2.0-2.5，再一次 过柱完成了浓缩过程，既节省能源，又避免了降解转化的风险。

(3)克服了中药丹参提取液过滤难的工艺瓶颈，实现人-机 对话，智能化过滤，效率提高40倍以上，质量得到根本性保证；

(4)分离纯化的全过程都不加热，不仅提高了收率和纯度，而 且节省了大量的能源，减少了大量的废气排放，仅以生产1000支/ 瓶丹参注射剂而言，原来的水煮醇沉工艺，要耗标准煤1584吨，折 合人民币190.08万元，排放二氧化碳4150.08吨，二氧化硫13.464 吨，氮氧化物11.726吨。如果将年生产32-33亿支/瓶丹参注射剂(文 献数据，非精确统计)都用本发明的工艺，这个节能减排数量就非常 庞大了。本发明实现了工艺“完全绿色化”，耗能减排等都不存在。 丹酚酸B的制备方法和制备理念实际上是中药化学的一个崭新的研 究平台，丹参注射剂以及中药制药的若干品种都能用此方法和理念实 现上述目标，那将为我国的节能减排做出相当大的贡献。这不仅是丹 参制药行业的革命性变化，而且对整个中药制药行业将产生里程碑式 的影响。

附图说明

图1 丹酚酸B对照品的HPLC图谱。

图2 实施例11丹参提取液的HPLC图谱。

图3 实施例11放大验证制备的丹酚酸B的HPLC图谱。

图4 实施例11中试放大验证制备的丹酚酸B质谱图。

具体实施方式

实施例1

1、室温超短时间水常规搅拌提取.

将丹参药材粉碎，第一次加10倍量水室温搅拌提取10分钟，第二 次加4倍量水室温搅拌提取5分钟,合并提取液，粗滤除去大部分 滤渣后，调节滤液pH为3.0～4.0，再用错流过滤精滤，调滤液pH 为5.5～6.0，得提取液备用；

2.过大孔树脂分离纯化和富集

(1)第一次过柱分离纯化取提取液过大孔树脂分离二号柱，柱径: 柱高＝1:8，药材:树脂＝1:2，流速为2BV/h；然后依次用4～10BV的 水(流速为4BV～10BV/h)、3～5BV的1～5％乙醇(流速为4BV～ 8BV/h)、2～4BV 8％～10％乙醇洗(流速为4BV～6BV/h)洗涤大孔树脂 柱后，用6Bv～10BV16％～22％乙醇洗脱，前2BV可以每1BV接收，然 后每1/4BV分段接收，合并纯度98.5％以上洗脱液。

(2)第二次过柱富集纯度98.5％以上的洗脱液，加0.01％针用活 性炭，搅拌15分钟，脱碳、精滤，滤液pH调至2.0-2.5，过分离2 号大孔树脂柱(径高比为1︰9,每1000ml～2000ml上样液用100g 树脂)，先用2～5BV纯化水洗涤，再用2～3BV95％乙醇洗脱，每0.5BV 体积分段接收，合并99％以上洗脱液过滤；滤液喷雾干燥(35～ 45℃,40～60流量)，即得丹酚酸B，重18.3g，收率为71.53％(按 测得提取液的含量计)，纯度为99.11％(归一化)。图1为丹酚酸B 对照品的HPLC图谱，对照品来源是国家食品药品检定研究所，批号 为111562-201313(ID:6ZA6-B1NZ,纯度99.13％，归一化法。

实施例2

除分离纯化用大孔树脂(色谱3号)外，均与实施例1相同，总收率为 71.53％，纯度为99.17％。

实施例3

粗滤除去大部分滤渣后，先用0.45微米的微孔膜过滤，滤液再调pH 为3.0～4.0，其他配比和操作同实施例1，总收率为71.62％，纯度 为99.13％。

实施例4

提取用水量为12倍，其他配比和操作同实施例1，总收率为71.92％， 纯度为99.10％。

实施例5

提取用水量为15倍，其他配比和操作同实施例1，总收率为71.80％， 纯度为99.21％。

实施例6

用闪式提取两次，每次1分钟，其他配比和操作同实施例1，总收率 为71.78％，纯度为99.26％。

实施例7

用闪式提取两次，每次1分钟，其他配比和操作同实施例3，总收率 为72.1％，纯度为99.22％。

实施例8

第一次过柱分离纯化用大孔树脂为色谱3号，其他配比和操作同实 施例1，总收率为70.78％，纯度为99.17％。

实施例9

取丹参药材粉5kg，室温搅拌提取2次，每次10分钟，其他配比和 操作同实施例1，总收率为72.83％，纯度为99.20％。

实施例10

取丹参药材粉10kg，室温搅拌提取2次，每次10分钟，其他配比和 操作同实施例6，总收率为74.77％，纯度为99.28％。

实施例11

取丹参药材粉10kg，室温搅拌提取2次，每次10分钟，其他配比和 操作同实施例6，总收率为75.58％，纯度为99.37％。其中，丹参提取液 的HPLC图谱见图2，含丹酚酸B为83.16％，归一化法。放大验证制备的 丹酚酸B的HPLC图谱见图3，纯度为99.37％，归一化法。中试放大验 证制备的丹酚酸B质谱图见图4，据图计算，丹酚酸B纯度达99.97％。 以下实施例12-17为丹酚酸B的剂型的制备

实施例12

注射用丹酚酸B制备

处方

操作过程

1、溶液配制 取丹酚酸B、甘露醇、维生素C加注射用水至2500ml，搅 拌使溶解，取样测定丹酚酸B含量,调节含量在规定范围内，加针用活性 炭0.5g，搅拌15分钟，脱炭，备用溶液；

2、灌装 备用溶液经过0.2、0.2、0.1μm微孔膜折叠棒过滤，滤液分 装于10ml西林瓶中，每瓶2.5ml；

3、冷冻干燥 减压、冷冻、干燥24小时后，慢慢升至室温，再继续干 燥5小时，压紧丁基胶塞、解除压力，取出样品，扎盖，取样全检；

4、包装 产品贴标签/印字，包装，入库。

实施例13

注射用丹酚酸B制备

处方

操作过程

1、溶液配制 取丹酚酸B、甘露醇、亚硫酸氢钠加注射用水至2500ml， 搅拌使溶解，取样测定丹酚酸B含量,调节含量在规定范围内，加针用活 性炭0.5g，搅拌15分钟，脱炭，备用溶液；

2、灌装 备用溶液经过0.2、0.2、0.1μm微孔膜折叠棒过滤，滤液分 装于10ml西林瓶中，每瓶2.5ml；

3、冷冻干燥 减压、冷冻、干燥24小时后，慢慢升至室温，再继续干 燥5小时，压紧丁基胶塞、解除压力，取出样品，扎盖，取样全检；

4、包装 产品贴标签/印字，包装，入库。

实施例14

复方丹酚酸B片的制备

处方

操作过程

预处理

(1)取丹酚酸B、三七总皂苷、冰片乳糖、微晶纤维素、羟丙纤维 素、聚维酮K30、癸酸钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用；

(2)取PVP_K30加60％乙醇制成5％PVP_K3060％乙醇溶液，备用；

制粒干燥

(3)按等量递增的原则，量少的辅料相混合均匀，再与部分大量原 料混合，直至全部原辅料混合均匀；

(4)向混合均匀的原辅料中加入适量5％PVP_K3060％乙醇溶液充分搓 揉，制成软材；

(5)过20目筛制粒，置45±5℃烘箱中干燥真空干燥30-50分钟； 整粒与总混

(6)将烘干的颗粒过18目筛整粒，加入硬脂酸镁充分混合均匀；

(7)测中间体含量，计算应压片重；

压片与包衣

(8)根据计算的应压片重，压制素片；

(9)包薄膜衣(增重约为3％)，取样全检；

分装、贴标签、包装、入库

(10)将包衣的片剂分装、贴标签、包装、入库。

实施例15

复方丹酚酸B滴丸的制备

处方

操作过程

预处理

1、取丹酚酸B、三七总皂苷、冰片、癸酸钠、聚乙二醇6000、聚乙 二醇4000按等量递增的原则充分混匀，备用；

熔融搅拌

2、取备用物料，置熔料罐中，夹层通80±5℃水熔解搅匀(必要时 加纯水16.46g)；

滴制

3、经2.5mm滴口滴制滴丸，每分钟滴30滴，滴距为55mm，成形油 温为20～25℃

洗涤干燥；

4、将滴丸淋干冷却油，再用少量乙醇洗涤，风干至无乙醇味；

分装、贴标签、全检、包装、入库

5、将上述滴丸分装、贴标签、全检、包装、入库。

实施例16

丹酚酸B微丸胶囊的制备

处方

操作过程：挤出-滚圆法

预处理

1、取丹酚酸B、乳糖、微晶纤维素、羟丙纤维素、聚维酮K30分别 过80目筛，备用；

2、取PVP_K30加60％乙醇制成5％PVP_K3060％乙醇溶液，备用；

挤出-滚圆

3、按等量递增的原则，量少的辅料相混合均匀，再与部分大量原料 混合，直至全部原辅料混合均匀；

4、向混合均匀的原辅料中加入适量5％PVP_K3060％乙醇溶液充分搓揉， 制成软材；

5、挤压制成条状；

6、切断，经滚圆机滚圆，干燥；

测中间体含量

7、测中间体含量,计算应分装的剂量；

装胶囊

8、根据计算的重量装硬胶囊

分装、贴标签、全检、包装、入库

9、将装好的胶囊分装、贴标签、全检、包装、入库。

实施例17

丹酚酸B缓控释微丸胶囊的制备

丸芯1处方(快速释放)

包衣材料：包普通薄膜衣(绿色)

丸芯2处方(中速释放，缓释6h)

包衣材料：包EC衣(黄色)

丸芯3处方(缓速释放，缓释12h)

包衣材料：包丙烯酸树脂衣(红色)

操作过程：

预处理工序

1、分别取各处方项下原、辅料分别过80目筛，备用。

混料与制丸

2、分别称取各处方项下原、辅料，按等量递增的原则混合并过60 目筛3次使其充分混合均匀，加入适量粘合剂制成软材，经挤出机 挤成0.7-0.9mm细条。

3、细条经滚圆机，切割、滚圆，调节滚圆转速：50r/min-30r/min 和滚圆时间(5-7min)。干燥

4、取微丸置恒温鼓风干燥箱中，在45-50℃干燥2-3h，筛分16-24 目微九。

测定各中间体微丸含量

5测定中间体微丸含量，确定各处方微丸重量比和每粒胶囊应装微丸 总重量。

灌装与分装

6、将三种微丸混合均匀后，灌装于透明胶囊壳中。

剔瘪抛光，分装于铝塑泡罩板中，每板14粒，每盒两板。

包装与全检

7、每20盒用热缩塑料膜做成一捆，每箱装20捆，入库。

8、取样全检。

以上实施例制备的丹酚酸B，可以作为一种中药原料药和/或化 学药原料药上市，使丹参的研究达到了一个崭新的水平，一条崭新 的完全绿色化、智能化，连续化、工业化生产丹酚酸B的工艺和循 环经济的目标将成为现实。在制备丹酚酸B的方法中，药材-水的比 例，提取时间，提取次数，；树脂的种类、型号与粒径，树脂柱的径 -高比，树脂-药材(或有效成分)比等都经过严格的方法学研究， 小试工艺成熟后，又经中试放大验证制备了丹酚酸B产品，各主要 关键技术参数没有变化，唯总收率提高1％以上。本法制备的丹酚酸 B，可用于制备注射剂，如注射用丹酚酸B，丹酚酸B木糖醇注射液， 丹酚酸B氯化钠注射液，丹酚酸B葡萄糖注射液；口服固体制剂如 丹酚酸B片，丹酚酸B缓释/控释制剂、滴丸、微丸、软胶囊；复方 丹酚酸B口服制剂、眼用制剂、凝胶剂以及药学上可以接受的其他 制剂及新制剂等。丹酚酸B产品的药效与药理毒理学研究，已有一 些文献报道，具有保护心肌缺血、缺氧，改善微循环，降低血液粘 度，抑制血小板聚集，血栓形成等活血化瘀功能。小鼠静脉注射LD50 为636.8909mg·kg－1，LD50的95％可信限为617.2255～ 657.1828mg·kg－1，死亡动物尸检，各主要脏器肉眼未见明显改变， 14天后各剂量组存活小鼠体重均增加。结论是丹酚酸B原料毒性较 小。

除上述实施外，本发明还可以有其他实施方式。凡采用等同替 换或等效变换形成的技术方案，均落在本发明要求的保护范围。